一株綠針假單胞菌桔黃亞種在防治番茄匍柄霉葉斑病中的應(yīng)用

黃藝爍，謝學(xué)文，石延霞，柴阿麗，李 磊，李寶聚

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

番茄匍柄霉葉斑病致病菌包括茄匍柄霉Stemphylium solaniWeber和番茄匍柄霉Stemphylium lycopersici（Enjoji）Yamamoto[1]，主要危害番茄葉片，嚴(yán)重時(shí)蔓延至莖蔓、果實(shí)。病斑初為褐色小點(diǎn)，逐漸擴(kuò)大呈圓形或近圓形，發(fā)病后期易穿孔破裂，造成嚴(yán)重?fù)p失[2]?，F(xiàn)階段該病害的防治措施主要依賴化學(xué)防治，但大量施用化學(xué)農(nóng)藥造成如農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染、菌株抗藥性等問題日益凸顯。近年來，生物防治由于其安全性及高效、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，已成為研究熱點(diǎn)[3]。

假單胞菌屬Pseudomonasspp.細(xì)菌廣泛分布于植物根際土壤，可以產(chǎn)生多種具有抑菌作用的次生代謝物，包括吩嗪類物質(zhì)、藤黃綠膿菌素（pyoluteorin，Plt）、硝吡咯菌素（pyrrolntrin，Prn）、2,4-DAPG（2,4-diacetylphloroglueinol，Phl）、脂多肽類及其衍生物等，在防治病害中發(fā)揮著重要作用[4]。此外，假單胞菌還可以產(chǎn)生植物激素IAA、嗜鐵素等物質(zhì)，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)[5]，因而受到各國(guó)研究者的關(guān)注，是國(guó)內(nèi)外研究最早、報(bào)道最多的一類生防菌[6]。多年來，有關(guān)假單胞菌屬生物防治的研究多集中在其根際促生作用上[7]，而近年來一些學(xué)者用假單胞菌成功防治了小麥[8]、草莓[9]、小白菜[10]和番茄[11]等多種植物的侵染性病害，極大地?cái)U(kuò)展了假單胞菌的應(yīng)用范圍。目前，利用生防假單胞菌防治番茄匍柄霉葉斑病鮮有報(bào)道，本研究采集番茄匍柄霉葉斑病發(fā)病地塊土壤，旨在分離獲得對(duì)番茄匍柄霉具有高效拮抗作用的菌株。

本文采用稀釋涂布平板法，從四川番茄根際土壤分離篩選到一株具有廣譜拮抗活性的生防細(xì)菌YS05，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性、Biolog測(cè)定和多基因系統(tǒng)發(fā)育樹，明確了其分類地位，初步揭示其生防作用機(jī)理。同時(shí)測(cè)定了該菌株產(chǎn)抗生素能力、揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性及在離體和活體盆栽條件下對(duì)番茄匍柄霉防治效果，為該菌株的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試番茄品種 番茄品種“齊達(dá)利”，購(gòu)于先正達(dá)生物科技（中國(guó)）有限公司。

1.1.2 供試菌株 番茄匍柄霉菌Stemphylium lycopersici（Enjoji）Yamamoto、炭疽菌Colletotrichumspp.、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、多主棒孢菌Corynespora cassiicola、辣椒疫霉菌Phytophthora capsici、立枯絲核菌Rhizoctonia solani、茄病鐮刀菌Fusarinm solani、茄鏈格孢菌Alternaria solani、西瓜殼二孢Ascochyta citrullina、密執(zhí)安棒桿菌密執(zhí)安亞種Clavibacter michiganensissubsp.michiganensis、葡萄土壤桿菌Agrobacterium vitis、丁香假單胞番茄致病變種Pseudomonas syringaepv. tomato，以上菌株均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所分離并保存。

1.1.3 供試培養(yǎng)基 King′s B培養(yǎng)基：蛋白胨20.0 g，甘油10.0 mL，MgSO4·7H2O 1.5 g，K2HPO41.5 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.0±0.2；Nutrient Broth培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g，牛肉粉 3.0 g，NaCl 5 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.0±0.2； Potato Dextrose Agar培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200.0 g，葡萄糖20.0 g，瓊脂20.0 g，蒸餾水1000 mL；WA培養(yǎng)基：5 g瓊脂，1000 mL蒸餾水。

