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    響應(yīng)面設(shè)計(jì)的紫甘藍(lán)花色苷色素提取技術(shù)研究

    2021-02-25 09:32:34
    中國調(diào)味品 2021年2期
    關(guān)鍵詞:吸光甘藍(lán)花色

    盧 珊

    (鄭州電力高等??茖W(xué)校,鄭州 450000)

    花色苷是花青素與糖以糖苷鍵結(jié)合而成的化合物[1],廣泛存在于植物界中,花卉中以及水果所呈現(xiàn)的大部分紅色、藍(lán)色和紫色都是由花色苷和花青素產(chǎn)生的[2-3]?;ㄉ找蚱淦恋耐庥^廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中,如軟飲料、果醬以及乳制品等[4]。除了艷麗的顏色,花色苷對人體的健康也起到不可替代的作用。研究表明,花色苷可降低心血管疾病、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、癌癥以及與年齡有關(guān)的神經(jīng)退行性激素下降的風(fēng)險(xiǎn)[5-7]。然而,花色苷由于化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定,導(dǎo)致其從采集到提取過程中大量損失[8]。因此,花色苷的來源及提取工藝是影響其提取量的重要因素。

    紫甘藍(lán)有一個(gè)復(fù)雜的?;ㄉ漳J剑郧嘬諡槲ㄒ坏能赵猍9-10]。酰化作用使其色素具有比葡萄花色苷更強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性[11]。另外,從農(nóng)產(chǎn)品層面上講,紫甘藍(lán)在集約化農(nóng)業(yè)中,在很短的時(shí)間內(nèi)可以產(chǎn)生大量收益[12]。因此,本研究選用紫甘藍(lán)為花色苷的提取原料,通過響應(yīng)面設(shè)計(jì)選定最佳工藝,提高花色苷的提取量,為后續(xù)花色苷的相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 主要材料與儀器

    紫甘藍(lán):市售;酸性乙醇提取劑:50%乙醇∶檸檬酸為80 mL/4 g。

    美的MJ-LZ25 Easy121榨汁機(jī);HY-727SPC紫外-可見分光光度計(jì) 無錫英之誠高速分析儀器有限責(zé)任公司。

    1.2 最大吸收波長的測定

    將紫甘藍(lán)洗凈、切碎,用榨汁機(jī)打成勻漿。用分析天平準(zhǔn)確稱取5 g紫甘藍(lán)勻漿于錐形瓶中,加入40 mL酸性乙醇提取劑(50%乙醇∶檸檬酸為80 mL/4 g),混勻,在300 W功率下微波提取5 min。室溫3500 r/min離心10 min后取10 mL上清液,定容至50 mL。在325~800 nm下進(jìn)行全波長掃描,確定其最大吸收峰[13-14],最終確定其最大吸收波長為520 nm。根據(jù)查閱的文獻(xiàn)可知,花色苷的含量越高,在其特定波長下的吸光值越高,因此,本研究用A520 nm下的吸光值代表紫甘藍(lán)花色苷的提取量。

    1.3 花色苷提取的單因素試驗(yàn)

    1.3.1 微波功率對花色苷提取量的影響

    分別取5 g勻漿5份于錐形瓶中,并分別加入40 mL酸性乙醇提取劑,混勻。設(shè)置100,200,300,400,500 W 5個(gè)功率梯度[15],微波提取5 min。室溫條件下3500 r/min離心10 min后取10 mL上清液,定容至50 mL,用紫外分光光度計(jì)在其最大吸收波長處測定吸光值。在不同微波功率條件下作圖,分析不同微波功率對花色苷提取量的影響。

    1.3.2 提取時(shí)間對花色苷提取量的影響

    分別取5 g勻漿5份于錐形瓶中,并分別加入40 mL酸性乙醇提取劑,混勻,在300 W功率下分別微波提取3,6,9,12,15 min。隨后,室溫3500 r/min離心10 min后取10 mL上清液,定容至50 mL,用紫外分光光度計(jì)在其最大吸收波長處測定吸光值。在不同提取時(shí)間條件下作圖,分析不同微波提取時(shí)間對花色苷提取量的影響。

