Pichia galeiformis對李果實褐腐病的生防效果及誘導抗病性的機制研究

蔡亞文，張暄，陳鷗，鄧麗莉,3，曾凱芳,3*

1(西南大學 食品科學學院，重慶，400715)2(食品科學與工程國家級實驗教學示范中心(西南大學)，重慶，400715)3(西南大學,食品貯藏與物流研究中心，重慶，400715)

李果實是我國一種重要的經濟性鮮食水果，營養(yǎng)豐富、風味獨特。近年來重慶李果實產業(yè)發(fā)展迅速，但在李果實采摘運輸過程中，不可避免的產生碰撞、切割等機械傷，從而為病原菌侵染提供了機會。其中，由美澳型核果褐腐病菌(Moniliniafructicola，M.fructicola)引起的褐腐病是造成其采后損失的主要真菌性病害[1]。長期以來，化學殺菌劑被廣泛應用于果蔬采后病害防治，但污染環(huán)境、產生抗藥性等弊端[2]日益顯著；熱激處理[3]、超聲波清洗[4]、涂膜[5]等方式毒性較小，但單獨使用對病害控制效果不佳，實際應用受限，因此尋找更加有效的防治方法已成為研究重點。

生物防治是一種高效廣譜且環(huán)保的新興技術，目前已有關于微生物揮發(fā)性有機物[6]、籃狀菌[7]及單胞菌[8]的相關研究。生防酵母因其生存力強、能快速利用營養(yǎng)物質、可與其他保鮮方式結合使用、遺傳學基礎明確等多種優(yōu)點[9]，已在桃[10]、柑橘、葡萄[11]等多種水果的采后病害防治中表現(xiàn)出較好生防潛力。誘導抗性是酵母發(fā)揮生物防治效果的重要機制之一[12]，膜醭畢赤酵母[13]、羅倫隱球酵母[14]等均有誘導宿主產生抗病性的作用。拮抗酵母常通過激活機體的苯丙烷代謝來增強宿主抗病性[15]，提高果實自身防御能力以抵御病原菌的侵襲。研究表明，苯丙烷代謝途徑對機械脅迫可產生積極的抗性防御作用，可通過苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase，PAL)、過氧化物酶(peroxidase，POD)、肉桂酸-4-羥基化酶(cinnamate-4-hydroxylase，C4H)、4-香豆酸輔酶A連接酶(4-coumaric acid coenzyme-A-ligase，4CL)等關鍵酶調控抗性物質的積累[16-17]。ZHANG等[18]將膜醭畢赤酵母接種于桃果實后，發(fā)現(xiàn)宿主的苯丙烷代謝酶被激活，從而誘發(fā)宿主的抗性防御作用；膜醭畢赤酵母、檸檬形克勒克酵母處理李果實后，其木質素、總酚、類黃酮等代謝產物含量上升，果實抗病性增強[19]。

Pichiagaleiformis(P.galeiformis)分離于檸檬果實表面，能有效控制柑橘采后綠霉病[20]，在果蔬采后病害防治顯示出較大的應用潛力。王友升等[21]研究表明，P.galeiformis可控制多種水果采后病害，但不同拮抗酵母對特定病原菌的生防效果及抗菌機理不同，且目前尚未深入研究其抗病機制。因此，探討李果實接種P.galeiformis后苯丙烷代謝的變化對于深入了解李果實抗病機理及褐腐病害控制具有重要意義。

綜上所述，本研究旨在探究P.galeiformis對李果實采后褐腐病的生防效果，并初步揭示P.galeiformis誘導李果實抗病性的苯丙烷相關機制，以期為P.galeiformis在果蔬采后病害防治中的實際應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗用李果實為巫山“脆紅李”，采后6 h內運至實驗室，剔除病、傷、畸果，挑選大小、成熟度一致的果實作為實驗材料，預冷后放入0 ℃冷庫中貯藏待用。