1.1.4 供試藥劑 50%異菌脲可濕性粉劑，江蘇省蘇州富美實(shí)植物保護(hù)劑有限公司生產(chǎn)（登記號(hào)：PD20151441）；8億芽胞/g蠟質(zhì)芽胞桿菌可濕性粉劑，山東泰諾藥業(yè)有限公司（登記證：PD20094534）；80億芽胞/mL地衣芽胞桿菌水劑，廣西金燕子農(nóng)藥有限公司（登記證號(hào)：PD20140122）；46%氫氧化銅水分散粒劑，美國(guó)杜邦公司（登記證號(hào)：PD20110053）；33.5%喹啉銅懸浮劑，山東奧勝生物科技有限公司（登記證號(hào)：PD20200743）；10%多抗霉素可濕性粉劑，山東省德州祥龍生化有限公司（登記證號(hào)：PD20100857）；50%異菌脲可濕性粉劑，江蘇省蘇州富美實(shí)植物保護(hù)劑有限公司（登記號(hào)：PD20151441）。

1.2 拮抗菌株分離、純化

采集四川健康番茄植株根際土壤，采用稀釋涂布平板法[12]，將土壤樣品進(jìn)行梯度稀釋，取100 μL稀釋濃度為10-4、10-5、10-6的懸浮液涂布于KB固體培養(yǎng)基，28 ℃培養(yǎng)24 h[13]。對(duì)單菌落進(jìn)行劃線純化3～5次，待菌落形態(tài)穩(wěn)定后保存?zhèn)溆肹14]。

1.3 拮抗菌株的篩選

采用平板對(duì)峙法測(cè)定上述分離純化細(xì)菌對(duì)番茄匍柄霉的抑制率[15]。在PDA平板中心放置一個(gè)直徑5 mm的番茄匍柄霉菌餅，采用十字交叉法將5 μL OD600為0.8待測(cè)菌株菌懸液滴加距皿中心2.5 cm處，以不加待測(cè)菌株為對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)5～7 d，每處理 3次重復(fù)。待空白對(duì)照菌株生長(zhǎng)至平板邊緣進(jìn)行調(diào)查，用抑制率表示[16]。抑制率（%）＝（對(duì)照菌落直徑－處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100。

1.4 菌株YS05的鑒定

1.4.1 菌株形態(tài)特征觀察及生理生化指標(biāo)測(cè)定 使用滅菌牙簽挑取菌株YS05單菌落接種于KB固體培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)24 h。菌株形態(tài)特征觀察和生理生化指標(biāo)測(cè)定參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定書冊(cè)》[17]和《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[18]。

1.4.2 Biolog測(cè)定 挑取YS05單菌落接種至KB培養(yǎng)基試管斜面上，28 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，使用BIOLOG GENⅢ試劑盒（按照試劑盒說明書操作）對(duì)其進(jìn)行唯一碳源利用的測(cè)定。

1.4.3 菌株YS05多基因系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建 利用TIANGEN細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒，小量提取菌株YS05基因組DNA為模板，選擇16S rDNA、gyrB、rpoB和rpoD等保守基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序[19]（表1）。所得PCR產(chǎn)物由北京博邁德生物公司進(jìn)行測(cè)序。使用MEGA 7.0、Sequence Matrix、Seaview4等軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，構(gòu)建最大似然法系統(tǒng)進(jìn)化樹，分析其分類地位[14]。

表1 構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹引物信息Table 1 Primers of phylogenetic tree

