蟾皮化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展

喻昌燕，孟令杰，姜 念，李三華，肖 毅，劉 云, 3*

蟾皮化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展

喻昌燕1, 2，孟令杰1, 2，姜 念1, 2，李三華1, 2，肖 毅1, 2，劉 云1, 2, 3*

1. 遵義醫(yī)科大學(xué) 貴州省普通高等學(xué)校特色藥物腫瘤防治重點實驗室，貴州 遵義 563000 2. 遵義醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)研究院，貴州 遵義 563000 3. 遵義醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，貴州 遵義 563000

蟾皮為蟾蜍科動物中華大蟾蜍gargarizans或黑眶蟾蜍的干燥全皮，已納入壯藥名錄。作為一種民族藥，常用于滿族、回族和朝鮮族的民間藥方，具有清熱解毒和利水消腫之功效。目前已從蟾皮中發(fā)現(xiàn)100多個化合物，包括蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類、吲哚生物堿類、蟾蜍環(huán)酰胺類以及甾體類等成分。隨著國內(nèi)外藥理學(xué)研究的不斷深入，蟾皮單體成分呈現(xiàn)諸多藥理作用，如抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗乙肝病毒、強(qiáng)心等，并且對特異的藥物代謝酶具有較高的敏感性。通過查閱近20年來的國內(nèi)外文獻(xiàn)，對蟾皮的化學(xué)成分、藥理活性、單體成分與藥物代謝酶的相互作用等方面進(jìn)行綜述，以期為蟾皮更好的開發(fā)和應(yīng)用提供參考。

中華大蟾蜍；黑眶蟾蜍；民族藥；蟾皮；蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類；抗腫瘤；免疫調(diào)節(jié)；藥物代謝酶

蟾皮，別名癩蟆皮、蟾蜍皮、干蟾皮、蛤蚆皮，狀語稱“能唝酬”，最早記載于《本經(jīng)逢原》，為蟾蜍科動物中華大蟾蜍gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Schneider的干燥全皮，辛，凉，微毒，經(jīng)方入藥，目的多為以毒攻毒[1-2]?！吨兴幋筠o典》記載“蟾皮能清熱解毒、利水消脹，治療癰疽、腫毒、瘰疬、腫瘤、疳積腹脹和慢性氣管”[3]。蟾皮作為一種民族藥，已納入壯藥名錄，是廣西常用特色壯、瑤藥材，民間廣泛用于治療惡性腫瘤[2]。滿族常用蟾蜍細(xì)末外敷治療疔毒瘡和臁瘡?fù)萚4]；回族則用干蟾蜍對急性炎癥進(jìn)行止痛消腫[5]；而朝鮮族直接取蟾蜍皮燒熏治療腸頭挺出[6]。蟾皮及其制品臨床應(yīng)用較為廣泛，特別是以干蟾皮為主要原料制成的水溶性制劑華蟾素為我國自行研發(fā)的二類新藥，對原發(fā)性肝癌、肺癌、食管癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤具有非常好的療效[7]。目前已從蟾皮中分離獲得100多個單體化合物，主要是蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類、吲哚生物堿類、蟾蜍環(huán)酰胺類、小分子環(huán)肽類以及甾體類等成分。隨著蟾皮有效成分研究的不斷深入，其中的單體成分在抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和強(qiáng)心等方面有顯著藥理活性。本文對蟾皮中化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展進(jìn)行梳理，為進(jìn)一步開發(fā)和利用蟾皮提供理論依據(jù)和文獻(xiàn)支持。

1 蟾皮的化學(xué)成分

蟾皮中化學(xué)成分復(fù)雜，通過分離與鑒定，已發(fā)現(xiàn)其中包含有蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類、吲哚生物堿類、蟾蜍環(huán)酰胺和小分子環(huán)肽類、甾體及其他類化合物[8-9]。

1.1 蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物

此類化合物屬于強(qiáng)心甾體類化合物，以游離型或與硫酸鹽、二羧酸酯和氨基酸在C-3位結(jié)合的形式存在，其結(jié)構(gòu)特點是C-17位連有一個α-吡喃酮基團(tuán)[10]。根據(jù)是否與有機(jī)酸相連可分為蟾蜍毒素類和蟾毒配基類，其中蟾蜍毒素類化合物只存在于新鮮的蟾皮中，經(jīng)干燥加工，蟾蜍毒素類化合物的3位酯鍵完全水解，得到相應(yīng)的蟾毒配基，部分水解則形成丁二酸（辛二酸等）蟾毒配基單酯[8]。目前，從蟾皮中已分離得到蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物90個，根據(jù)母核上取代基的不同，大致分為5類，母核結(jié)構(gòu)見圖1（I～V為母核，化合物80～90為無法歸納入母核的化合物），分離得到的化合物見表1。

圖1 蟾皮中蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物的結(jié)構(gòu)母核I～V及化合物80～90的化學(xué)結(jié)構(gòu)

