可溶性B7-H4對系統(tǒng)性紅斑狼瘡和疾病活動的診斷價(jià)值

俞大亮 傅艷平 李浪 陳飛 李六生 李玉斌

三峽大學(xué)人民醫(yī)院，宜昌市第一人民醫(yī)院腎內(nèi)科（湖北宜昌443000）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種多發(fā)于青年女性、累及多臟器以及抗體形成的自身免疫性炎癥性結(jié)締組織病。腎臟受累是SLE 最常見的并發(fā)癥及死亡原因之一，是影響SLE 預(yù)后的重要因素。目前病因未明，研究表明T 細(xì)胞免疫耐受機(jī)制的破壞參與了SLE 的進(jìn)展［1-3］。

B7-H4 是一種負(fù)向調(diào)控T 細(xì)胞的共刺激分子，主要抑制CD4+T 細(xì)胞的活化、增殖以及TNF 等炎癥因子的產(chǎn)生，其主要表達(dá)于腎臟、骨骼肌、膀胱等非淋巴樣組織中。B7-H4 參與了自身免疫病以及感染性疾病的發(fā)生發(fā)展。B7-H4 在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)以及診斷價(jià)值已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)，可溶性B7-H4（sB7-H4）可作為其疾病活動標(biāo)志物之一［4］。另外sB7-H4 在病毒性心肌炎患者中表達(dá)明顯升高［5］。目前B7-H4 在SLE 中的作用研究較少，B7-H4 缺陷的狼瘡小鼠出現(xiàn)大量抗dsDNA 抗體產(chǎn)生，并發(fā)現(xiàn)其腎臟病變進(jìn)展明顯［6］。近期的研究發(fā)現(xiàn)sB7-H4 在SLE 患者血清中表達(dá)增加［7］。然而，其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷價(jià)值罕有報(bào)道。本研究通過檢測sB7-H4 在SLE 患者中的血清水平變化，探討sB7-H4 在SLE 和疾病活動中的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019 年1 月至2020 年6 月宜昌市第一人民醫(yī)院收治的60 例SLE 患者為研究對象，其中男4 例，女56 例，年齡18～50 歲，中位數(shù)32 歲。SLE 患者均符合1997 年美國ACR 關(guān)于SLE的分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時排除合并嚴(yán)重感染和患有腫瘤的患者。健康對照組20 例為我院體檢中心招募的健康體檢者，其中男2 例，女18 例，年齡20～48 歲，中位數(shù)34 歲。兩組研究人群性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本研究征得宜昌市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，納入對象均簽署知情同意書。

1.2 疾病活動判定按照SLE 疾病活動指數(shù)（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）進(jìn)行病情評估，以SLEDAI 積分≥8 分作為判定疾病活動的標(biāo)準(zhǔn)。按SLEDAI 評分分組，活動期SLE（ASLE）患者32 例，＜8 分的穩(wěn)定期SLE（ISLE）患者28 例。

1.3 治療措施SLE 患者中15 例單用激素治療，34 例使用激素+免疫抑制劑治療，余11 例僅口服羥氯喹。

1.4 sB7-H4 檢測空腹留取外周靜脈血5 mL，室溫下靜置1 h，3 000 r/min離心15 min分離血清，保存于-80 ℃冰箱中。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測標(biāo)本中sB7-H4 濃度，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書，人sB7-H4 檢測試劑盒購自美國ebiosience公司。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，不符合的用M（P25，P75）表示。兩組間計(jì)量資料比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)，logistics 回歸分析SLE 的危險(xiǎn)因素，采用ROC 曲線分析sB7-H4 在SLE 和疾病活動診斷中的敏感性和特異性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE患者和健康對照組的臨床資料60例SLE患者中抗核抗體（ANA）均陽性，抗ds-DNA 抗體陽性率70%，SLEDAI評分（12.6±7.8）分，使用激素或/和免疫抑制劑治療的患者有49 例。SLE 患者和健康對照組ALB 和sB7-H4 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 SLE 活動組和穩(wěn)定組的臨床資料兩組之間疾病活動判定指標(biāo)（SLEDAI、C3、C4、dsDNA）、ALB和sB7-H4 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 SLE 患者和健康對照組的臨床資料Tab.1 Clinical events for SLE and normal control subjects±s