1.2 主要試劑

瓊脂粉、酵母浸膏、牛肉膏(均為生物級)、葡萄糖、H3PO4、次氯酸鈉、濃HCl、MgCl2、抗壞血酸、H2O2、鄰苯二酚、四硼酸鈉、溴乙酰、NaOH、硼酸、硼砂、甘油(均為分析純)，成都科龍化工試劑廠；無水乙醇、乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)、MgSO4(均為分析純)，天津瑞金化學品有限公司；愈創(chuàng)木酚(化學純)，中國佘山化工廠；甲醇(色譜級)，天津四友精細化學品有限公司；聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone,PVP)、苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)(均為生化試劑)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)、輔酶A(coenzyme A，CoA-SH)(均為優(yōu)級純)，北京拜爾迪生物技術有限公司；三羥甲基氨基甲烷(Tris)、?-巰基乙醇(均為生化試劑)，Sigma；L-苯丙氨酸(生化試劑)，上海康達氨基酸廠；對香豆酸(優(yōu)級純)，上海阿達瑪斯有限公司。

1.3 儀器與設備

BXM30R立式高壓滅菌鍋，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；DHG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱、DHP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海齊欣科學儀器有限公司；Avanti TM J-30I高速冷凍離心機，美國貝克曼庫爾特有限公司；SW-CJ-1F超凈工作臺，蘇凈集團安泰有限公司；B203生物顯微鏡，重慶奧特光學儀器有限公司；XB-K-25血細胞計數(shù)板，上海求精生化試劑有限公司；WD-9405B水平搖床，北京市六一儀器廠；KQ52DE超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；UV-1000紫外分光光度計，日本島津。

1.4 試驗方法

1.4.1M.fructicola孢子懸浮液的制備

將病原菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar，PDA)培養(yǎng)基中25 ℃培養(yǎng)7～8 d，用無菌水清洗孢子，4層紗布過濾，血球計數(shù)板計數(shù)，無菌條件下用無菌水配制成1×105spores/mL孢子懸浮液。

1.4.2P.galeiformis菌懸液的配制

活化：將凍存干酵母以無菌水沖洗、稀釋，接種于NYDA培養(yǎng)基，28 ℃培養(yǎng)48 h，重復傳代2次；液體培養(yǎng)：接種于NYDB培養(yǎng)基，200 r/min，28 ℃搖床培養(yǎng)24 h；離心分離：5 000 r/min，4 ℃離心10 min，無菌水洗滌2次；重懸浮及濃度確定：無菌水再懸浮，血球計數(shù)板計數(shù)，用前無菌水分別稀釋至1×108cells/mL、5×108cells/mL。

1.4.3P.galeiformis對M.fructicola菌落直徑的影響

將0.2 mL處理液(1)無菌水、(2)酵母菌懸液(1×108cells/mL)分別涂布于PDA平板，放置10 min后在平板中間打孔接入培養(yǎng)5 d的M.fructicola菌餅(直徑5 mm；取自菌落邊緣)，于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，從平板背面采用十字交叉法測量病原菌的菌落直徑。

1.4.4P.galeiformis處理對李果實采后褐腐病的控制效果

同孔損傷接種：果實隨機分組，用1%(體積分數(shù))次氯酸鈉溶液浸泡1 min，清水沖凈，在20 ℃，相對濕度(relative humidity，RH)為80%～90%環(huán)境下自然風干。用1 mL無菌槍頭在果實赤道部位等距打2個孔(深3 mm，直徑3 mm)，每個傷口接種20 μL，1×108cells/mL酵母細胞懸液。以等量無菌水處理為對照。4 h后每個孔中接種10 μL，1×105spores/mLM.fructicola孢子懸浮液。待處理液吸收后，單果包裝，20 ℃貯藏，每天統(tǒng)計果實發(fā)病率和病斑直徑。每組10個果實，重復3組。

異孔損傷接種：分組清洗處理同上。用1 mL無菌槍頭在果實赤道部位等距打2個孔(深3 mm，直徑3 mm)，每個傷口接種20 μL，1×108cells/mL酵母細胞懸液。以等量無菌水處理為對照。24 h后，在果實原來孔徑右邊1 cm左右打1個新孔(直徑3 mm，深3 mm)，并在該孔中接種10 μL，1×105spores/mLM.fructicola孢子懸液。待處理液吸收后，單果包裝，20 ℃貯藏，每天統(tǒng)計果實發(fā)病率和病斑直徑。每組10個果實，重復3組。