表1 蟾皮中的蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物

續(xù)表1

編號化合物名稱母核取代基文獻(xiàn) 28遠(yuǎn)華蟾蜍精-3-單辛二酸酯（telocinobufagin- 3-hemisuberate）IR1＝OCO(CH2)6COOH, R3＝CH3, R4＝R6＝OH, R2＝R5＝R7＝R8＝R9＝H9, 11, 19 29遠(yuǎn)華蟾蜍精-3-琥珀酰精氨酸酯（telocinobufagin- 3-succinoyl arginine ester）IR1＝OCO(CH2)2COArg, R3＝CH3, R4＝R6＝OH, R2＝R5＝R7＝R8＝R9＝H19 30daigredorigeninIR1＝R4＝R6＝OH, R3＝CHO, R2＝R5＝R7＝R8＝R9＝H16 3116-desacetyl-19-oxocinobufotalinIR1＝R4＝R6＝OH, R3＝CH3, R2＝R5＝R7＝R8＝R9＝H16 32蟾蜍素（bufotoxin）IR1＝OCO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R6＝OH, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R7＝R9＝H12, 17, 20 33hellebritoxinIR1＝OCO(CH2)6COArg, R3＝CHO, R4＝β-OH, R6＝OH, R2＝R5＝R7＝R8＝R9＝H16-17 34telocinobufatoxinIR1＝OCO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R4＝β-OH, R6＝OH, R2＝R5＝R7＝R8＝R9＝H16-17 35bufalitoxinIR1＝OCO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R6＝OH, R2＝R4＝R5＝R7＝R8＝R9＝H16-17 363-oxo-arenobufaginIR1＝R9＝O, R3＝CH3, R5＝α-OH, R6＝OH, R2＝R4＝R7＝R8＝H13 37蟾毒它靈-3-辛二酸酯（bufotalin 3-suberate）IR1＝β-O-suberate, R3＝CH3, R6＝OH, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R7＝R9＝H13 38(3β,5β,14β,16β)-3,5,14-trihydroxy-16-(acetyloxy)- 19-oxo-bufa-20,22-dienolideIR1＝β-OH, R3＝CHO, R4＝R6＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R7＝R9＝H13 39酯蟾毒配基（resibufogenin）IIR1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H, R3＝CH38-9, 16, 21 40resibufogenin-3-sulfateIIR1＝NaO3SO, R3＝CH3, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H9 4111β-羥基-酯蟾毒配基（11β-hydroxylresibufogenin）IIR1＝R2＝R4＝R6＝R7＝R8＝H, R3＝CH3, R5＝β-OH8-9 4212β-羥基-酯蟾毒配基（12β-hydroxylresibufogenin）IIR1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R8＝H, R3＝CH3, R7＝β-OH9 43酯蟾毒配基3-琥珀酰精氨酸酯（resibufogenin- 3-O-succinoyl-arginine-ester）IIR1＝CO(CH2)2COArg, R3＝CH3, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H8-9, 14-15, 17 44華蟾毒精（cinobufagin）IIR1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H, R3＝CH3, R8＝β-OAc8-9, 11-13, 21 45去乙酰華蟾毒精（desacetylcinobufagin）IIR1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H, R3＝CH3, R8＝β-OH8-9, 11-12 46去乙酰華蟾毒精-3-琥珀酰精氨酸酯（desacetyl- cinobufagin 3-O-succinoyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)2COArg, R3＝CH3, R8＝β-OH, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H9, 14 47華蟾毒精-3-琥珀酰精氨酸酯（cinobufagin- 3-O-succinoyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)2COArg, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H8-9, 14-17 48cinobufagin-3-sulfateIIR1＝NaO3SO, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H9 49cinobufagin-3-glutaroyl arginine esterIIR1＝CO(CH2)3COArg, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H9 50華蟾毒精-3-庚二酰精氨酸酯（cinobufagin- 3-pimeloyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)5COArg, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H9 51華蟾毒精-3-辛二酰精氨酸酯（cinobufagin- 3-suberoyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H9 52華蟾毒精-3-己二酰精氨酸酯（cinobufagin 3-adipoyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)4COArg, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H9, 12, 17 53華蟾毒精-3-單辛二酸酯（cinobufagin-3-hemisuberate）IIR1＝CO(CH2)6COOH, R3＝CH3, R8＝β-OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H19 5416-O-acetylarenobufagin 3-O-suberoyl arginine esterIIR1＝CO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R4＝R7＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝H14 55華蟾毒它靈（cinobufotalin）IIR1＝R2＝R5＝R6＝R7＝H, R3＝CH3, R4＝OH, R8＝OAc8-9, 12-13 56華蟾毒它靈-3-琥珀酰精氨酸酯（cinobufotalin 3-O-succinoyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)2COArg, R3＝CH3, R4＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H14 57華蟾毒它靈-3-庚二酰精氨酸酯（cinobufotalin 3-O-pimeloyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)5COArg, R3＝CH3, R4＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H14 58華蟾毒它靈-3-辛二酰精氨酸酯（cinobufotalin 3-O-suberoyl arginine ester）IIR1＝CO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R4＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H14

續(xù)表1

編號化合物名稱母核取代基文獻(xiàn) 59去乙酰華蟾毒它靈（desacetylcinobufotalin）IIR1＝R2＝R5＝R6＝R7＝H, R3＝CH3, R4＝OH, R8＝β-OH8-9, 13 6019-oxo-cinobufotalinIIR1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H, R3＝CHO, R8＝OAc9 6119-oxo-cinobufotalin 3-adipoyl arginine esterIIR1＝CO(CH2)4COArg, R3＝CHO, R4＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H12 6219-oxo-cinobufotalin 3-O-pimeloyl arginine esterIIR1＝CO(CH2)5COArg, R3＝CHO, R4＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H14 63cinobufotalin 3-nonanedioylarginine esterIIR1＝CO(CH2)7COArg, R3＝CH3, R4＝OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H16 64cinobufotalitoxinIIR1＝CO(CH2)5COArg, R3＝CH3, R4＝β-OH, R8＝OAc, R2＝R5＝R6＝R7＝H12, 17 65resibufotoxinIIR1＝CO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H17 66cinobufotoxinIIR1＝CO(CH2)6COArg, R3＝CH3, R8＝OAc, R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝H17 67海蟾蜍精（marinobufagin）IIR1＝R2＝R5＝R6＝R7＝R8＝H, R3＝CH3, R4＝OH9, 12, 22 68異沙蟾毒精（bufarenogin）IIIR1＝R3＝H, R2＝β-OH9 69ψ-bufarenoginIIIR1＝R3＝H, R2＝α-OH9 70bufarenogin 3-O-succinoyl arginine esterIIIR1＝CO(CH2)2COArg, R2＝β-OH, R3＝H14 71bufarenogin 3-O-suberoyl arginine esterIIIR1＝CO(CH2)6COArg, R2＝β-OH, R3＝H14 7211α-hydroxybufaginIVR1＝H, R2＝OH, R3＝OAc, R4＝CH313 73de-O-acetylcinobufotalinIVR1＝R3＝OH, R2＝H, R4＝CH311 74(3β,5β,15β,16β)-3,5,10-trihydroxy-14,15-epoxy-16- (acetyloxy)-19-norbufa-20,22-dienolideIVR1＝OH, R2＝H, R3＝OAc, R4＝OH13 75(3β,5β,14β,15β,16β)-3,5-dihydroxy-10-carboxy-14,15- epoxy-16-(acetyloxy)-19-norbufa-20,22-dienolideIVR1＝OH, R2＝H, R3＝OAc, R4＝COOH13 76argentinogeninVR1＝β-OH13 77(5β,14β)-11,14-dihydroxy-3-oxo-12-oxo-bufa-9(11),20, 22-trienolideVR1＝O13 78(3α,5β,14β)-3,11,14-trihydroxy-12-oxo-bufa-9(11),20,22-trienolideVR1＝α-OH13 79(3β,5β,14β)-3-[(7-carboxy-1-oxoheptyl)oxy]-11,14-dihydroxy-12-oxo-bufa-9(11),20,22-trienolideVR1＝β-O-suberate13 80沙蟾毒精（arenobufagin） 8-9, 14, 16, 18, 22 81desacetyl-bufogargarizin A 13 82desacetyl-bufogargarizin B 13 83(3β,5α,14β,19R)-3,19-epoxy-5,14-dihydroxy-19-methoxy-bufa-20,22-dienolide 13 84(3β,5β,14β,15β,16β)-3,5-dihydroxy-14,15-epoxy-16-(acetyloxy)-19-norbufa-20,22-dienolide 13 85(3β,5α,14β)-3,5,14-trihydroxyl-19-norbufa-20,22- dienolide 13 86(5β,14β)-14-hydroxy-3-oxo-bufa-1,20,22-trienolide 13 87(14β,15β,16β)-14,15-epoxy-16-hydroxy-3-oxo-bufa-4,20,22-trienolide 13 88(2β,5β,14β)-2,5,14-tridroxyl-bufa-20,22-dienolide 22 89(3α,16β)-3,16-dihydroxy-bufa-14,20,22-trienolide 22 90(3β,5β,16α)-3,5,16-trihydroxy-bufa-14,20,22-trienolide 22

