溴氯海因?qū)α_氏沼蝦幼體的急性毒性研究

彭 菲 徐賓朋 施偉達 徐 洋 陳雪峰

(浙江省淡水水產(chǎn)研究所，浙江 湖州 313001)

隨著羅氏沼蝦養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，高密度、集約化養(yǎng)殖已十分普遍，全國對苗種的需求量劇增，2019 年全國羅氏沼蝦苗的需求量達到400億尾。近年各地苗種企業(yè)育苗的成功率波動巨大，優(yōu)質(zhì)的種蝦和育苗技術(shù)的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)。而在育苗過程中的各個階段，羅氏沼蝦幼體會出現(xiàn)一些病害，影響羅氏沼蝦苗的出成率，從而影響羅氏沼蝦苗對各地養(yǎng)殖戶的供給，進而影響著整個羅氏沼蝦產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。為了減少病害的發(fā)生，一般會在育苗過程中選擇一些消毒劑進行使用，以起到預(yù)防病害發(fā)生的效果。正確、安全地使用消毒劑顯得尤為重要，不僅可以預(yù)防病害，提高成活率，同時還可以避免抗生素的濫用情況。本試驗選取新型消毒劑15%溴氯海因顆粒劑，對羅氏沼蝦育種過程中7 天和13 天的幼體進行處理，研究溴氯海因?qū)α_氏沼蝦兩個階段幼體的急性毒性，據(jù)此確定其安全濃度，為羅氏沼蝦育苗過程中的疾病防治提供參考數(shù)據(jù)。

一、材料和方法

1.樣本收集 羅氏沼蝦幼體來自湖州市長興縣和平鎮(zhèn)國家級羅氏沼蝦遺傳育種中心種質(zhì)庫，分別選取離體7 天和13 天的幼體。試驗用幼體均在正常育苗過程中捕撈。

2.試驗藥品 溴氯海因顆粒劑購于北京榮鼎生物科技有限公司，為純度15%、直徑≤0.05 厘米的小顆粒。

3.試驗條件 試驗在規(guī)格為1升的玻璃燒杯中進行，試驗用水為中心育苗過程中配置的人工海水，鹽度為10～12，pH 7.4～7.6。試驗場地為中心育苗車間的育苗池，同步中心育苗車間正常育苗。水溫為28～31℃，每個玻璃燒杯中投放羅氏沼蝦幼體60 尾，并放置1 個充氣頭，試驗前曝氣30分鐘。

4.試驗方法 采用半靜態(tài)急性毒性試驗法，試驗前通過預(yù)試驗確定用藥濃度范圍。試驗按照等對數(shù)間距設(shè)置7 個濃度梯度和1 個對照(表1)，同時設(shè)3個平行組(對照組為不含藥人工海水)。試驗藥物先配成高濃度母液，再按所需濃度進行潑灑添加，藥液現(xiàn)配現(xiàn)用。用藥后6小時內(nèi)連續(xù)觀察試驗蝦的中毒癥狀和死亡情況，24、48、96 小時記錄試驗幼體死亡數(shù)量，及時用吸管吸出死亡個體(以喪失游泳能力，觸碰無反應(yīng)為準(zhǔn))。試驗期間投喂少量鹵蟲無節(jié)幼體，兩個階段羅氏沼蝦幼體同步進行試驗。

表1 試驗用藥濃度 毫克/升

5.半致死濃度和安全濃度 根據(jù)24、48 小時不同藥物、不同濃度條件下受試蝦的死亡率數(shù)據(jù)，采用改進寇氏法計算24、48 小時的半致死濃度(LC50)。安全濃度(SC)根據(jù)24 小時和48 小時的半致死濃度求得，SC＝48 小時LC50×0.3/(24 小時LC50/48小時LC50)2。

