結腸癌中TMSG-1 和CXCR4 表達與臨床病理特征及預后的關系

朱獻斐

浙江省義烏市中心醫(yī)院病理科，浙江義烏 322000

結腸癌是常見的一種消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率呈不斷上升趨勢，嚴重威脅患者生命健康且影響患者生活質(zhì)量[1-2]。若不能及時有效地診斷和治療，患者病死率明顯增加[3-4]。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因-1（TMSG-1）主要是從人前列腺癌細胞系中克隆出來的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關基因，在腎臟、肝臟等多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關[5]。趨化因子與其相對應的受體結合后，在腫瘤、炎癥、胚胎發(fā)育及血管生成等病理或者生理過程中發(fā)揮重要作用。研究顯示[6]，趨化因子受體4（CXCR4）與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系緊密。本文主要探討結腸癌中TMSG-1 和CXCR4 表達與臨床病理特征及預后的關系，為診斷和治療結腸癌提供可靠的參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016 年9 月—2017 年9 月浙江省義烏市中心醫(yī)院就診的結腸癌患者58 例為研究對象，收集經(jīng)手術切除的癌組織與距腫瘤部位＞5 cm 的癌旁組織。納入標準：①經(jīng)病理證實為結腸癌；②臨床資料完整；③隨訪資料完整。排除標準：①遺傳性非息肉病性結腸癌；②直腸及盲腸和肛管惡性腫瘤；③其他部位惡性腫瘤。納入的58 例患者男38 例，女20 例；年齡34～75 歲，平均（59.83±6.56）歲；腫瘤直徑（4.78±1.59）cm；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期21 例，Ⅲ～Ⅳ期37 例；淋巴結轉(zhuǎn)移26 例；遠處轉(zhuǎn)移20 例。

1.2 主要試劑和儀器

主要試劑：免疫組織化學染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司，貨號：QY-5560）；DAB 顯色試劑盒（基因科技上海股份有限公司，貨號：GK347010）；鼠抗人單克隆抗體TMSG-1 抗體（北京中杉金橋生物技術有限公司，貨號：CPM-0270）；兔抗人CXCR4 多克隆抗體（上海基因股份有限公司，貨號：SPC-1293D）。

主要儀器：光學顯微鏡（德國徠卡公司；型號：DM500）。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學法測定TMSG-1 和CXCR4 表達TMSG-1 抗體稀釋比為（1∶100），CXCR4 抗體稀釋比為（1∶200），以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照，嚴格按照免疫組化染色試劑盒說明書進行實驗。切片經(jīng)二甲苯、酒精脫蠟、脫水后用雙氧水溶液浸泡15 min。在檸檬酸鹽緩沖液中加熱10 min，再以PBS 沖洗3 次,切片，甩干后滴加牛血清蛋白（0.25%），室溫孵育4 min。加入TMSG-1 和CXCR4 抗體，4℃孵育14 h。復溫90 min，PBS 清洗后加生物素標記的二抗，39℃孵育25 min，取出后再以PBS 溶液清洗3 次，每次清洗5 min。用DAB 顯色劑顯色，10 min 后蘇木精復染1 min，沖洗、脫水后二甲苯進行固定，風干后封片。顯微鏡下觀察，由2 名高年資病理科醫(yī)師獨立閱片。

1.3.2 結果判定 于光學顯微鏡下觀察染色結果，著色的結果判定采用半定量法[7]，首先以細胞著色強弱度評分：無著色記0 分，淺黃色記1 分，棕黃色者記2 分，棕褐色記3 分。記錄鏡下陽性細胞數(shù)所占比例：無陽性細胞記0 分，陽性細胞≤10%記1 分，＞10%～50%記2 分，＞50%～75%記4 分。再按照上述兩者所得評分相乘結果劃分等級：其中積分≤3 分即為陰性，＞3 分為陽性：＞3～5 分為弱陽性，＞5～8 分為中等陽性，＞8～12 分則為強陽性。低表達指積分≤5 分高表達指積分>5 分。

1.4 觀察指標

觀察癌組織與癌旁正常組織TMSG-1 和CXCR4陽性表達情況；不同病理特征TMSG-1 和CXCR4 表達情況；隨訪至2020 年9 月30 日，每月隨訪1 次，以患者死亡作為隨訪終點事件。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier 法分析患者生存情況，采用Log-rank 檢驗比較生存曲線的差異。以P < 0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 癌組織與癌旁組織TMSG-1 和CXCR4 陽性表達比較