1.5 菌株YS05抑菌譜測(cè)定

采用平板對(duì)峙法測(cè)定菌株YS05對(duì)9種病原真菌抑制效果，操作步驟同1.3。采用雙層培養(yǎng)法[21]測(cè)定菌株YS05對(duì)3種病原細(xì)菌抑制效果。將5 μL OD600為0.8的菌株YS05菌懸液接種在KB平板中心，28 ℃培養(yǎng)24 h后用3 mL氯仿熏蒸滅活，使用5 mL含有病原細(xì)菌的WA培養(yǎng)基作為上層。28 ℃培養(yǎng)48 h后測(cè)量抑菌圈直徑，計(jì)算抑菌率，每個(gè)處理 3次重復(fù)。抑制率（%）＝（對(duì)照菌落直徑—處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100。

1.6 菌株YS05生防機(jī)制分析

1.6.1 蛋白酶的檢測(cè) 在脫脂牛奶培養(yǎng)基中心位置接種5 μL OD600為0.8的菌株YS05菌懸液，28 ℃培養(yǎng)24 h后觀察消解圈。每個(gè)處理3次重復(fù)[22]。

1.6.2 HCN的檢測(cè) Whatman濾紙剪成5 mm×25 mm的紙條，分別稱取25 mg copper (Ⅱ) ethylacetoacetate和25 mg 4-4’-methylenebis-(N, N-dimethylaniline)溶于10 mL氯仿中，鑷子滅菌后將Whatman濾紙條在上述溶液中完全浸濕，晾干，于9 cm玻璃培養(yǎng)皿中保存?zhèn)溆肹12]。

1.6.3 抗生素耐受性測(cè)定 測(cè)定菌株YS05對(duì)10種抗生素的耐受性（表2），在15 mL無(wú)菌管中加入3 mL含抗生素KB液體培養(yǎng)基，接種1% OD600為0.8的菌株YS05菌懸液于搖菌管中，設(shè)置未加抗生素空白對(duì)照，搖培24 h，觀察菌株對(duì)抗生素的耐受性，每個(gè)處理3次重復(fù)[23]。

表2 抗生素溶液配制Table 2 Preparation of antibiotic solution

1.6.4 菌株YS05抗生素基因特異性引物擴(kuò)增 為分析菌株YS05合成抗生素能力，選擇吩嗪、2,4-DAPG、硝吡咯菌素、藤黃綠膿菌素、2-羥基吩嗪等抗生素合成基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增（表3），PCR程序和條件參照相應(yīng)文獻(xiàn)。利用熒光假單胞菌2P24作為對(duì)照，PCR產(chǎn)物測(cè)序驗(yàn)證與抗生素生物合成序列一致性[26]。

表3 抗生素基因及引物序列信息Table 3 Antibiotic gene and primer sequence information

1.7 菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性測(cè)定

取菌株YS05單菌落接種在液體KB培養(yǎng)基中，28 ℃搖培24 h，調(diào)整其OD600為0.8備用。在二分皿中加入PDA培養(yǎng)基，滅菌牙簽蘸取菌株YS05種子液平板一側(cè)劃線，對(duì)應(yīng)一側(cè)加入5 mm病原真菌菌餅，置于28 ℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，未加生防菌作為對(duì)照[27]。觀察到空白對(duì)照病原菌生長(zhǎng)至平板邊緣處進(jìn)行調(diào)查，測(cè)定病原菌生長(zhǎng)直徑并計(jì)算抑制率，每個(gè)處理重復(fù)3次。抑制率（%）＝（對(duì)照菌落直徑－處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100。

1.8 菌株YS05與6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效測(cè)定

采用貼菌片法測(cè)定菌株YS05和其他6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效，測(cè)定步驟參照文獻(xiàn)[28]，將5 mm真菌菌餅置于番茄葉片正面，28 ℃、光暗交替條件下培養(yǎng)3 d。使用OD600為0.8的菌株YS05菌懸液稀釋100倍后噴霧接種于含真菌菌餅的番茄葉片上，清水作為空白對(duì)照，選擇6種對(duì)照藥劑測(cè)定對(duì)番茄匍柄霉離體防效。每個(gè)處理6個(gè)葉片，3次重復(fù)。處理后7 d調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。按照《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》中的病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，病情按病斑面積占葉片比例分級(jí)：0級(jí)為 0；1級(jí)為1%～5%；2級(jí)為6%～10%；3級(jí)為11%～25%；4級(jí)為26%～50%；5級(jí)為50%以上[29]。病情指數(shù)＝∑（各級(jí)病葉數(shù)×病級(jí)數(shù)）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高病級(jí)數(shù)）×100，防治效果（%）＝（對(duì)照組病情指數(shù)－處理組病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100。