    1.3.3 料液比對花色苷提取量的影響

    分別取5 g勻漿5份于錐形瓶中,按照料液比分別為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50加入配制好的酸性乙醇提取劑[16]。300 W功率下微波提取5 min。隨后,室溫3500 r/min離心10 min后取10 mL上清液,定容至50 mL,用紫外分光光度計(jì)在其最大吸收波長處測定吸光值。對不同料液比作圖,分析不同料液比對花色苷提取量的影響。

    1.4 花色苷提取的響應(yīng)面試驗(yàn)

    在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對不同的微波功率(W)、提取時(shí)間(min)和料液比進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),用軟件分析后得到最佳的紫甘藍(lán)花色苷色素提取工藝[17],共17個(gè)處理組。響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表Table 1 The factors and levels of response surface experiment

    2 結(jié)果與分析

    2.1 微波功率對花色苷提取量的影響

    由圖1可知,在100~300 W的范圍內(nèi),隨著微波功率的升高,吸光值急劇增大,直到400 W逐漸趨于平緩,而400 W之后吸光值反而下降,說明微波功率過高可能會對花色苷具有一定的破壞性,導(dǎo)致其提取量下降。因此,最終選用400 W作為最佳微波提取功率。

    圖1 微波功率對花色苷提取量的影響Fig.1 The effect of microwave power on the extraction yield of anthocyanin

    2.2 提取時(shí)間對花色苷提取量的影響

    由圖2可知,隨著微波提取時(shí)間的延長,吸光值也逐漸增大,到9 min時(shí)達(dá)到最大值,隨后吸光度不再增長反而略有下降。通過試驗(yàn)中的觀察,微波處理12,15 min之后的溶液會出現(xiàn)絮狀物,很可能是微波時(shí)間過長導(dǎo)致紫甘藍(lán)中其他物質(zhì)溶出,從而影響了提取量。因此,最終選用9 min為最佳的提取時(shí)間。

    圖2 提取時(shí)間對花色苷提取量的影響Fig.2 The effect of extraction time on the extraction yield of anthocyanin

    2.3 料液比對花色苷提取量的影響

    由圖3可知,料液比對花色苷提取量的影響極大,當(dāng)料液比為1∶20時(shí)可以得到最佳的提取量。溶劑比例過高不僅不會提高提取量,反而使提取效果大大下降,而且會造成浪費(fèi),提高生產(chǎn)成本。因此,最終選用1∶20為最佳料液比。

    圖3 料液比對花色苷提取量的影響Fig.3 The effect of solid-liquid ratio on the extraction yield of anthocyanin

    2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)測定結(jié)果

    表2 響應(yīng)面分析試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The experimental results of response surface analysis

    表3 方差分析表Table 3 The analysis of variance of regression equation

    續(xù) 表

    由回歸分析結(jié)果得到提取率預(yù)測值對應(yīng)微波處理功率、提取時(shí)間和料液比3個(gè)因素的二次多項(xiàng)回歸方程為:Y=0.37-0.014A-0.029B-0.030C+0.010AB+8.750E-3AC-0.024BC+0.032A2+0.026B2+0.032C2。分析可知,在回歸模型顯著性檢驗(yàn)結(jié)果中,B、C、A2、B2、C2項(xiàng)的影響極顯著,A、BC項(xiàng)的影響高度顯著,AB、AC項(xiàng)的影響顯著。診斷分析表明,各因素的 F值可以反映出對試驗(yàn)響應(yīng)值的重要性,F(xiàn)值越大,表明該因素對響應(yīng)值的影響越大,對花色苷提取率的影響因素由大到小依次為C(料液比)>B(提取時(shí)間)>A(微波功率),說明各因素對紫甘藍(lán)花色苷的提取率的影響并非簡單的線性關(guān)系。決定系數(shù)R2=0.9897,說明該方程可以擬合98.97%的花色苷提取率,即花色苷提取率的變化有98.97%來自于所選的微波功率、提取時(shí)間以及料液比這3個(gè)因素。變異系數(shù)CV(%)=1.65,>0.05,說明預(yù)測值與實(shí)際值擬合度較好。RAdj2=0.9765,RPred2=0.9688 ,說明模型的擬合度和可信度較高,可以用該數(shù)學(xué)模型來模擬微波功率、提取時(shí)間以及料液比3個(gè)因素對紫甘藍(lán)中花色苷提取率的影響,以此選出最佳的提取工藝。