二、結(jié)果

試驗開始30 分鐘內(nèi)，低濃度試驗組的幼體活動狀態(tài)與對照組基本相似，體色正常，有打堆現(xiàn)象。高濃度試驗組的幼體，在加入試驗溶液后即顯得很活躍，上下竄動，打圈；13天的幼體比7天的幼體應(yīng)激反應(yīng)更加明顯。隨著時間的推移，幼體中毒程度逐漸加重，相繼出現(xiàn)死亡，死亡率隨著試驗濃度的提高和時間的推移而增加。對照組的幼體與藥物濃度為0.5 毫克/升燒杯內(nèi)的幼體活動基本相似，1、2毫克/升燒杯內(nèi)幼體活動狀態(tài)相對前兩組稍有減弱。4 毫克/升以上的試驗組幼體基本失去平衡、游動無力，直至死亡。鏡檢幼體可發(fā)現(xiàn)身體多處充血、活動能力喪失。同步對比13 天幼體應(yīng)激反應(yīng)更加強烈，同期的游泳能力強于7天幼體的試驗組，對藥物抵抗力略高。

13 天幼體死亡數(shù)量見圖1，死亡率見表2。用改進寇氏法計算結(jié)果為：7天幼體的24小時LC50為2.97～5.52 毫克/升，48 小時 LC50為 2.76～5.31 毫克/升；13 天幼體的 24 小時 LC50為 2.81～5.28 毫克/升，48 小時 LC50為 2.65～5.31 毫克/升。SC 為0.53毫克/升。

圖1 13天幼體死亡數(shù)量

表2 兩個階段幼體的死亡率 %

三、討論

溴氯海因是一種新型的消毒劑，溴氯海因可以治療由弧菌、真菌、嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌等細菌引起的出血、爛鰓、腐皮、腸炎(李彩莧等，2006)。在實際育苗生產(chǎn)中，溴氯海因常用于預(yù)防細菌性疾病。使用后不破壞水色，可維護水體浮游生物優(yōu)良種群。與常規(guī)含氯消毒劑相比，溴氯海因受pH 影響不大，并能夠有效阻止有機物對于鹵素的消耗，同時，溴氯海因能夠降低表面張力破壞有機物保護膜，并促進鹵素與病菌蛋白分子的親和，提高消毒劑的作用效果(龔珞軍等，2007)。

15%溴氯海因?qū)α_氏沼蝦幼體的毒性常用半致死濃度(LC50)來衡量，從試驗結(jié)果看，15%溴氯海因?qū)α_氏沼蝦13天的幼體的LC50比7天的高，說明離體時間越短的溞狀幼體對消毒劑的敏感程度越高，同時，對消毒劑的耐受力也是隨著幼體的發(fā)育而增加。15%溴氯海因顆粒劑可以作為育苗過程的安全消毒劑來使用，前后兩個階段的安全濃度為0.53 毫克/升。在實際生產(chǎn)中，常用0.03～0.04 毫克/升全池遍灑，遠小于本試驗的安全濃度，但由于溴氯海因?qū)τ诓煌l(fā)育階段羅氏沼蝦幼體的敏感度差異，在使用時應(yīng)根據(jù)幼體的發(fā)育程度給出相應(yīng)的給藥方案。

溴氯海因的毒性作用研究主要集中于魚上，包括泥鰍安全濃度為4.006 毫克/升(何國森等，2014)，甌江唇■魚苗安全濃度為0.023 毫克/升(姚子亮等，2008)，麥瑞加拉鯪魚幼魚安全濃度為1.697 毫克/升(王志錚等，2007)，草魚魚苗安全濃度為4.676 毫克/升(溫茹淑等，2006)，鲇魚安全濃度為0.56毫克/升(宋文華等，2003)，從中可以得出，魚對溴氯海因敏感度存在著品種差異，安全濃度高的可以達到4.476 毫克/升，低的至0.023 毫克/升。有關(guān)溴氯海因?qū)τ谖r的毒性作用研究，僅有尹文林等(2013)在青蝦上開展了代謝動力學(xué)研究，本試驗因此填補了溴氯海因?qū)ξr的毒性作用研究的空白，具有實際應(yīng)用價值。