血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因多態(tài)性與尋常性銀屑病伴染發(fā)誘因的相關(guān)性分析

胡素娟，黃友光，楊 鈞，賀延敏，崔 勇

銀屑病是一種常見(jiàn)的慢性、復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，是一種多基因缺陷性疾病，遺傳因素在銀屑病發(fā)病中起重要作用[1]，但其病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（angiotensin converting enzyme，ACE）基因多態(tài)性是染發(fā)皮炎的一個(gè)易感因素[2]，而ACE基因多態(tài)性又與銀屑病相關(guān)，尤其是東亞人[3-5]。本課題前期研究[6]顯示染發(fā)可能是尋常性銀屑病的發(fā)病誘因之一，而且有較多染發(fā)致敏誘發(fā)銀屑病的報(bào)道[7]。近來(lái)國(guó)內(nèi)外有ACE基因多態(tài)性與銀屑病、ACE基因多態(tài)性與染發(fā)皮炎的關(guān)系研究，但鮮有ACE基因多態(tài)性、尋常性銀屑病和染發(fā)三者的相關(guān)研究，因此開展了ACE基因插入/缺失多態(tài)性與尋常性銀屑病伴染發(fā)等誘因的關(guān)系研究。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 實(shí)驗(yàn)組(a) 由尋常性銀屑病伴染發(fā)誘因的患者組成，共60例，其中16例有銀屑病遺傳史組成a1組，44例無(wú)遺傳史組成a2組。男28例構(gòu)成a3組，女32例構(gòu)成a4組。病例來(lái)自2013年1月—2016年8月在濟(jì)寧市皮膚病防治院門診首次就診的尋常性銀屑病患者，均為漢族。實(shí)驗(yàn)組選擇標(biāo)準(zhǔn)：①入選患者符合尋常性銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)2名副主任醫(yī)師確診；②病史≤2年；③均來(lái)自山東濟(jì)寧市區(qū)及周邊縣市區(qū)；④患者之間無(wú)親緣關(guān)系；⑤患者無(wú)心、肺、肝、腎慢性病史等重大疾病及其他皮膚病病史；⑥不限定有、無(wú)銀屑病遺傳史，且排除其他可能的銀屑病誘因，如：環(huán)境潮濕、感染、精神緊張、吸煙、嗜酒、手術(shù)和外傷、睡眠差等[5]；⑦有染發(fā)史。

1.1.2 對(duì)照1組(b) 尋常性銀屑病患者，共60例，男30例，女30例，其中19例有銀屑病遺傳史組成b1組，41例無(wú)遺傳史組成b2組。病例來(lái)源同上，病例選擇標(biāo)準(zhǔn)同實(shí)驗(yàn)組：①～⑥，⑦無(wú)染發(fā)史。

1.1.3 對(duì)照2組(c) 選擇正常人（無(wú)心、肺、肝、腎慢性病史及皮膚病等重大疾?。?0例，其中男30例，女30例。選擇標(biāo)準(zhǔn)：①漢族，且年齡、職業(yè)、學(xué)歷與病例組無(wú)明顯差異；②均來(lái)自山東濟(jì)寧市區(qū)及周邊縣市區(qū)； ③正常個(gè)體之間無(wú)親緣關(guān)系；④無(wú)銀屑病遺傳史，且排除其他可能的銀屑病誘因；⑤有染發(fā)史。

1.1.4 對(duì)照3組(d) 選擇正常人（無(wú)心、肺、肝、腎慢性病史及皮膚病等重大疾病）60例作為陰性對(duì)照組，其中男30例，女30例。對(duì)照選擇標(biāo)準(zhǔn)同對(duì)照2組：①～④；⑤無(wú)染發(fā)史。

1.2 研究方法

隨機(jī)挑選符合標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)組和3組對(duì)照各60例成員，經(jīng)知情同意后，抽取5 ml外周靜脈血置于EDTA抗凝管中，-20℃條件下冷藏。采用小量全血基因組DNA提取試劑盒法進(jìn)行DNA提取。ACE引物設(shè)計(jì)與合成選擇第16號(hào)內(nèi)含子 PH 4.3區(qū)域兩側(cè)序列合成引物，引物順序?yàn)椋荷嫌我?5c-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3c，下游引物 5c-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGAT-3c，由北 京百奧思科生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司合成。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增參數(shù)為93.5℃，變性2 min，94℃ 1 min，55℃ 1 min，72℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸5 min。取 PCR產(chǎn)物 10 μl在2 %瓊脂糖凝膠上電泳（70V，40 min），應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)拍照，參照DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量特異性條帶，分析圖像結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS13.0軟件對(duì)4組研究對(duì)象的ACE基因型的統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)用Pearson chi-square和Fisher's exact test等卡方檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 ACE基因 I/D多態(tài)性類型

ACE基因的擴(kuò)增的基因片段經(jīng)2% 瓊脂糖電泳后，ACE基因擴(kuò)增產(chǎn)物表現(xiàn)為 3種ACE基因型：插入型（Ⅱ型）為490 bp擴(kuò)增帶，缺失型（DD型）為190 bp擴(kuò)增帶，雜合型（ID型）有 490 bp和 190 bp兩條擴(kuò)增帶（圖1）。