浸泡處理：分組清洗處理同上。分別在無菌水和酵母細胞懸液(5×108cells/mL)中浸泡3 min，自然晾干，用1 mL無菌槍頭在果實赤道部位等距離刺孔2個(深3 mm，直徑3 mm)，接種10 μL，1×105spores/mL病原菌孢子懸浮液。待菌液吸收后單果包裝，20 ℃貯藏，PE膜覆蓋保濕。每天統(tǒng)計發(fā)病率和病斑直徑,如公式(1)、公式(2)所示。每組10個果實，重復3組。

(1)

(2)

1.4.5P.galeiformis處理對李果實苯丙烷代謝途徑相關酶活性及代謝產物積累的測定

1.4.5.1 樣品處理及取樣方法

選擇果色均勻，大小、成熟度一致果實，用1%(體積分數(shù))次氯酸鈉溶液浸泡1 min，清水沖洗，自然晾干后用1 mL無菌槍頭在果實赤道部位等距離刺2個孔(深3 mm，直徑3 mm)。每個傷口加入20 μL以下溶液：(1)對照組-無菌水；(2)酵母菌懸液(5×108cells/mL)。待菌液吸收后，貯藏于20 ℃、RH為85%～90%，PE膜覆蓋保濕。

取樣方法：常溫條件在貯藏第0(以接種后1 h為起始點)、1、2、3、4、5天取樣，取樣部位為果實打孔傷口外1 cm直徑的健康果實組織，去除傷口及發(fā)病部位。每組10個果實，每種處理重復3組。該樣品用于相關酶活及物質含量的測定。

1.4.5.2 PAL和POD活性的測定

PAL活性測定參照ASSIS等[22]的方法并適當修改。取2 g樣品，加入5 mL 100 mmol/L硼酸-硼砂鹽緩沖液(pH 8.8，含5 mmol/L ?-巰基乙醇，2 mmol/L EDTA，40 g/L PVP)，冰浴研磨，4 ℃，12 000 r/min離心20 min，上清液低溫保存?zhèn)溆?。反應液?.5 mL酶提取液；3 mL 50 mmol/L硼酸-硼砂緩沖液(pH 8.8)；0.5 mL 20 mmol/LL-苯丙氨酸溶液。對照以等量H2O代替酶液。反應體系置于37 ℃保溫60 min后，立即加入0.1 mL 6 mol/L HCl溶液終止反應，蒸餾水為參比，分別測定290 nm處吸光度值，以1 h吸光值變化0.01為1個酶活力單位(U)。重復3次。

POD活性測定參照曹建康等[23]的方法并適當修改。取2 g樣品，加入5 mL 4 ℃預冷的0.1 mol/L pH 6.8磷酸緩沖液(含40 g/L PVP)，冰浴研磨后于4 ℃、12 000 r/min離心20 min。反應體系為2.7 mL 0.1 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)，0.1 mL 4%(體積分數(shù))愈創(chuàng)木酚，0.1 mL 0.5%(體積分數(shù)) H2O2和0.1 mL上清液，測定470 nm處室溫下反應3 min吸光值變化，蒸餾水為參比。以1 min吸光值變化1為一個酶活力單位(U)。重復3次。

1.4.5.3 C4H和4CL活性的測定

C4H活性測定參照范存斐等[24]的方法并適當修改。取1 g樣品，加入5 mL 200 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.5，含2 mmol/L ?-巰基乙醇)，冰浴研磨，12 000 r/min、4 ℃離心20 min，收集上清液備用。反應液為2 mL 50 mmol/L磷酸鹽緩沖液，1 mL 2 mmol/L反式肉桂酸，100 μL 0.5 mmol/L氧化型輔酶Ⅱ二鈉(triphosphopyridine nucleotide disodium salt，NADP-Na2)，100 μL 0.5 mmol/LD-葡萄糖-6-磷酸二鈉鹽(D-glucose 6-phosphate disodium salt hydrate，G-6-P-Na2)，50 μL酶提取液；200 μL 6 mol/L HCl終止反應，于340 nm處測定吸光值，以不加酶液為參比。OD值每l h變化0.01為1個酶活性單位(U)。

4CL活性測定參照LI等[25]的方法并適當修改。稱取2 g樣品，加5 mL 100 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)提取液(含15 mmol/L ?-巰基乙醇、體積分數(shù)30%甘油)，冰浴研磨，超聲破碎2 min(25 ℃、100 W)，4層紗布過濾，4 ℃、12 000 r/min離心20 min，上清液為粗酶提取液。反應體系為0.5 mL酶提取液，0.15 mL 5 μmol/L對香豆酸；0.15 mL 5 μmol/L ATP；0.15 mL 1 μmol/L CoA；0.45 mL 15 μmol/L MgSO4。對照以H2O取代酶液。25 ℃反應10 min，333 nm測定吸光值，以OD值每1 min變化0.001為1個酶活性單位(U)，重復3次。