表1 SLE 患者和健康對照組的臨床資料Tab.1 Clinical events for SLE and normal control subjects±s

性別（女/男）年齡［M（P25，P75），歲］ALB（g/L）肌酐（μmol/L）sB7-H4（ng/mL）SLE 組（n=60）56/4 32（20，46）32.5±7.6 68.4±17.5 65.6±21.0健康組（n=20）18/2 34（22，43）46.7±1.5 55.8±17.0 55.4±11.2 t/Z/χ2值0.240 0.100-2.350 0.797 2.766 P 值0.624 0.726 0.019 0.470 0.007

表2 SLE 活動組和穩(wěn)定組的臨床資料Tab.2 Clinical data of SLE active group and stable group±s

表2 SLE 活動組和穩(wěn)定組的臨床資料Tab.2 Clinical data of SLE active group and stable group±s

注：mTP，24 h 尿蛋白

性別（女/男）年齡［M（P25，P75），歲］ALB（g/L）肌酐（μmol/L）C3（g/L）C4（g/L）dsDNA（+/-）SLEDAI mTP［M（P25，P75），g/d］sB7-H4（ng/mL）活動組（n=32）31/1 32（21，45）31.2±7.4 71.5±19.7 0.52±0.25 0.09±0.08 30/2 14.5±5.0 1.3（0.4，1.6）70.99±19.85穩(wěn)定組（n=28）25/3 32（20，44）39.5±7.6 62.2±16.4 0.78±0.36 0.16±0.10 12/16 5.5±2.4 0.55（0.15，0.95）59.06±20.89 t/Z/χ2值0.180 0.070-2.140 1.150-2.570-1.920 18.418 5.736 1.637 2.830 P值0.725 0.873 0.035 0.265 0.016 0.039＜0.001＜0.001 0.102 0.027

2.3 sB7-H4對SLE患者中的診斷價(jià)值調(diào)整白蛋白混雜因素后，采用logistics 回歸分析發(fā)現(xiàn)，sB7-H4 是SLE 的危險(xiǎn)因素（OR= 3.023，95%CI：1.009～9.050）。sB7-H4 對SLE 的診斷敏感性為56%，特異性為85%，ROC 曲線下面積為0.65，截?cái)嘀禎舛葹?7.56 ng/mL，見圖1。以＞57.56 ng/mL 為sB7-H4 陽性，SLE 患者和健康對照組sB7-H4陽性率分別為66.7%和40.0%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.38，P=0.036）。

2.4 sB7-H4在活動性SLE患者中的診斷價(jià)值調(diào)整白蛋白混雜因素后，logistics 回歸分析發(fā)現(xiàn)，sB7-H4是活動性SLE患者的危險(xiǎn)因素（OR=4.733，95%CI：1.386 ～16.442）。sB7-H4 判斷活動性SLE 的敏感性為82% 特異性為56%，ROC 曲線下面積為0.687，見圖2。

3 討論

圖1 sB7-H4 對SLE 患者診斷的ROC 曲線Fig.1 The ROC curve of SB7-H4 in the diagnosis of SLE patients

圖2 sB7-H4 對SLE 患者疾病活動診斷的ROC 曲線Fig.2 The ROC curve of SB7-H4 in the diagnosis of disease activity in SLE patients

系統(tǒng)性紅斑性狼瘡是一種多臟器、多系統(tǒng)的自身免疫性疾病，腎臟受累較為常見，腎活檢發(fā)現(xiàn)幾乎所有的SLE 患者均有腎損害，腎小管-間質(zhì)改變在其中的作用不容忽視，表現(xiàn)為腎小管-間質(zhì)炎癥、細(xì)胞浸潤、小管萎縮和間質(zhì)纖維化等。目前SLE 發(fā)病機(jī)制不明。B7/CD28 途徑調(diào)節(jié)人免疫反應(yīng)，目前包括SLE、RA、pSS 在內(nèi)的多種自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)表明B7/CD28 途徑的調(diào)節(jié)異常導(dǎo)致T 細(xì)胞的免疫紊亂均可導(dǎo)致其疾病進(jìn)展［4，8-12］。這一信號途徑需要2 個信號通路，其中之一是共刺激分子。