1.2 吲哚生物堿類化合物

此類化合物含有吲哚環(huán)，是神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺及其代謝產(chǎn)物，目前已從蟾皮中分離獲得11個吲哚生物堿類化合物，分別是5-羥色胺（serotonin，91）[23]、-methyl serotonin（92）[24]、-methyl serotonin（93）[24]、′-formyl serotonin（94）[24]、蟾毒色胺（bufotenine，95）[20]、5-methoxy bufotenine（96）[20]、脫氫蟾蜍色胺（dehydrobufotenine，97）[23]、蟾蜍色胺內(nèi)鹽（bufotenidine，98）[24]、去氫蟾蜍色胺氫溴酸鹽（dehydrobufoteininehydrobromide，99）[25]、蟾蜍噻嚀（bufothionine，100）[23-24]、脫氫蟾蜍噻嚀（dehydrobufothionine，101）[26]，結(jié)構(gòu)見圖2。

圖2 蟾皮中吲哚生物堿類化合物

1.3 蟾蜍環(huán)酰胺類和小分子環(huán)肽類化合物

有研究者從蟾皮中分離得到蟾蜍環(huán)酰胺類化合物，包括含有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)化合物，如蟾蜍環(huán)酰胺B（bufogargarizanine B，102）[25]和蟾蜍環(huán)酰胺D（bufogargarizanine D，104）[26]以及不含內(nèi)酯結(jié)構(gòu)化合物，如蟾蜍環(huán)酰胺C（bufogargarizanine C，103）[25]（圖3）；此外，還分離獲得環(huán)（脯氨酸-甘氨酸）二肽[cyclo(Pro-Gly)dipeptide][23]和環(huán)（丙氨酸-丙氨酸）二肽[cyclo(Ala-Ala)dipeptide][26]等小分子環(huán)肽類化合物。

圖3 蟾皮中蟾蜍環(huán)酰胺類化合物

1.4 甾體類

蟾皮中已分離得到的甾體類化合物有膽甾醇（cholesterol，105）[9,27]、β-谷甾醇（β-sitosterol，106）[27]、膽甾烯醇（cholestenol，107）[11]、膽甾烯酮（cholestenone，108）[26]、棕櫚酸膽甾烯酯（palmitic acid cholesteryl ester，109）[9,27]、Cholestane-3β,5α,6β- triol（110）[9]、3α,12β,25,26-tetrahydroxy-7-oxo-5β- cholestane 26--sulfate（111）[14]，結(jié)構(gòu)見圖4。

1.5 其他類

蟾皮中還含有腺苷、嘌呤類、嘧啶類、氨基酸、有機(jī)酸、光色素等[9,23,24,26,28]。此外，徐乃玉等[29]在中華大蟾蜍皮粉中測得鈣、鎂、鈉、錳、鐵、鋅、銅、磷、硅及銀等元素，其中以鈣最多，其次是鐵和鎂。

2 蟾皮的藥理活性

《中藥大辭典》記載“蟾皮能清熱解毒、利水消脹，治癰疽、腫毒、瘰疬、腫瘤、疳積腹脹和慢性氣管”[3]?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究表明，蟾皮具有抗腫瘤、抗乙肝病毒等藥理作用，臨床上主要用于治療乙型肝炎、慢性支氣管炎、喉嚨腫痛、癰腫疔毒等病癥[27]；還可用于治療頑固性皮膚病，如帶狀皰疹、蕁麻疹、黃褐斑、銀屑病等[30]。目前上市產(chǎn)品如華蟾素片（口服液、注射液）、華蟾素滴丸、鶴蟾片、季德勝蛇藥片等均含有蟾皮成分[31]。

2.1 抗腫瘤作用

研究表明，蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物是蟾皮中具有抗腫瘤活性的主要成分[32]，能抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移、抗血管生成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥等[10]。

