乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平檢測(cè)及其臨床意義

駱小娟，龍先瓊，陳 輝

(1.湛江市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 湛江 524000；2.湛江市第四人民醫(yī)院腫瘤科，廣東 湛江 524000)

癌胚抗原屬酸性糖蛋白，是一種靈敏度較高的血清腫瘤標(biāo)記物，在胃癌、肺癌、大腸癌以及乳腺癌等癌癥中表達(dá)明顯，臨床常用于乳腺癌高危人群的篩選，可預(yù)測(cè)患者的5年生存率趨勢(shì)[1-2]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子為一種促脈管生成因子，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關(guān)，幾乎所有實(shí)體腫瘤如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)直腸癌以及肝癌等的組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)顯著升高[3-4]。已有的研究表明，癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展也有聯(lián)系密切，兩者在蛋白和RNA水平均在癌組織中高表達(dá)，且與乳腺癌的轉(zhuǎn)移相關(guān)，是乳腺癌預(yù)后的重要分子[5-6]。目前對(duì)乳腺癌中癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的檢測(cè)多使用免疫組織化學(xué)染色和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)，操作較為復(fù)雜，影響最終結(jié)果準(zhǔn)確性的不可控因素較多。如能直接從患者血清檢測(cè)，將提高癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在乳腺癌臨床中的應(yīng)用。因此，本研究主要觀察了乳腺癌患者癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平及其治療前后的變化，并探討兩者與乳腺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，為癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的臨床應(yīng)用提供更多可參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料：篩選我院2017年3月～2019年3月收治原發(fā)浸潤(rùn)性乳腺癌女性患者75例為乳腺癌組，年齡52～70歲，平均(59.44±8.30)歲；病理類(lèi)型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌、黏液性腺癌分別為40例、33例、2例；TNM 分期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為10例、34例、27例、4例；選擇同期在我院進(jìn)行健康體檢且無(wú)乳腺疾病的女性50例為對(duì)照組，年齡50～65歲，平均(58.93±9.49)歲。兩組研究對(duì)象的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究的納入對(duì)象和過(guò)程均得到我院倫理委員會(huì)的同意。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《乳腺腫瘤學(xué)》[7]擬定，且通過(guò)術(shù)后病理確診；乳腺癌臨床病理特征根據(jù)《乳腺癌臨床實(shí)踐指南》[8]擬定，標(biāo)本經(jīng)過(guò)病理科醫(yī)師審核。

入組標(biāo)準(zhǔn)：①滿(mǎn)足以上乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡為20～70歲的女性患者；③在就診之前未給予輔助性治療；④病歷資料完整；⑤初治患者；⑥腫瘤為單側(cè)、單發(fā)；⑦患者及其家屬對(duì)本研究知情，簽署《知情同意書(shū)》。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①有乳腺癌病史者；②存在嚴(yán)重心臟、肝腎、自身免疫性等疾?。虎鄞嬖谄渌?lèi)型腫瘤者；④炎性乳腺癌；⑤存在導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤等其他乳腺疾病。

1.2研究方法

1.2.1血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子含量檢測(cè)：①血清采集：抽取乳腺癌組和對(duì)照組研究對(duì)象的外周血于無(wú)菌干燥管內(nèi)，立即在4 ℃以3 000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，將上層血清收集冷藏備測(cè)。②主要試劑、儀器：癌胚抗原試劑盒由上海喬羽生物科技有限公司提供(批號(hào)為QY-VN5988)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子試劑盒由上海晶抗生物工程有限公司提供(批號(hào)為JKSJ-2102)；檢測(cè)采取全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀(型號(hào)為AT2010M367428，TECAN 公司)。③應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)，參照以上試劑盒說(shuō)明書(shū)給予具體操作：將采集的血清加入酶聯(lián)免疫試劑盒的96 孔板內(nèi)，體積100 μl/每孔，室溫處理2 h；移液器吸棄液體，不洗，每孔加試劑A(體積為100 μl)，室溫處理1 h；吸棄液體，采用洗脫液洗3次，2 min/次，吸干液體；每孔加試劑B(體積為100 μl)，室溫處理30 min；吸棄液體，采用洗脫液洗5次，2 min/次，吸棄液體；每孔加90 μl底物溶液，室溫處理20～25 min；每孔加入50 μl終止溶液，終止反應(yīng)；在酶標(biāo)儀上在450 nm波長(zhǎng)下調(diào)節(jié)并讀取吸光度值。