1.4.5.4 總酚、類黃酮、木質素含量的測定

總酚、類黃酮的測定參考DENG等[26]的方法并稍作修改。取1 g樣品，加入20 mL預冷的1%(體積分數(shù)) HC1-甲醇溶液充分研磨提取，取1 mL濾液加5 mL 1% HCl-甲醇提取液，搖勻后立即用于比色。分別以1 g鮮重在280、325 nm處吸光度值表示總酚、類黃酮含量，表示為OD280/g FW、OD325/g FW，重復3次。

木質素含量測定參照LI等[27]的方法并修改。取1 g 樣品，加5 mL 95%(體積分數(shù))乙醇研磨，12 000 r/min，4 ℃離心10 min，沉淀物以3 mL 95%乙醇沖洗3次，3 mLV(乙醇)∶V(正己烷)=1∶2 溶液離心沖洗3次，收集沉淀物，65 ℃干燥12 h。干燥物溶于3 mL 25%(體積分數(shù))溴乙酰冰醋酸溶液，70 ℃恒溫水浴中加塞保溫30 min(每隔一段時間開塞散熱)，加0.9 mL 2 mol/L NaOH終止反應，冰醋酸定容至10 mL，9 000 r/min離心10 min，取上清液0.5 mL加9.5 mL蒸餾水，以蒸餾水為參比，280 nm處測定吸光值。以1 g鮮重在280 nm處的吸光值表示木質素含量(OD280/g FW)，重復3次。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel 2016進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計整理，SPSS 25對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，利用Duncan′s多重比較對差異顯著性進行分析，P<0.05表示差異顯著，用Origin 9.1軟件制圖。

2 結果與分析

2.1 離體條件下P.galeiformis對M.fructicola菌落直徑的影響

經前期實驗，確定P.galeiformis的最佳抑菌濃度為1×108cells/mL。如圖1所示，經P.galeiformis(1×108cells/mL)涂布的PDA平板上，M.fructicola的菌落直徑增長幅度較小、擴散生長慢。接種7 d時，P.galeiformis處理組菌落直徑為對照組的22.84%。MARTA等[28]、ZHAO等[29]研究發(fā)現(xiàn)，在最佳抑菌濃度下，酵母處理可顯著抑制褐腐病病原菌生長，顯示出增強抗病性的潛力。

A-對照(無菌水)；B-P.galeiformis處理組(1×108 cells/mL)

2.2 P.galeiformis處理對李果實褐腐病的生物防治效果

接種后李果實的發(fā)病率和病斑直徑情況如圖2所示。如圖2-A所示，同孔損傷接種時，P.galeiformis處理組果實發(fā)病率和病斑直徑顯著低于對照組(P<0.05)。在貯藏第3天，對照組李果實有明顯病變，發(fā)病率為28.01%，P.galeiformis處理組發(fā)病率為1.67%。7 d時，對照組發(fā)病率超過80%且病斑直徑為12.66 mm，而P.galeiformis處理組發(fā)病率為對照組的23.38%，病斑直徑為2.96 mm。如圖2-B所示，異孔損傷接種時，3～5 d內P.galeiformis處理可明顯抑制李果實病斑直徑的擴大，5 d時對照組果實病斑直徑擴大至6.22 mm，達P.galeiformis處理組的1.55倍。5～7 d中，P.galeiformis處理組與對照組發(fā)病率、病斑直徑差異顯著(P<0.05)。貯藏第7天，對照組發(fā)病率達100%，而P.galeiformis處理組發(fā)病率為78.76%。同異孔損傷接種結果表明，P.galeiformis可能具有分泌抗菌物質的作用，但并不是其主要的抗菌機制，這與王智榮等[8]研究結果類似。如圖2-C所示，P.galeiformis處理對M.fructicola有較好的拮抗效果，貯藏4 d時，對照組李果實發(fā)病率達P.galeiformis處理組的1.80倍，差異顯著(P<0.05)。整個貯藏期內，P.galeiformis處理組果實的病斑直徑顯著低于對照組，在接種第6、7天對照組李果實病斑直徑分別為酵母處理組的1.20、1.28倍。SHAO等[30]、LIU等[31]在用Candidaintermedia和Pichiakudriavzevii控制桃果實采后病害時發(fā)現(xiàn)，酵母對病原菌的強拮抗作用是防止水果發(fā)生病變的重要原因。綜合同孔、異孔損傷接種及浸泡處理實驗結果，P.galeiformis處理能延緩李果實褐腐病的發(fā)病進程、降低果實腐爛程度，且該作用可能與誘導李果實產生抗病性有關。