2.1.1 抑制腫瘤細(xì)胞增殖 細(xì)胞增殖在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，因此控制細(xì)胞增殖對預(yù)防癌癥至關(guān)重要[33]。華蟾毒精、海蟾蜍精、蟾毒靈和酯蟾毒配基對多種腫瘤細(xì)胞具有抗增殖活性，如多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、白血病、肝癌、卵巢癌、食管鱗癌、肺癌、結(jié)腸癌等[34-37]。這類化合物主要是通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，引起細(xì)胞周期阻滯，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，但不同的化合物在不同腫瘤細(xì)胞中引起的細(xì)胞周期阻滯時期不同，如蟾毒靈將食管鱗癌細(xì)胞周期阻滯于S和G2/M期[36]；酯蟾毒配基下調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）和cyclin E蛋白，降低RB蛋白磷酸化，引起結(jié)腸癌和肺癌細(xì)胞G0/G1期阻滯[37]。ψ-bufarenogin通過G2/M期阻滯抑制肝癌細(xì)胞增殖，下調(diào)cyclin E和ki67，上調(diào)cyclin B1[38]。沙蟾毒精對食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的抗癌效果優(yōu)于蟾毒靈，且對人正常的食管鱗狀Het-1A細(xì)胞表現(xiàn)出更低的毒性，還可通過激活p53信號通路有效抑制裸鼠移植瘤生長[39]。與酯蟾毒配基作用類似，蟾蜍噻嚀亦能抑制人肝癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)小鼠肝腫瘤H22細(xì)胞壞死并抑制腫瘤生長，抑制率65.16%，通過調(diào)控線粒體介導(dǎo)的凋亡蛋白抑制肝臟腫瘤生長并保護(hù)肝臟免受急性損傷[40]。

圖4 蟾皮中甾體類化合物

2.1.2 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 蟾皮中的有效化學(xué)成分作用于腫瘤細(xì)胞后，可轉(zhuǎn)化成細(xì)胞凋亡信號，通過抑制或激活細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[33]。蟾毒靈促進(jìn)活性氧積累，上調(diào)凋亡酶激活因子（apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1）、cleaved poly ADP-ribose polymerase（PARP）、剪切型半胱氨酸蛋白酶3（cleaved caspase-3）、cleaved caspase-9和Bax/Bcl-2，靶向線粒體依賴的信號通路誘導(dǎo)骨肉瘤MG-63細(xì)胞發(fā)生凋亡[41]。華蟾毒精激活ROS/MAPKs信號通路誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞[42]和多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞[34]發(fā)生凋亡。沙蟾毒精顯著上調(diào)半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3、半胱氨酸蛋白酶-8和半胱氨酸蛋白酶-9，通過內(nèi)源性和外源性途徑激活caspase，有效誘導(dǎo)食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[39]。ψ-bufarenogin抑制受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制肝癌生長[38]。海蟾蜍精（1.25 μmol/L）引起白血病HL-60細(xì)胞染色質(zhì)凝結(jié)、核碎裂、核溶解、細(xì)胞收縮和膨脹、胞質(zhì)空泡的發(fā)生以及膜解體；降低細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致DNA斷裂[35]。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87和U373細(xì)胞中，蟾蜍噻嚀通過上調(diào)半胱氨酸蛋白酶-12、C/EBP homologous protein（CHOP）、磷酸化蛋白激酶受體樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（phospho-protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，p-PERK）、磷酸化真核翻譯起始因子2α（phospho-eukaryotic translation initiation factor 2α，p-eIF2α）和轉(zhuǎn)錄激活因子6（activating transcription factor 6，ATF6）蛋白表達(dá)，觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[43]。

2.1.3 抑制腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移 腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要特征，是一個復(fù)雜的、多因素調(diào)控的動態(tài)過程。研究發(fā)現(xiàn)，蟾皮中的有效成分可通過調(diào)控相關(guān)蛋白因子抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。蟾毒靈抑制活化的B細(xì)胞的nuclear factor-κ-light- chain-enhancer和基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2/MMP-9通路抑制肝癌SK-Hep1細(xì)胞遷移和侵襲[44]。沙蟾毒精下調(diào)β-catenin通路抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)而抑制前列腺癌PC3細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[45]。Han等[46]研究表明，酯蟾毒配基顯著降低結(jié)直腸癌HCT116細(xì)胞侵襲和遷移能力；上調(diào)上皮標(biāo)志物緊密連接蛋白和E-鈣粘蛋白的表達(dá)，并下調(diào)纖連蛋白、波形蛋白和蝸牛蛋白的表達(dá)來破壞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，以一種RIP3相關(guān)的方式抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，顯著減少小鼠脾移植MC38細(xì)胞產(chǎn)生的肝轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量和大小，最終抑制肝轉(zhuǎn)移。

2.1.4 抗血管生成 血管生成被認(rèn)為是癌癥發(fā)展和生長的關(guān)鍵，發(fā)現(xiàn)和開發(fā)有效的血管生成抑制劑是癌癥治療的重要組成部分[33]。沙蟾毒精抑制血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、血管形成和血管內(nèi)皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR-2）磷酸化，通過抑制VEGFR-2信號通路抑制VEGF介導(dǎo)的血管生成[47]。華蟾毒精在體內(nèi)下調(diào)血管生成抑制結(jié)腸癌的生長，以劑量相關(guān)方式顯著降低人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分層的新血管系統(tǒng)和破壞血管網(wǎng)絡(luò)的形成，減少低氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）的表達(dá)，誘導(dǎo)活性氧積累，下調(diào)哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）Ser2481位點和絲氨酸/蘇氨酸激酶（AKT）Ser473位點磷酸化，表明華蟾毒精抑制腫瘤新生血管形成，破壞內(nèi)皮mTOR/ HIF-1α信號通路觸發(fā)活性氧介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[48]。蟾毒靈與索拉菲尼聯(lián)用顯著抑制肝癌SMCC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤的血管生成，明顯抑制雞胚絨毛尿囊膜和大鼠主動脈環(huán)的形成以及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移和血管生成，下調(diào)與血管生成相關(guān)的多種細(xì)胞因子和VEGF，通過調(diào)節(jié)AKT/VEGF信號通路增強(qiáng)索拉菲尼的抗血管生成作用[49]。