1.9 菌株YS05防治番茄匍柄霉活體盆栽防治效果測(cè)定

采用噴霧接種法將15 mL濃度為1×108cfu/mL的番茄匍柄霉菌懸液接種于5片真葉的番茄幼苗上，于28 ℃下保濕24 h后，將OD600為0.8的菌株YS05菌懸液稀釋100倍后，噴霧接種于處理植株，以50%異菌脲可濕性粉劑和清水作為對(duì)照。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)處理8棵番茄幼苗，病情指數(shù)和防治效果計(jì)算方法參照1.8。

1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2016軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和繪圖，采用SPSS 20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗菌株的分離篩選

從四川健康番茄根際土壤中共分離獲得236株細(xì)菌，利用平板對(duì)峙法獲得23株對(duì)番茄匍柄霉具有抑制效果的拮抗細(xì)菌，對(duì)其編號(hào)為YS01～YS23。試驗(yàn)結(jié)果表明，23株拮抗細(xì)菌對(duì)番茄匍柄霉具有一定的抑制效果，菌絲生長(zhǎng)被抑制，其中菌株YS05抑制效果最高，抑制率達(dá)68.91%（表4）。

表4 23株假單胞菌對(duì)番茄匍柄霉拮抗效果測(cè)定Table 4 Inhibition rate of 23 strains of antagonistic bacteria against Stemphylium lycopersici in tomato

2.2 菌株YS05的鑒定

菌株YS05在KB平板中正面呈現(xiàn)乳白色，背面為淡黃色，電鏡下觀察菌株形態(tài)為桿狀，鞭毛單個(gè)極生，大小為（0.8～1.1）μm×（1.2～2.7）μm（圖1）。Biolog測(cè)定菌株YS05可利用α-D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖等碳源，不可利用3-Methyl 葡萄糖、肌苷、D-山梨醇、D-甘露醇等碳源。菌株YS05生理生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果表明，菌株YS05的耐鹽性、明膠液化、V-P反應(yīng)、淀粉水解和硝酸鹽還原利用等試驗(yàn)結(jié)果與綠針假單胞菌HL5-4和綠針假單胞菌Pa40的反應(yīng)特征一致，初步確定其為綠針假單胞菌屬細(xì)菌（表5）。

圖1 菌株YS05形態(tài)特征觀察Fig. 1 Observation on morphological of strain YS05

表5 生理生化特征鑒定結(jié)果Table 5 The physiological and biochemical reaction of bacterial strain YS05

經(jīng)PCR擴(kuò)增后，得到菌株YS05 16S rDNA、gyrB、rpoB和rpoD基因序列，構(gòu)建YS05多基因系統(tǒng)進(jìn)化樹，該菌株與綠針假單胞菌桔黃亞種模式菌株P(guān). chlororaphissubsp.aurantiacaLMG 21630聚在一個(gè)分支。結(jié)合形態(tài)和生理生化特征，鑒定菌株YS05屬于綠針假單胞菌桔黃亞種（圖2）。

圖2 菌株YS05基于16S rDNA、gyrB、rpoB和rpoD基因序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 2 Phylogenetic tree based on 16S rDNA, gyrB, rpoB and rpoD gene sequences of strain YS05

2.3 菌株YS05抑菌譜的測(cè)定

菌株YS05可以有效抑制灰葡萄孢菌、多主棒孢菌、辣椒疫霉、立枯絲核菌、炭疽菌、茄鏈格孢菌和番茄匍柄霉菌等7種真菌抑制率大于50%，對(duì)茄病鐮刀菌和西瓜殼二孢抑制率分別為21.4%和7.73%。菌株YS05對(duì)病原細(xì)菌也有較好的抑制效果，對(duì)丁香假單胞番茄致病變種和葡萄根癌菌抑菌率均在50%以上（表6）。