A-同孔損傷處理發(fā)病率；B-異孔損傷處理發(fā)病率；C-浸泡處理發(fā)病率；D-同孔損傷處理病斑直徑；E-異孔損傷處理病斑直徑；F-浸泡處理病斑直徑

2.3 P.galeiformis處理對李果實抗病性的影響

2.3.1P.galeiformis處理對李果實PAL和POD活性的影響

PAL是苯丙烷代謝途徑中首個作用酶，對增強果實抗性有加速作用；POD參與了果實木質素等結構物質的代謝和積累，是貯藏中典型的防御相關酶。由圖3可知，P.galeiformis處理顯著提高了李果實PAL、POD活性，可為后續(xù)酶活性的增強和抗性物質的積累做準備，從而增強果實抗性。

如圖3-A所示，果實PAL酶活性上升，P.galeiformis處理組與對照組變化趨于一致。48 h后，經P.galeiformis處理李果實PAL酶活顯著高于對照，貯藏72 h時，P.galeiformis處理組PAL的活性與對照組差異最為顯著，達對照組1.29倍(P<0.05)。這與MAHUNU[32]用Pichiacaribbica防治蘋果青霉病時發(fā)現(xiàn)的抗性反應類似，酵母處理有效刺激了PAL酶活性的顯著上升，增強了果實抗性反應能力。張婕[19]將P.membranaefaciens接種于李果實發(fā)現(xiàn)，酵母處理可通過強化PAL酶活性調控產生香豆酸、阿魏酸等中間代謝產物從而繼續(xù)催化苯丙烷代謝作用。

如圖3-B所示，果實POD酶活性在貯藏期內呈穩(wěn)定增長趨勢。與對照組相比，P.galeiformis處理組果實POD活性升幅明顯上調，貯藏第48、72、96、120 h時，P.galeiformis處理組POD酶活性分別為對照組的1.37、1.31、1.15、1.16倍，差異顯著(P<0.05)。ZHANG[33]研究表明，接種Pichiaguilliermondii能夠誘導PAL、POD在果實中的基因表達，從而激活果實苯丙烷代謝。POD作為具有多種功能的氧化還原酶，可直接調控果實防御機制及激素合成；同時，POD酶產物醌類等多酚氧化產物的增加，可有效增強果實在貯藏期間對病原菌的抵抗能力。吳鋒[34]在探究PichiamembranaefaciensY4對桃褐腐病的抗病機制時，發(fā)現(xiàn)酵母可通過活化POD酶促進細胞壁木質化，從而提高果實抗病性。

A-PAL活性；B-POD活性

2.3.2P.galeiformis處理對李果實C4H和4CL活性的影響

C4H、4CL與植物體內抗性物質的合成積累密切相關，XU等[35]研究表明C4H、4CL是植物苯丙烷代謝的關鍵分支點酶。如圖4-A所示，C4H酶活性呈先升后降趨勢，于72 h達峰值。72 h時，P.galeiformis處理組果實C4H酶活性較對照組高35.71%(P<0.05)。與對照相比，P.galeiformis處理顯著增強了李果實貯藏期間C4H酶活性，末期雖有所下降，但仍維持在較高的活性水平。這可能是由于C4H作為植物中典型的P450單加氧化酶[36]，參與著植物進化的多種分支代謝。ZHANG等[37]研究中也發(fā)現(xiàn)類似作用，C4H可參與植物組織向香豆酸的多個分支代謝，激活4CL酶活性，抑制蘋果的灰霉病感染。