2.1.5 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化 大多數(shù)腫瘤細(xì)胞的分化和成熟程度都低于正常細(xì)胞，這使得它們能夠快速增殖，因此，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化可能是一種降低其增殖率，減少其惡性特征的良好治療方法[32-33]。蟾毒靈是人骨髓白血病細(xì)胞分化的有效誘導(dǎo)因子，較低濃度（0.5～1.0 μmol/L）時，蟾毒靈能誘導(dǎo)白血病K562、U937、ML1和HL60細(xì)胞分化為單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞，與4'-demethylepipodophyllotoxin ethylidene-β--glucoside（VP16）、全反式視黃酸、1α,25-二羥維生素D3、重組腫瘤壞死因子-α聯(lián)用能協(xié)同誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化[50]。蟾毒靈誘導(dǎo)人單核細(xì)胞的白血病THP-1細(xì)胞分化與細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶級聯(lián)和蛋白激酶C同工酶相關(guān)[51]。

2.1.6 逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥 多藥耐藥是一種復(fù)雜的表型，多種結(jié)構(gòu)上不相關(guān)的細(xì)胞毒性化合物具有耐藥性，嚴(yán)重限制了許多常見惡性腫瘤的有效治療，其機(jī)制與P-糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白1、細(xì)胞凋亡、DNA異常修復(fù)和有機(jī)微環(huán)境等相關(guān)[33]。據(jù)報道，蟾皮中的活性成分具有逆轉(zhuǎn)某些癌細(xì)胞多藥耐藥的能力。蟾毒靈能將ATP binding cassette subfamily B member 1（ABCB1）過表達(dá)的結(jié)腸癌HCT8/ADR、LoVo/ADR和HCT8/ABCB1細(xì)胞的化學(xué)敏感性逆轉(zhuǎn)至其親本細(xì)胞水平，以劑量相關(guān)方式增加細(xì)胞內(nèi)阿霉素和羅丹明123的積累，顯著抑制ABCB1蛋白表達(dá)水平，并刺激ABCB1的ATP酶活性，增加阿霉素對ABCB1耐藥的結(jié)腸癌HCT8/ADR細(xì)胞裸鼠移植瘤的作用，表明蟾毒靈能夠有效逆轉(zhuǎn)ABCB1介導(dǎo)的多藥耐藥[52]。另有研究表明蟾毒靈在1 nmol/L時能增強(qiáng)肝癌BEL-7402/5-FU細(xì)胞的化學(xué)敏感性，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為3.8倍，顯著將細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，通過增加Bax/Bcl-xL比例誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，下調(diào)多耐藥蛋白1以抑制藥物外排泵活性，并減少胸苷酸合成酶的表達(dá)[53]。華蟾毒精也可顯著提高P-糖蛋白底物藥物對P-糖蛋白過表達(dá)結(jié)腸癌LoVo/ADR、HCT116/L和Cao-2/ADR細(xì)胞的敏感性，同時對其親本細(xì)胞無影響，顯著增強(qiáng)阿霉素對過表達(dá)P-糖蛋白細(xì)胞LoVo/ADR裸鼠移植瘤的作用，增加了化療藥物的細(xì)胞凋亡和多藥耐藥細(xì)胞內(nèi)阿霉素和羅丹明123的積累，進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)是P-糖蛋白ATP酶的非競爭性抑制，并不改變P-糖蛋白的表達(dá)[54]。

2.2 抗炎與免疫調(diào)節(jié)作用

2.2.1 抗炎作用 在癌癥相關(guān)炎癥中，主要炎性基因產(chǎn)物的表達(dá)受核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）調(diào)控。蟾皮中活性成分蟾毒靈（0.3、0.6 mg/kg）能有效抑制卡拉膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹，下調(diào)一氧化氮合成酶、環(huán)氧合酶-2、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），顯著抑制NF-κB信號通路[55]；在BALB/c小鼠哮喘模型中，蟾毒靈可減少肺組織炎性細(xì)胞浸潤和杯狀細(xì)胞增生，并抑制NF-κB和p-p65蛋白表達(dá)，提示蟾毒靈可能通過抑制NF-κB活力發(fā)揮其抗炎作用[56]。此外，吲哚烷胺類生物堿（-methyl serotonin、蟾毒色胺、脫氫蟾蜍色胺和蟾蜍噻嚀）也能通過抑制TLR4/MyD88/NF-κB和TLR4/MyD88/MAPKs信號通路發(fā)揮抗內(nèi)毒素炎癥作用[57]；蟾皮水提取物、蟾皮60%乙醇提取物和蟾毒色胺均能有效抑制脂多糖和phorbol 12-myristate 13-acetate（PMA）刺激的U937細(xì)胞促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的分泌，這與抑制NF-κB的激活有關(guān)[58]。Zhang等[24]從蟾皮親水成分中分離得到的總吲哚烷胺類生物堿在脂多糖刺激的斑馬魚胚胎中表現(xiàn)出顯著的抗炎活性；質(zhì)量濃度為50、100 μg/mL時，抗炎率分別為35%、55%，優(yōu)于陽性藥物消炎痛；其中-methyl serotonin能顯著減少中性粒細(xì)胞的數(shù)量，呈劑量相關(guān)效應(yīng)，質(zhì)量濃度為100 μg/mL時，抗炎率為60%；而蟾蜍噻嚀的抗炎活性相對較弱，質(zhì)量濃度為100 μg/mL時，抗炎率僅30%。