表6 菌株YS05對(duì)病原菌的抑菌效果Table 6 The effects of strain YS05 on pathogens

2.4 菌株YS05生防機(jī)制分析

菌株YS05在脫脂牛奶培養(yǎng)基中有透明圈產(chǎn)生（圖3A）；接種菌株YS05離心管中試紙條變藍(lán)（圖3B），證明其代謝產(chǎn)物中含有蛋白酶和HCN。菌株YS05對(duì)氨芐青霉素、氯霉素、萬(wàn)古霉素、羧芐青霉素、鏈霉素、奇霉素等抗生素耐受，對(duì)卡那霉素、利福平、四環(huán)素、慶大霉素等4種抗生素不耐受?？股靥禺愋砸颬CR擴(kuò)增結(jié)果表明，菌株YS05含有編碼合成吩嗪-1-羧基（phenazine-1-carboxilic acid, PCA），硝吡咯菌素（pyrrolnitrin, Pln）基因，未擴(kuò)增出2,4-DAPG（2, 4-diacetylphloroglucinol, DAPG）、藤黃綠膿菌素（pyoluteorin, Plt）和2-羥基吩嗪（2-hydroxylated phenazine, 2-OH-PHZ）基因（圖3C）。

圖3 菌株YS05生防機(jī)制分析Fig. 3 Analysis of biocontrol mechanism of strain YS05

2.5 菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性測(cè)定

測(cè)定菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)病原真菌抑制效果結(jié)果表明，菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)立枯絲核菌和西瓜殼二孢效果較好，抑制率分別為43.95%和49.53%，而對(duì)茄病鐮刀菌抑制率較低為10.43%（表7）。

表7 菌株YS05揮發(fā)性物質(zhì)抑制效果Table 7 Inhibitory effect of volatile compounds of strain YS05

2.6 菌株YS05與6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效

菌株YS05菌懸液和6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片的防治試驗(yàn)結(jié)果表明，7個(gè)處理的病情指數(shù)均顯著低于清水對(duì)照，菌株YS05菌懸液稀釋100倍液后，對(duì)番茄匍柄霉葉斑病防治效果達(dá)到71.52%，顯著高于其他6種藥劑防治效果（P＜0.05）（表8）。

表8 菌株YS05與6種藥劑對(duì)番茄匍柄霉離體葉片防效Table 8 Control efficiency of YS05 strain against gray leaf spot of tomato

2.7 菌株YS05防治番茄灰葉斑匍柄霉活體盆栽防治效果

清水對(duì)照處理接種番茄匍柄霉菌7 d后葉片上出現(xiàn)明顯的病斑，菌株YS05菌懸液稀釋100倍液后，對(duì)番茄匍柄霉葉斑病的防治效果達(dá)到61.27%，顯著高于藥劑對(duì)照50%異菌脲可濕性粉劑處理防效57.68%（P＜0.05）（表9）。

表9 菌株YS05對(duì)番茄匍柄霉盆栽防效測(cè)定Table 9 Control efficiency of strain YS05 against gray leaf spot of tomato by potted test

3 討論

本研究從四川健康番茄植株根際土壤中分離到一株對(duì)番茄匍柄霉菌具有良好拮抗效果的生防細(xì)菌YS05，經(jīng)鑒定屬于綠針假單胞菌桔黃亞種。綠針假單胞菌桔黃亞種屬于假單胞菌屬、綠針假單胞菌種細(xì)菌[30]，