癌組織TMSG-1 和CXCR4 陽性表達率高于癌旁組織（P < 0.05）。見表1。

表1 癌組織與癌旁組織TMSG-1 和CXCR4 陽性表達比較[例（%）]

2.2 不同病理特征TMSG-1 和CXCR4 表達比較

不同性別、年齡和腫瘤直徑與TMSG-1 和CXCR4陽性表達無關聯(lián)（P > 0.05）；TNM 分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移與TMSG-1 和CXCR4 陽性表達有關聯(lián)（P < 0.05）。見表2。

2.3 TMSG-1 和CXCR4 表達與預后相關性

TMSG-1 低表達的結腸癌患者總體生存情況高于TMSG-1 高表達者（χ2=8.099，P < 0.05）；CXCR4 低表達的結腸癌患者總體生存情況高于CXCR4 高表達者（χ2=4.726，P < 0.05）。見圖1。

3 討論

結腸癌早期發(fā)病不易被確診，大部分患者入院治療時已進展至中晚期，錯失最佳手術根治時機[8-15]。因此，早期診斷和治療結腸癌方法具有重要意義。隨著近年來對結腸癌發(fā)病機制的不斷研究，尋找可早期預警及提示預后的分子標志物具有重要價值[16-21]。

TMSG-1 主要位于人類1 號染色體1q21.2，cDNA序列全長2392 bp 的TMSG-1 基因編碼的一種蛋白質(zhì)，由1 個TRAM-LAG1-CLN8 結構域和1 個Homeodomain 組成，有6 個跨膜區(qū)，相對分子質(zhì)量為4.5×104，主要定位于高爾基體、細胞膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而其中少量可能定位于細胞核。TMSG-1 屬新型的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，主要由前列腺癌細胞系克隆產(chǎn)生[22]。研究顯示[23-24]，TMSG-1 在膀胱癌、肺癌及肝細胞癌等腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移具有抑制效果。本研究結果顯示，癌組織TMSG-1 陽性表達率高于癌旁組織（P<0.05），由此可見結腸癌組織中TMSG-1 高表達；TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期TMSG-1 陽性表達率高于Ⅰ～Ⅱ期，淋巴結轉(zhuǎn)移TMSG-1 陽性表達率高于無淋巴結轉(zhuǎn)移，遠處轉(zhuǎn)移TMSG-1 陽性表達率高于無遠處轉(zhuǎn)移，提示TMSG-1表達與TNM 分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有關聯(lián)；TMSG-1 低表達的結腸癌患者總體生存情況高于TMSG-1 高表達（P < 0.05），提示TMSG-1 表達與結腸癌預后密切相關。

表2 不同病理特征TMSG-1 表達和CXCR4 表達比較[例（%）]

圖1 TMSG-1 和CXCR4 表達與患者生存情況的關系

CXCR4 屬具有7 次跨膜結構域的一種G 蛋白偶聯(lián)受體超家族成員，并且是腫瘤細胞表達最常見的一種趨化因子受體。CXCR4 主要通過與CXCL12 相互作用構成生物反應軸，從而激活抑制的多種信號通路，參與機體的多種病理過程和生理過程，如血管生成、淋巴細胞和造血系統(tǒng)的發(fā)育和成熟、炎癥細胞的活化和遷移、造血肝細胞的歸巢[25-27]。CXCR4 在惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和生長過程中，主要促進血管的形成和生長，從而參與淋巴系統(tǒng)和造血系統(tǒng)的發(fā)育和成熟[28-29]。本研究結果顯示，癌組織CXCR4 陽性表達率高于癌旁組織（P<0.05），提示結腸癌組織中CXCR4 高表達；TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期CXCR4 陽性表達率高于Ⅰ～Ⅱ期，淋巴結轉(zhuǎn)移CXCR4 陽性表達率高于無淋巴結轉(zhuǎn)移，遠處轉(zhuǎn)移CXCR4 陽性表達率高于無遠處轉(zhuǎn)移，提示CXCR4 表達與TNM 分期、淋巴結轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移相關聯(lián)；CXCR4 低表達的結腸癌患者總體生存情況高于CXCR4 高表達者（P < 0.05），提示CXCR4 表達與結腸癌預后密切相關。

綜上所述，結腸癌中TMSG-1 和CXCR4 呈高表達，且與TNM 分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和預后密切相關。但本研究存在一些局限之處，納入樣本量相對較少，觀察指標相對較少，故而還需在后續(xù)中增加樣本量和觀察指標深入研究，提供可靠的參考價值。