2.2.2 免疫調(diào)節(jié)作用 哺乳動物免疫系統(tǒng)的主要功能是監(jiān)測阻滯內(nèi)穩(wěn)態(tài)，防御病原體的入侵或感染，清除受損細(xì)胞等，包括癌癥在內(nèi)的許多疾病通常與免疫系統(tǒng)受抑制有關(guān)[33]，因此，急需增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能的藥物。研究表明，蟾皮中的蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物有增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能，蟾毒靈（5、10 mg/kg）顯著減弱哮喘模型小鼠的高反應(yīng)性，抑制氣管肺泡灌洗液中總炎癥細(xì)胞數(shù)，包括巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，通過降低血清中Th2相關(guān)細(xì)胞因子（如IL-4、IL-5、IL-13和卵清蛋白特異的IgE）的釋放來干擾Th2介導(dǎo)的免疫反應(yīng)[56]。華蟾毒精促進(jìn)小鼠淋巴細(xì)胞增殖，顯著提高CD4＋/CD8＋T細(xì)胞比例，促進(jìn)淋巴細(xì)胞從G0/G1期向S期轉(zhuǎn)化，為S期向G2/M期轉(zhuǎn)化提供必要條件；增強(qiáng)IL-2和IL-10的分泌，并提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力[59]。Wu等[60]研究顯示，華蟾毒精可通過增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)，顯著增強(qiáng)福爾馬林滅活的沙門氏菌疫苗對小鼠的保護(hù)作用；顯著促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞增殖，上調(diào)干擾素γ（infection requires interferon-gamma，IFN-γ）和一氧化氮表達(dá)，并增加沙門氏菌免疫小鼠血清中沙門氏菌特異的總免疫球蛋白G（immunoglobulin，IgG）和IgG2a的表達(dá)水平；在體內(nèi)，華蟾毒精能減少小鼠脾臟的菌落數(shù)，并延長沙門氏菌免疫小鼠感染活鼠傷寒沙門氏菌的存活時間。華蟾毒精還能有效抑制脂多糖誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞成熟和多種細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12p40）產(chǎn)生，激活caspase-1并顯著增強(qiáng)IL-1β的產(chǎn)生，上調(diào)樹突狀細(xì)胞中抗菌肽人β-防御素（human β-defensin，hBD-2）和hBD-3的基因表達(dá)，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞分泌人中性粒細(xì)胞多肽1-3（human neutrophil peptides 1-3，HNP1-3）和抗菌肽hCAP-18/LL-37，以增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的抗菌活性[61]。遠(yuǎn)華蟾毒精能增強(qiáng)小鼠對卵清蛋白的Th1免疫反應(yīng)，增強(qiáng)Th1轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA表達(dá)水平，影響IFN-γ的分泌，促進(jìn)卵清蛋白免疫的小鼠脾細(xì)胞增殖，CD3＋/CD4＋、CD3＋/CD8＋升高，證實遠(yuǎn)華蟾毒精對細(xì)胞免疫應(yīng)答有增強(qiáng)作用[62]。

2.3 抗菌與抗病毒

蟾皮總生物堿為蟾皮的抑菌活性成分之一，蟾皮總生物堿的含量隨乙醇濃度的升高而增多。王元清等[63]采用濾紙片法測定了蟾皮不同溶劑提取物的抑菌性能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，90%乙醇提取物的抑菌效果強(qiáng)于60%乙醇提取物，90%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和黑曲霉菌的最小抑菌濃度分別為1000、500、500、500 mg/mL，且抑菌活性部位具有一定的耐熱耐壓穩(wěn)定性。此外，遠(yuǎn)華蟾毒精和海蟾蜍精對大腸桿菌的最小抑菌濃度分別為64.0、16.0 μg/mL，對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度均為128 μg/mL[64]。

在乙型肝炎病毒感染期間，乙肝病毒e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）促進(jìn)免疫耐受和持續(xù)感染。Cui等[65]研究發(fā)現(xiàn)，超臨界二氧化碳蟾皮萃取物濃度低于0.01 μg/mL時對HepG2.2.15細(xì)胞無顯著細(xì)胞毒性作用，用0.1 ng/mL萃取物處理HepG2.2.15細(xì)胞6 d后，能有效抑制HBeAg和乙肝病毒核心抗原（hepatitis B core-related antigen，HBcrAg）的分泌，抑制率分別為23.36%、30.94%，均高于陽性藥物3CT（20.81%、17.38%）并且HBV mRNA表達(dá)水平也明顯受抑制。蟾毒靈給藥6 d后，在0.1 nmol/L時能顯著抑制HBcrAg分泌（抑制率19.58%），效果優(yōu)于陽性藥物3TC，對HBeAg（11.36%）的抑制作用高于HBsAg，乙肝病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg），乙肝病毒mRNA表達(dá)水平下降，但對乙肝病毒DNA無抑制作用；而華蟾毒精給藥3 d后，在1 nmol/L時對HBeAg分泌的抑制效果（8.28%）與陽性藥物3TC（100 μg/mL，7.71%）的作用相當(dāng)，對HBeAg的抑制作用高于HBsAg，乙肝病毒mRNA表達(dá)水平下降，同樣對HBV DNA無抑制作用[66]。

蟾毒色胺可通過煙堿乙酰膽堿受體的競爭性機(jī)制抑制狂犬病毒感染倉鼠腎成纖維BHK-21細(xì)胞，并呈劑量和時間相關(guān)效應(yīng)，質(zhì)量濃度為3.9 mg/mL時，感染抑制率達(dá)到100%[67]。與抗菌肽ocellatin-F1聯(lián)用，具有協(xié)同抗狂犬病病毒的作用[68]。在小鼠體內(nèi)，0.63 mg/d蟾毒色胺是抗狂犬病病毒感染的有效劑量，對動物的生理和中樞神經(jīng)系統(tǒng)不會產(chǎn)生顯著影響；高劑量（1.05和2.1 mg/d）的蟾毒色胺耐受性良好，只造成輕微的行為影響[69]。

2.4 強(qiáng)心作用

蟾皮中的蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物屬于強(qiáng)心甾類化合物，具有類似于洋地黃的強(qiáng)心作用[32]。陳才法等[70]研究表明蟾皮脂溶性成分對心肌細(xì)胞膜上Na＋-K＋ATP酶的抑制作用顯著，抑制率為44%；蟾皮水溶性成分對心肌細(xì)胞膜上Ca2＋ATP酶活性的抑制率超過了50%，對Ca2＋-Mg2＋ATP酶活性抑制率大于60%。蟾毒靈在低濃度（0.01～0.5 μmol/L）范圍內(nèi)能有效增強(qiáng)離體豚鼠的心房收縮力，并對收縮頻率及節(jié)律均無明顯影響；在高濃度（≥0.7 μmol/L）時則引起心室正常收縮以外的收縮[71]。陳立等[72]將0.133 mg/mL華蟾毒精靜脈恒速輸入到心衰家兔體內(nèi)后，家兔的左室內(nèi)壓（left intraventricular pressure，LVP）、左室內(nèi)壓最大變化速率（LVP±d/dmax）和平均動脈壓（mean artery pressure，MAP）值均明顯回升，且強(qiáng)心效力明顯強(qiáng)于毒毛旋花子苷K，除此之外，華蟾毒精的最大有效劑量、最小中毒量、最小致死量和治療指數(shù)也明顯高于毒毛旋花子苷K。

