宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40的表達(dá)及其臨床意義

胡小秋 鄭琴 徐鋮

宮頸癌約占女性生殖器官惡性腫瘤的50%以上，其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌約占宮頸癌的75%～80%左右[1]。中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者臨床治療效果及預(yù)后較差，而腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的關(guān)鍵因素。p63 與腫瘤細(xì)胞的遷移密切相關(guān)[2]。p40 是鑒別宮頸鱗癌的一個(gè)重要標(biāo)志物[3]，本次研究旨在探討宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63 和p40的表達(dá)及其與宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年6 月至2020年6 月期間臺州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）恩澤醫(yī)院手術(shù)切除的宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本83 例，年齡37～69 歲，平均年齡（58.62±9.51）歲；臨床分期：Ⅰ期26 例、Ⅱ期35 例、Ⅲ期22 例；分化程度：低分化28 例、中分化34 例、高分化21 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27 例。納入標(biāo)準(zhǔn)為：①經(jīng)病理檢查首次確診為宮頸鱗狀細(xì)胞癌；②手術(shù)前未接受過放化療治療；②患者病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①合并其他惡性腫瘤者；②手術(shù)前已接受過放化療治療者；③病歷資料不全者。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色法檢測p63 和p40 的表達(dá) 將收集的石蠟包埋組織制成厚度為2 μm 的石蠟切片，經(jīng)常規(guī)脫蠟及水化后，浸泡于3%過氧化氫溶液中滅活10 min，再加入檸檬酸鹽緩沖液加熱至100 ℃，維持20 min 左右，以進(jìn)行抗原修復(fù)，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，待切片徹底冷卻后，按照鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法組織化學(xué)試劑盒（由北京中杉金橋公司生產(chǎn)）說明書進(jìn)行操作，5%羊血清室溫孵育15 min，頃去，勿洗，滴加兔抗人p63和兔抗人p40抗體（由美國Cell Signaling Technology公司生產(chǎn)），4 ℃過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次5 min，滴加生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗，37 ℃孵育30 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次5 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色5 min，經(jīng)自來水充分沖洗后，使用蘇木精復(fù)染，脫水、中性樹脂封片。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果由2 名病理科醫(yī)生采用盲法進(jìn)行判定。陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞核著色為棕黃色至棕褐色染色為陽性細(xì)胞。在100 倍放大視野下隨機(jī)選取5 個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，其中陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度分級：無色計(jì)0 分、淡黃色計(jì)1 分、棕黃色計(jì)2 分、棕褐色計(jì)3 分；陽性細(xì)胞數(shù)：＜5%計(jì)0 分、5%～25%計(jì)1 分、26%～50%計(jì)2分、＞50%計(jì)3分，將2 項(xiàng)得分相乘作為標(biāo)本免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：0 分為陰性，1～3分為弱陽性，≥4 分為陽性。

1.3 評價(jià)指標(biāo) 分析p63和p40在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)狀況，并分析宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系以及二者之間的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.00 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。設(shè)P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p63和p40在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況 在83 例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，呈p63弱陽性或陽性表達(dá)者65 例，陽性率為78.31%，呈p40 弱陽性或陽性表達(dá)者72 例，陽性率為86.75%，二者均呈弱陽性或陽性表達(dá)者53 例，陽性率為63.86%，二者均呈陰性表達(dá)者10 例，陰性率為12.05%。p63 和p40在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)見圖1。

圖1 p63和p40在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)（蘇木精-伊紅染色，×200倍）（內(nèi)文見第23頁）

2.2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系見表1

表1 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系/例（%）

續(xù)表表1 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系/例（%）

由表1可見，不同年齡、部位的宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者組織中p63 和p40 的陽性表達(dá)無明顯差異性（χ2分別=1.17、1.75、0.52、0.71，P均＞0.05），但不同腫瘤大小、臨床分期、分化程度、肌層浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤、宮旁浸潤的患者組織中p63和p40的陽性表達(dá)存在顯著性差異（χ2分別=5.72、23.14、13.10、43.40、53.99、61.36、62.43、6.57、33.73、7.36、35.85、35.87、22.13、50.02，P均＜0.05）。

2.3 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40表達(dá)的相關(guān)性 通過免疫組織化學(xué)染色評分計(jì)算出宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63表達(dá)平均分為（2.08±0.58）分，p40表達(dá)平均分為（3.54±0.79）分，Pearson相關(guān)性分析顯示，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63 與p40 的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.96，P＜0.05）。

3 討論

近年來盡管隨著宮頸癌早期篩查的廣泛應(yīng)用部分患者可以在發(fā)病早期即被發(fā)現(xiàn)，但宮頸鱗狀細(xì)胞癌較易發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移[4]，因此，研究宮頸鱗狀細(xì)胞癌浸潤及轉(zhuǎn)移的機(jī)制對于提高宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床診治意義重大。

p63是p53家族中一員，其是調(diào)控表皮細(xì)胞進(jìn)行早期分化的重要因素之一[5]，其作為宮頸鱗狀細(xì)胞癌的免疫組織化學(xué)鑒別檢測指標(biāo)已得到部分學(xué)者們的認(rèn)可。由于p63對宮頸鱗狀細(xì)胞癌的診斷特異度和靈敏度并不十分理想[6]，因此，探尋其他更為有效的分子標(biāo)志物顯得尤為重要。p40 是p63 蛋白的一種亞型，其在標(biāo)記鱗狀上皮時(shí)具有較高的特異性[7]。因此，本次研究分析了宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63和p40的表達(dá)，結(jié)果顯示，在83 例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，p40 的陽性率（86.75%）高于p63 的陽性率（78.31%），且二者均呈弱陽性或陽性表達(dá)者53 例，陽性率為63.86%，表明p63 和p40 在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中均有較高的陽性表達(dá)率，且p40 的陽性表達(dá)率更高。

近年來，有研究顯示上皮腫瘤患者組織中p63表達(dá)降低與不良預(yù)后有關(guān)[8]。另有研究顯示宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中低水平的p63可導(dǎo)致宮頸鱗狀細(xì)胞癌惡性程度的進(jìn)展[9]。但目前有關(guān)p40 與宮頸鱗狀細(xì)胞癌關(guān)系的研究極少。因此，本次研究進(jìn)一步分析了p63 和p40 表達(dá)與患者臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果顯示不同年齡、部位的宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者組織中p63 和p40 的陽性表達(dá)率無明顯差異性（P均＞0.05），但不同臨床分期、分化程度、肌層浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤、宮旁浸潤的患者組織中p63 和p40 的陽性表達(dá)率存在顯著性差異（P＜0.05），表明p63 和p40 的表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者的疾病惡性程度有關(guān)，其機(jī)制可能是由于p63 和p40 的表達(dá)上調(diào)促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而使腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移能力，進(jìn)而增加了治療細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。而且本次研究中p63 的研究結(jié)果與嚴(yán)浩等[10]和Zhang等[11]的研究結(jié)果相符。本次研究相關(guān)性分析顯示，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p63 與p40 的表達(dá)水平呈正相關(guān)（P＜0.05），表明p63 與p40 可能通過某種途徑協(xié)同調(diào)控宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生及發(fā)展過程，但具體相關(guān)途徑有待今后進(jìn)一步深入探討。

綜上所述，p63和p40在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中具有較高的陽性表達(dá)率，與患者的疾病惡性程度有關(guān)，且二者表達(dá)呈正相關(guān)，有助于宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床鑒別診斷。存在的不足之處是納入的樣本量有限，今后會(huì)擴(kuò)大樣本量以進(jìn)一步驗(yàn)證p63和p40在宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床鑒別診斷中的作用。