    2.5 雙因素對紫甘藍(lán)花色苷提取量的影響

    根據(jù)回歸模型做出的交互作用響應(yīng)面見圖4~圖6。微波功率與提取時(shí)間對花色苷提取量的影響見圖4。

    圖4 微波功率和提取時(shí)間對花色苷提取量的響應(yīng)面Fig.4 The response surface of microwave power and extraction time on anthocyanin extraction amount

    由圖4可知,在提取時(shí)間恒定時(shí),提取量隨著微波功率的增加而逐漸增大,達(dá)到最大值后,隨著微波功率的增加反而呈現(xiàn)下降的趨勢。同樣,在微波功率恒定時(shí),提取量隨著提取時(shí)間的延長呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。

    微波功率和料液比兩因素交互對紫甘藍(lán)花色苷的影響見圖5。

    圖5 微波功率和料液比對花色苷提取量的響應(yīng)面Fig.5 The response surface of microwave power and solid-liquid ratio on anthocyanin extraction amount

    由圖5可知,當(dāng)微波功率恒定時(shí),提取量隨著料液比的降低呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,同樣,在料液比保持恒定的情況下,提取量隨著微波功率的增加而逐漸增加,達(dá)到某一峰值后急劇下降。

    提取時(shí)間和料液比兩因素交互對紫甘藍(lán)花色苷提取量的影響見圖6。

    圖6 提取時(shí)間和料液比對花色苷提取量的響應(yīng)面Fig.6 The response surface of extraction time and solidliquid ratio to anthocyanin extraction amount

    由圖6可知,在提取時(shí)間恒定時(shí),提取量隨著料液比的降低而逐漸增大,而在料液比恒定時(shí),提取量隨著提取時(shí)間的延長而逐漸增大最終趨于平緩。

    以上3個(gè)響應(yīng)面圖均能直觀反映出3個(gè)因素中的2個(gè)因素對響應(yīng)值的影響,且第3個(gè)因素均保持在編碼的零水平上。根據(jù)二次多項(xiàng)式回歸方程的預(yù)測值,紫甘藍(lán)花色苷的最佳提取條件為:微波功率315.21 W,提取時(shí)間6.15 min,料液比1∶10.45。根據(jù)實(shí)際操作情況進(jìn)行調(diào)整,最終的反應(yīng)條件為:微波功率315 W,提取時(shí)間6 min,料液比1∶10。

    2.6 回歸模型驗(yàn)證試驗(yàn)

    在響應(yīng)面試驗(yàn)的優(yōu)化條件下,進(jìn)行了花色苷提取的驗(yàn)證試驗(yàn),并重復(fù)3次取平均值。最終得到的吸光值為0.494±0.006,接近于預(yù)測值的0.506,說明模型可靠。

    3 結(jié)論

    本研究通過單因素試驗(yàn)分別從微波功率、提取時(shí)間和料液比3個(gè)因素中確定影響紫甘藍(lán)花色苷提取量的最佳范圍,隨后采用響應(yīng)面設(shè)計(jì),對提取工藝進(jìn)一步優(yōu)化,最終得到最佳的提取工藝條件為:微波功率315 W,提取時(shí)間6 min,料液比1∶10。根據(jù)回歸模型的驗(yàn)證試驗(yàn),得到花色苷的吸光值為0.494±0.006,接近于預(yù)測值的0.506。

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