蟾皮化學(xué)成分的藥理活性見表2。

2.5 其他

蟾皮及其活性成分還具有抗癌痛[73]、升壓和抗休克[32]等藥理活性作用。朱樹寬等[30,74]將蟾皮應(yīng)用于臨床治療前列腺炎、精囊炎和精索靜脈曲張等男科疾病以及頑固性皮膚病，如帶狀皰疹、蕁麻疹、黃褐斑、銀屑病等，均取得了良好療效。

3 蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物與藥物代謝酶的相互作用

代謝是機(jī)體處置外源性物質(zhì)（藥物或毒物）的最主要方式，由一系列酶促反應(yīng)完成。在人體內(nèi)分布有幾百種結(jié)構(gòu)和功能多樣的藥物代謝酶，它們不僅是機(jī)體防御和清除外源物的重要生化屏障，同時在維系機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)代謝平衡中也發(fā)揮著重要作用[75]。人體中重要的藥物代謝酶包括細(xì)胞色素P450酶（cytochrome P450，CYP）、葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（uridine diphosphate-glucuronosyltransferase，UGT）、磺基轉(zhuǎn)移酶（sulfotransferase，SULT）和羧酸酯酶（carboxylesterase，CES）等。

CYP是I相代謝的主要酶系，主要存在于肝臟，作為終端氧化酶參與了臨床約90%藥物的代謝。Ge等[76]在對蟾蜍甾烯類系列化合物的結(jié)構(gòu)-CYP酶催化選擇性規(guī)律研究的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)，CYP3A4在蟾毒靈-5β羥化中顯示出極高的催化特異性，其催化效率比CYP3A5高出1000倍之多。CYP3A4在酯蟾毒配基-5β羥化中同樣顯示出比CYP3A5高的選擇性，CYP3A4主要介導(dǎo)5β-羥化反應(yīng)，是酯蟾毒配基在人肝臟中的主要代謝途徑，主要代謝產(chǎn)物5β-羥基酯蟾毒配基能顯著抑制肺癌A549和H1299細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對人類胚胎肺成纖維細(xì)胞毒性較弱，小鼠對其急性毒性有更強(qiáng)的耐受性[77]。蟾毒它靈在人肝微粒體中的主要代謝產(chǎn)物是5β-羥基蟾毒它靈，而CYP3A4和CYP3A5依舊是負(fù)責(zé)蟾毒它靈-5β羥化的關(guān)鍵酶[78]。此外，CYP3A還介導(dǎo)日蟾毒它靈和沙蟾毒精的代謝，具有高特異性[79]。代謝酶功能的評價及小分子-代謝酶相互作用研究均需要借助特異性探針底物。Tian等[80]通過一系列的蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物硫化作用的表征發(fā)現(xiàn)沙蟾毒精是SULT2A1酶潛在的探針底物，具有較高的敏感性和特異性，體外反應(yīng)實驗證實沙蟾毒精的硫化作用對SULT2A1酶顯示出較高選擇性，該探針被成功的用于測定人和實驗動物組織中SULT2A1酶及其同工酶的活性。楊凌等[81]以D環(huán)16位具有羥基的蟾蜍甾烯類化合物為特異性探針底物，發(fā)明了一類UGT1A3的特異性探針，借助UGT體外孵育體系開展特異性底物的UTG催化反應(yīng)，以測定各生物樣品及細(xì)胞中UGT1A3酶的活性，以期實現(xiàn)對重要藥物代謝酶UGT1A3處置藥物能力的評估。除此之外，該課題組還發(fā)明了一類蟾蜍甾烯類化合物（華蟾毒精、去乙酰華蟾毒精、酯蟾毒配基或蟾毒靈）可作為CYP3A4酶的高特異性探針底物，用于定量檢測不同來源生物樣本中CYP3A4酶活性，對體外藥物代謝研究具有重要意義[82]。

4 蟾皮在方劑中的應(yīng)用

蟾皮作為一種重要的中藥材，可經(jīng)方入藥，已知用到蟾皮的方劑主要有蟾皮片、蛤蟆膏、五色兌金丸、理氣降逆湯等。

4.1 蟾皮片[83]

處方：干蟾皮1兩。

功能主治：血虛肝旺之外陰白斑癥。

用法用量：上為細(xì)末或軋成片劑，每片1份。每服5片，日2次；或水泛為丸，每日1錢，分2次化服。

4.2 蛤蟆膏[84]

處方：干蟾皮，麻油熬，黃丹、鉛粉收，槐枝攪。

表2 蟾皮化學(xué)成分的藥理活性

功能主治：食積、痞塊、疳疾、腿腫、濕氣、瘡毒。

用法用量：貼患處。

4.3 五色兌金丸[85]

處方：白丑60 g，干蟾皮9 g，飛滑石30 g，胡黃連15 g，六神曲15 g，陳膽星15 g，川黃連9 g，黑丑、飛青黛、大黃（上三味另研為衣）雄黃各60 g，生石膏30 g（上二味另研極細(xì)為衣）。

功能主治：小兒疳積蟲痛。

用法用量：各研細(xì)末，沸水泛為小丸，每3克約300粒，以黑丑、青黛、大黃、雄黃、石膏5種藥末分別為衣，分為無色。每服0.15 g，最多不超過0.9 g，量兒之大小，體之強(qiáng)弱，斟酌用之，不宜多服。

4.4 理氣降逆湯[86]