如圖4-B所示，P.galeiformis處理能有效誘導果實4CL活性上升，在觀測的48 h及以后促進作用尤為顯著(P<0.05)，在48、72、96、120 h時，P.galeiformis處理組果實4CL酶活性分別為對照組的1.38、1.20、1.30、1.33倍。4CL在植物中常以基因家族形式存在，是苯丙烷代謝途徑總支向不同的次生代謝產物合成的轉折點[39]，Pt4CL1對木質素的合成反應有較強催化效率，Pt4CL2可為酚類化合物的合成提供底物酶，從而為貯藏后期抗性物質的積累做準備。同時，4CL酶與PAL酶活性存在著一定的伴隨效應，PAL酶代謝產物肉桂酸，可經由4CL酶作用直接向分支代謝[40]，從而加速抗性物質的合成。相似研究結果在和趙亞婷等[40]的研究中也有報道，但與本實驗酶活性高峰出現(xiàn)的時間不同，這可能是由于酶在不同水果中的表達情況不同。綜上，P.galeiformis處理可通過活化C4H、4CL來調控果實抗性代謝從而增強其抗侵染能力，這與張培嶺等[41]對甜瓜抗病性的研究結果類似。

A-C4H活性；B-4CL活性

2.3.3P.galeiformis處理對李果實總酚、類黃酮和木質素含量的影響

酚類化合物具有抗真菌活性并能提高植物抗性，類黃酮在植物發(fā)育和植物防御中均起著結構和信號分子的重要作用[36]。WANG等[42]研究表明，硝普鈉可提高PAL酶活性并刺激總酚類、黃酮類積累，從而激活甜瓜的防御機制提高果實抗病性。如圖5-A所示，整個貯藏期內酵母處理組總酚含量始終高于對照組，在貯藏120 h時，P.galeiformis處理組總酚含量比對照組高19.91%(P<0.05)。如圖5-B所示，P.galeiformis處理組與對照組的類黃酮含量呈下降-上升-下降趨勢，但在整個波動區(qū)間內，P.galeiformis處理組類黃酮含量較對照組更高，在96 h時為對照組的1.23倍(P<0.05)。研究結果表明，P.galeiformis可以作為抗性激發(fā)子，在PAL、POD、C4H、C4L等酶的綜合調控下刺激果蔬體內的總酚、類黃酮積累，以提升抗性作用；同時，酚類被PAL酶氧化后的毒素也可能對病原菌產生直接的抑制作用，如蘋果采后P.guilliermondii處理可激活果實創(chuàng)面的活性氧和苯丙烷代謝，促進果實創(chuàng)面愈合[34]。

植物木質素是多種苯丙烷單體的共聚物，酚類化合物和類黃酮是木質素合成的重要前體物質[44]，木質素的積累預示著植物愈傷組織的形成和木質化進程加快，因此可以通過監(jiān)測木質素來衡量李果實對病原菌的抗性作用。如圖5-C所示，貯藏期內對照組果實的木質素含量增加緩慢；經P.galeiformis處理后，果實木質素積累顯著上升，貯藏120 h時，P.galeiformis處理組木質素含量達對照組1.52倍(P<0.05)。周雅涵[44]將P.membranaefaciens接種于柑橘果實發(fā)現(xiàn)，木質素含量的增加可以增強細胞壁抗真菌穿透的能力，同時有效限制真菌對果實中水及營養(yǎng)物質的利用。此外，木質素中的自由基可有效鈍化真菌的細胞膜及其有害代謝產物，進而增強果實的抗性。綜上，P.galeiformis可以通過調控李果實苯丙烷代謝途徑中類黃酮、總酚、木質素等抗真菌化合物的代謝與積累，增強果實的結構抗性和生化抗性，提高果實的抗病原菌侵染能力。

A-總酚含量；B-類黃酮含量；C-木質素含量

3 結論

本實驗研究結果表明：(1)P.galeiformis能顯著抑制M.fructicola的菌絲生長，有效抑制李果實采后褐腐病的發(fā)病率和病斑直徑；(2)P.galeiformis可有效提高李果實苯丙烷代謝途徑中的關鍵酶(PAL、POD、C4H、4CL)活性，促進其抗性物質(總酚、類黃酮)代謝，顯著增強李果實木質素積累，從而誘導李果實產生抗性提高其對病原體的防御反應。因此，P.galeiformis有望成為一種控制李褐腐病的安全有效工具，在果蔬采后病害防治領域中有較大的應用潛力，可為果蔬采后病害防治提供新的策略。