圖1 ACE基因插入/缺失多態(tài)性電泳圖

2.2 實(shí)驗(yàn)組與3組對(duì)照者ACE基因多態(tài)性分布特征

2.2.1 4組一般情況比較 實(shí)驗(yàn)組與3組對(duì)照者在年齡、性別等方面無(wú)明顯差異，實(shí)驗(yàn)組的ACE基因型和等位基因分布頻率與3組對(duì)照相比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05，表1）。4組進(jìn)行兩兩之間比較差異均無(wú)顯著性，P值均＞0.012。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照1組中有遺傳史的患者a1、b1與對(duì)照3組（d）進(jìn)行比較 3組研究對(duì)象ACE基因型及等位基因分布頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其Ⅱ基因型頻率和Ⅰ等位基因的頻率顯著升高，見(jiàn)表2。提示有遺傳史的尋常性銀屑病患者ACE基因型及等位基因分布頻率與染發(fā)相關(guān)聯(lián)。組間進(jìn)行兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值均＞0.016。

表1 4組ACE基因型及等位基因分布頻率比較 [例(%)]

表2 a、b組中有遺傳史的成員與d組ACE基因型及等位基因分布頻率比較 [例(%)]

2.2.3 實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照1組中無(wú)遺傳史的a2、b2與d組進(jìn)行比較 3組成員ACE基因型及等位基因分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。提示無(wú)遺傳史的尋常性銀屑病患者ACE基因型及等位基因分布頻率與染發(fā)無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。

表3 a、b組中無(wú)遺傳史的成員與d組ACE基因型及等位基因分布頻率比較 [例(%)]

2.3 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照1組ACE基因多態(tài)性分層分析

實(shí)驗(yàn)組（a）中有遺傳史的a1和無(wú)遺傳史的a2兩組ACE基因型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示有染發(fā)史的銀屑病患者ACE基因型與遺傳史有關(guān)，a1、a2的等位基因分布頻率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。a組在男女性別上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表4）。對(duì)照1組（b）中尋常性銀屑病患者ACE基因型及等位基因分布頻率與遺傳史無(wú)顯著關(guān)聯(lián)（P＞0.05），見(jiàn)表5。有染發(fā)和遺傳史a1與無(wú)染發(fā)和遺傳史的b2兩組銀屑病患者ACE基因型及等位基因分布頻率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示尋常性銀屑病患者ACE基因型及等位基因分布頻率與染發(fā)、遺傳史兩者相關(guān)聯(lián)，見(jiàn)表6。

表4 a組ACE基因型及等位基因分布頻率關(guān)于遺傳史和性別的比較 [例(%)]

表5 a2與b2組ACE基因型及等位基因分布頻率關(guān)于遺傳史的比較 [例(%)]

表6 a1與b2組ACE基因型及等位基因分布頻率比較 [例(%)]

3 討論

ACE是近年研究的熱點(diǎn)之一，它是一種鋅金屬蛋白酶，幾乎存在于所有人類的組織中，在皮膚主要存在于成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞。ACE的主要功能是促進(jìn)血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ，還可以降低炎性反應(yīng)過(guò)程中重要遞質(zhì)緩激肽和物質(zhì)的含量[8]，從而調(diào)節(jié)皮膚的炎癥反應(yīng)。ACE抑制劑可以加重或誘發(fā)銀屑病，其原因可能是激肽降解減少而使激肽水平增加。人類ACE基因位于染色體17q23，其16內(nèi)含子有一段287 bp的DNA序列，其插入或缺失形成了ACE基因I/D多態(tài)性。研究發(fā)現(xiàn)ACE基因多態(tài)性是重要的遺傳標(biāo)志，與某些病理生理狀態(tài)相關(guān)。ACE基因多態(tài)性還與高血壓、冠心病、糖尿病等有關(guān)。因此在選擇研究對(duì)象時(shí)排除了并發(fā)此類疾病的銀屑病患者。

筆者應(yīng)用 PCR技術(shù)對(duì)4組研究對(duì)象進(jìn)行ACE基因I/D多態(tài)性與尋常性銀屑病伴染發(fā)誘因之間的關(guān)系研究，結(jié)果顯示在忽略遺傳史影響的情況下，4組ACE 基因Ⅱ、ID、DD基因型分布頻率及等位基因頻率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。進(jìn)一步分層研究顯示ACE基因I/D多態(tài)性與伴染發(fā)誘因的尋常性銀屑病患者的性別無(wú)關(guān)，而與是否有遺傳史存在關(guān)聯(lián)。ACE基因多態(tài)性在遺傳史和染發(fā)兩種誘因聯(lián)合作用下變化顯著，提示遺傳史和染發(fā)兩種誘因可能通過(guò)ACE基因 I/D多態(tài)性改變導(dǎo)致銀屑病發(fā)生。文獻(xiàn)報(bào)道顯示有遺傳史的銀屑病患者中Ⅰ等位基因的頻率與對(duì)照組比較顯著升高[9]。本研究顯示兩者比較雖然有明顯升高，但尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而尋常性銀屑病伴染發(fā)且有遺傳史者與尋常性銀屑病有遺傳史但不伴染發(fā)者及正常人比較，ACE基因型及等位基因分布頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其Ⅱ基因型頻率和Ⅰ等位基因的頻率顯著升高。研究結(jié)果存在差異與受研究對(duì)象的民族、地區(qū)、數(shù)量等差異有關(guān)。另外，銀屑病是多基因遺傳性皮膚病，單一或者多種易感基因、單一或者多種誘因不同組合可能在銀屑病發(fā)病中發(fā)揮作用。本研究的意義在于提醒有銀屑病家族遺傳史的人應(yīng)盡量避免染發(fā)，可以降低銀屑病發(fā)生的可能性。