1.2.2治療方法：根據(jù)《乳腺癌診療規(guī)范(2011年版)》[9]進(jìn)行治療；臨床分期屬Ⅰ期、Ⅱ期、部分Ⅲ期且無(wú)手術(shù)禁忌者，進(jìn)行乳腺癌改良根治術(shù)并在術(shù)后給予放化療；晚期乳腺癌者進(jìn)行新輔助化療，如給予含蒽環(huán)類(lèi)和(或)紫杉類(lèi)藥物的化療方案。

2 結(jié)果

2.1兩組入院時(shí)血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較：入院時(shí)乳腺癌組患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 兩組入院時(shí)血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較

2.2乳腺癌患者治療后血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較：治療后，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 乳腺癌患者治療后血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較

2.3乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系：乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與患者的人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2)狀態(tài)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P<0.01)，而與年齡、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

乳腺癌早期癥狀隱匿，當(dāng)患者確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期。探尋一種便捷、有效的乳腺癌早期篩查方法對(duì)該病的臨床診斷、治療具有重要的臨床價(jià)值[10]。目前臨床對(duì)乳腺癌常采取影像學(xué)觀察、血液檢測(cè)、病理學(xué)檢查等手段，其中病理學(xué)檢查技術(shù)操作復(fù)雜且有侵入性等特點(diǎn)，影像學(xué)檢測(cè)常出現(xiàn)假陰性體征[11]。血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定已廣泛用于乳腺癌的臨床篩查，其效果也獲得越來(lái)越多的肯定[12-13]。

癌胚抗原是一種多糖蛋白復(fù)合物，通常存在于正常胎兒消化道內(nèi)皮細(xì)胞，含量甚少，患癌后大量增加，首先發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌組織中，雖然癌胚抗原升高常見(jiàn)于胃腸道惡性腫瘤，但在乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中也明顯增加[14-15]。癌胚抗原可由腫瘤細(xì)胞分泌或脫落，或者機(jī)體對(duì)腫瘤反應(yīng)而產(chǎn)生并進(jìn)入到體液、組織，引起其高表達(dá)[16]。文獻(xiàn)報(bào)道了乳腺癌患者體內(nèi)癌胚抗原的表達(dá)顯著高于正常人群，癌胚抗原的表達(dá)程度對(duì)乳腺癌的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)以及臨床預(yù)后評(píng)價(jià)具有重要臨床意義[5]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是腫瘤血管形成的血管生成因子，可特異性結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞表面受體，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂，增加血管的通透性，使得纖維蛋白原與血漿蛋白等外滲，從而引發(fā)腫瘤間水腫，形成細(xì)胞外基質(zhì)變化，進(jìn)而加劇了腫瘤的轉(zhuǎn)移狀況[17-18]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子也能夠促進(jìn)間質(zhì)膠原酶、蛋白水解酶等的生成，間接促進(jìn)血管的生成[18]。研究發(fā)現(xiàn)，浸潤(rùn)性乳腺癌患者血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子含量顯著高于健康女性，且與乳腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[19]。惡性腫瘤組織包括乳腺癌組織的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子高表達(dá)是一項(xiàng)臨床預(yù)后預(yù)測(cè)的獨(dú)立因子[20]。但也有學(xué)者認(rèn)為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與乳腺癌的臨床病理特征并不相關(guān)，能否作為臨床預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)尚待驗(yàn)證[21]。

本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，取材、操作便捷，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的可實(shí)施強(qiáng)。研究結(jié)果顯示，入院時(shí)乳腺癌組患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子顯著高于對(duì)照組，表明癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子作為癌基因在乳腺癌患者血清中的水平升高；治療后，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平顯著降低，說(shuō)明癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子能有效反映乳腺癌患者的治療效果。筆者的研究還發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與患者的HER-2狀態(tài)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，而與年齡、腫瘤直徑無(wú)關(guān)；以上結(jié)果再次證實(shí)了癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可能在乳腺癌的病情發(fā)展和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移中起到重要作用。

綜上所述，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平明顯升高，與HER-2狀態(tài)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)相關(guān)，可作為評(píng)價(jià)臨床療效的指標(biāo)之一。