處方：干蟾皮12 g，八月札30 g，急性子30 g，白花蛇舌草30 g，丹參15 g，瓦楞子30 g，夏枯草15 g，枸杞子30 g，紫草根30 g，苦參30 g，生馬錢子4.5 g，生南星9 g，公丁香9 g，廣木香9 g，蜣螂蟲9 g，天龍丸15粒（每次5粒，分3次吞服）

功能主治：理氣降逆，解毒辟穢。主氣滯中阻，胃逆嘔吐。（食管癌）

用法用量：水煎服，每日1劑，日服2次。

此外，在《中藥辭海》[87]中也有記載：蟾皮0.4 g，兒茶0.4 g，元胡0.2 g，研細(xì)末壓片。每次1.0 g，每日服1次。連服2周后，每次增加0.2～0.4 g，直至3周為1療程。該藥方對各型胃癌療效有差異，其中對潰瘍癌變的療效最好，對胃癌合并幽門梗阻的療效最差，胃癌患者服后能止血，止疼，促進(jìn)食欲，并有縮小瘤塊，消除腹水的效果。

5 安全性評價

蟾皮化學(xué)成分復(fù)雜，具有諸多藥理活性作用，但同時會產(chǎn)生一定的毒性。金其泉等[88]對蟾皮制劑I號（水溶性成分）和II號（水脂混合成分）的安全試驗研究發(fā)現(xiàn)I號急性毒性極低；給小鼠iv和ip II號，半數(shù)致死量分別為（3.81±0.22）、（26.27±0.31）mL/kg，I號、II號均可引起大鼠心電圖異常，但未見死亡。隨即該課題組又對華蟾素注射液開展亞急性毒性實驗，發(fā)現(xiàn)4、20 mL/kg劑量均能抑制大鼠體質(zhì)量增長[89]。另外，用華蟾素腹腔灌注治療惡性腹水時，建議單次起始最大劑量≤100 mL，對于肝功異?；颊撸m當(dāng)減少用量，并監(jiān)測其肝功變化，若天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平大于2.5～5.0 ULN時，需及時停藥并作相關(guān)處理；而局部腹腔灌注治療所引發(fā)的不良反應(yīng)較小且可耐受[90]。此外，注射用蟾皮總堿急性毒性極低；長期毒性實驗結(jié)果顯示，大鼠和Beagle犬分別高劑量（170、52 μg/kg）連續(xù)腹腔給藥3個月后腎臟尿素氮含量均高于正常值，且腎臟出現(xiàn)明顯病理改變，恢復(fù)期1個月后腎臟各項指標(biāo)恢復(fù)正常，表明注射用蟾皮總堿無明顯及長期毒性，可供臨床試用[91]。

6 結(jié)語

民族藥蟾皮含有多種活性成分且藥理作用廣泛。雖然在化學(xué)成分、藥理作用、藥物代謝、毒理學(xué)等方面的研究已取得一定成果，但仍然存在一些不足：（1）對蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類化合物的研究較多，主要集中在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒和強(qiáng)心作用的機(jī)制方面，其中體外研究較多，缺乏較系統(tǒng)的動物體內(nèi)研究以及重要的藥理學(xué)參數(shù)（如陽性或陰性對照，最小有效劑量等）；（2）蟾皮單體化合物與體內(nèi)藥物代謝酶的相互作用研究不夠深入全面；（3）在蟾皮的毒性研究中，主要針對蟾皮制劑（華蟾素）和注射用蟾皮總堿的毒性試驗，而對其發(fā)揮藥效的活性成分毒性研究較少。蟾皮制劑（華蟾素）臨床應(yīng)用療效確切，但其作用機(jī)制尚不明確，隨著分子生物學(xué)、藥物化學(xué)和藥物代謝等研究的不斷深入，可以更加科學(xué)的闡明蟾皮活性成分與藥理作用之間的關(guān)系，以便開發(fā)臨床療效更好、作用機(jī)制明確的蟾皮新劑型，促進(jìn)蟾皮在臨床上更廣泛和安全的應(yīng)用。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research progress on chemical constituents and pharmacological activities of

YU Chang-yan1, 2, MENG Ling-jie1, 2, JIANG Nian1, 2, LI San-hua1, 2, XIAO Yi1, 2, LIU Yun1, 2, 3

1. Guizhou Provincial College-based Key Laboratory for Tumor Prevention and Treatment with Distinctive Medicines, Zunyi Medical University, Zunyi 563000, China 2. Institute of Life Sciences, Zunyi Medical University, Zunyi 563000, China 3. Department of Biochemistry and Molecular Biology, Zunyi Medical University, Zunyi 563000, China

is the dry skin ofor, which has been included in the list of Zhuang medicine. As an ethnic medicine, it is often used in the folk prescriptions of Manchu, Hui and Korean nationalities, which has the effect of clearing heat and detoxification and reducing swelling. At present, more than 100 compounds have been found, including bufadienolides, indole alkaloids, bufogargarizanines, and steroids. With the development of pharmacology, the chemical constituents ofhave shown many pharmacological effects, such as anti-tumor, anti-inflammatory, immune regulation, anti-hepatitis B virus, heart strengthening, etc., which are also highly sensitive to specific drug metabolizing enzymes. In this paper, the chemical constituents, pharmacological activities, and interaction between monomer components and drug metabolizing enzymes ofin recent 20 years are reviewed in order to provide a reference for the further development and rational utilization of.

gargarizans Cantor;Schneider; ethnic medicine;; bufadienolides; antitumor; immune regulation; drug metabolizing enzyme

R282.71

A

0253 - 2670(2021)04 - 1206 - 15

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.035

2020-05-27

國家自然科學(xué)基金資助項目（81660611）；貴州省科技計劃項目（黔科合支撐[2020]4Y154）；遵義市科技計劃項目（遵市科合社字[2018]18號，遵市科合HZ字[2020]83號）；遵義醫(yī)科大學(xué)科研啟動資金項目（F-843）

喻昌燕（1991—），女，碩士，實驗師，研究方向為中藥抗腫瘤藥理。E-mail: 578087864@qq.com

劉 云（1980—），男，博士，教授，研究方向為小分子藥物的研究與開發(fā)。E-mail: liuyunzy@126.com

[責(zé)任編輯 崔艷麗]