B7-H4是共刺激分子家族的最新成員。B7-H4可負(fù)向調(diào)控T 細(xì)胞活化、增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程以及細(xì)胞因子的產(chǎn)生。B7-H4 mRNA 廣泛表達(dá)于胎盤、肝、骨骼肌、腎、前列腺、睪丸、卵巢等非淋巴樣組織中，在樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞以及T、B 細(xì)胞表面高誘導(dǎo)表達(dá)［6，13］。B7-H4 在自身免疫性疾病中發(fā)揮了重要作用，最新研究發(fā)現(xiàn)狼瘡鼠敲除B7-H4基因或使用抗B7-H4 抗體封閉內(nèi)源性B7-H4 表達(dá)后出現(xiàn)大量抗dsDNA 抗體產(chǎn)生、腎臟病變進(jìn)展，然而使用B7-H4Ig 可以減輕狼瘡樣癥狀［14］。這提示B7-H4 參與SLE 的疾病進(jìn)展。

sB7-H4 是SIMON 等［15］利用ELISA 法首次在卵巢癌患者發(fā)現(xiàn)，同時在健康人以及良性婦科病患者的血清標(biāo)本中均可檢出。同樣淋巴瘤、肺癌、腎癌等腫瘤患者中均發(fā)現(xiàn)了高水平表達(dá)的sB7-H4，并協(xié)助腫瘤細(xì)胞免疫逃逸［16-20］。sB7-H4 的來源可能是由其缺失跨膜區(qū)的剪切體分泌到血清中或在基質(zhì)蛋白酶的作用下由膜蛋白脫落到血清中。國內(nèi)外眾多研究發(fā)現(xiàn)sB7-H4 在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血清中表達(dá)明顯升高，并且和其疾病活動明顯正相關(guān)［4，21］。本研究結(jié)果顯示：SLE 患者和健康對照組血清中均有sB7-H4，SLE 患者中其含量明顯高于健康對照組，進(jìn)一步分析：sB7-H4 在SLE 診斷的ROC 曲線下面積為0.65，敏感性56%，特異性85%，提示其在SLE 中具有診斷價(jià)值。同時活動期SLE 患者sB7-H4 含量明顯高于穩(wěn)定期患者；sB7-H4 在SLE 判斷活動期的ROC 曲線下面積為0.687，敏感性82%，特異性56%，這提示sB7-H4 在預(yù)測SLE 疾病活動的重要意義。前期研究發(fā)現(xiàn)B7-H4在SLE 的腎臟組織中表達(dá)減少［22］，而血清中sB7-H4 的表達(dá)增加，這提示sB7-H4 可與某一未被探明的受體結(jié)合抑制腎臟等組織表達(dá)的B7-H4 負(fù)向調(diào)控T 細(xì)胞的作用，從而促進(jìn)疾病進(jìn)展。本研究證實(shí)了sB7-H4 在SLE 患者中表達(dá)升高，并可能參與了疾病進(jìn)展。同時活動期SLE 患者sB7-H4 含量明顯高于穩(wěn)定期患者；sB7-H4 在SLE 判斷活動期的ROC 曲線下面積為0.687，敏感性82%，特異性56%，這提示sB7-H4 在預(yù)測SLE 疾病活動的重要意義。

本研究不足之處在于沒有探究SLE 患者中sB7-H4 的來源，沒有分析sB7-H4 與抗SM 抗體、抗dsDNA 等標(biāo)志物聯(lián)合診斷的價(jià)值，這需要加大樣本量來進(jìn)一步分析。若sB7-H4 可作為新的SLE 標(biāo)志物，且在SLE 發(fā)病早期即可檢測，對于SLE 的早期診斷和疾病活動可能提供了新的思考方向。

總之，sB7-H4 在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中表達(dá)增加，提示其抑制T 細(xì)胞活化功能可能降低，從而參與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的疾病進(jìn)展，但精確的機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。對于sB7-H4 濃度測定，有助于SLE 的診斷，可以為SLE 疾病活動提供可靠依據(jù)。