據(jù)報(bào)道綠針假單胞菌桔黃亞種對(duì)多種植物病害均有較好的防治效果。Jiao等[12]分離獲得一株綠針假單胞菌桔黃亞種Pa40，可有效控制小麥紋枯病致病菌禾谷絲核菌Rhizoctonia cereali的生長(zhǎng)；Rovera等[31]發(fā)現(xiàn)綠針假單胞菌桔黃亞種SR1可有效地抑制大豆炭腐病Macrophomina phaseolina的發(fā)生，并顯著增加大豆莖、根長(zhǎng)度及莖和根的干重；Hu等[32]從小麥田中分離獲得一株可高產(chǎn)PCN的菌株P(guān)cho10，可防治小麥赤霉病Fusarium graminearum。本研究發(fā)現(xiàn)，菌株YS05對(duì)9種病原真菌和3種病原細(xì)菌在離體條件下均有抑制效果，已報(bào)道綠針假單胞菌常用于防治真菌性病害，鮮有對(duì)細(xì)菌性病害具有防治效果，因此該生防菌具有一定的開發(fā)潛力。

生防菌防治植物病害主要的作用機(jī)理為抗生作用、營(yíng)養(yǎng)和位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)及誘導(dǎo)植物抗性等[33]。不同的菌株產(chǎn)生的抗生素的種類和數(shù)量可能會(huì)不同，因此不同的假單胞菌對(duì)不同的病原菌具有抑制活性，且抑制程度也不相同[34]。綠針假單胞菌Pa40含有編碼參與吩嗪-1-羧酸、2-羥基吩嗪和硝吡咯菌素等合成基因[12]；菌株2P24和CPF-10中均可擴(kuò)增到抗生素2,4-DAPG[12]；假單胞菌M18可分泌吩嗪-1-羧酸PCA，有效抑制黃瓜枯萎病菌及多種植物病原菌菌絲的生長(zhǎng)[35]。本研究中菌株YS05擴(kuò)增到含有編碼吩嗪-1-羧酸和硝吡咯菌素等合成基因，結(jié)合菌株全基因組測(cè)序結(jié)果，使用antismash比對(duì)發(fā)現(xiàn)該菌株有18個(gè)次生代謝物合成基因簇（數(shù)據(jù)未發(fā)表），從基因?qū)用嫔辖忉屃嗽摼昕捎行б种贫喾N病原菌的原因。

目前，微生物揮發(fā)性物質(zhì)的研究仍處于發(fā)展階段，郭潔心等[36]利用平板對(duì)扣法測(cè)定解淀粉芽胞桿菌XJ5揮發(fā)性化合物可有效抑制蘋果褐腐病菌Monilinia fructigena等多種病原菌病斑擴(kuò)展和菌絲生長(zhǎng)；楊藝煒等[37]從土壤樣品中篩選出一株綠針假單胞菌 XF10，其揮發(fā)性代謝產(chǎn)物可有效抑制煙草黑脛病菌菌絲的生長(zhǎng)；馮福山等[38]測(cè)定枯草芽胞桿菌4種揮發(fā)性化合物對(duì)油茶病原真菌均具有較好的抑菌活性，抑菌活性壬醛＞苯甲醛＞3-甲基-4-苯基吡唑＞苯丙噻唑。本研究采用二分皿法測(cè)定了綠針假單胞菌桔黃亞種 YS05揮發(fā)性物質(zhì)對(duì) 8種病原菌的抑制效果，均具有一定的抑制效果，后續(xù)將采用頂空固相微小萃取技術(shù)（HS-SPME）和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對(duì)其揮發(fā)性物質(zhì)成分進(jìn)行分析，為該菌株的開發(fā)提供理論依據(jù)。

番茄匍柄霉葉斑病由于其發(fā)病機(jī)制和宿主抗病機(jī)理不明確[39]，缺乏抗性基因和有效的化學(xué)防治措施[40]，給農(nóng)戶造成了嚴(yán)重的損失。生物防治由于綠色無(wú)污染、持效期長(zhǎng)等特點(diǎn)而被廣泛接受。李新宇等[15]測(cè)定枯草芽胞桿菌ZF161對(duì)番茄匍柄霉葉斑病盆栽防效達(dá)63.27%，本研究通過番茄離體葉片和活體盆栽試驗(yàn)測(cè)定綠針假單胞菌YS05對(duì)番茄匍柄霉葉斑病防治效果分別達(dá)到71.52%和58.27%，其中離體葉片防效均高于對(duì)照藥劑，表明其具有良好的生防潛力。