• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    畜禽微生物耐藥組研究進(jìn)展

    2021-01-22 09:30:40馬濤陸唯李松勵樊霞
    生物技術(shù)通報 2021年1期
    關(guān)鍵詞:耐藥性糞便畜禽

    馬濤 陸唯 李松勵 樊霞

    (1. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料生物技術(shù)重點實驗室,北京 100081;2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所,北京100193;3. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所 國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心,北京 100081)

    雖然抗生素自問世以來已經(jīng)挽救了數(shù)百萬人的生命,但伴隨產(chǎn)生的抗生素耐藥性也對全球公眾健康造成了巨大威脅。如果不加以改善,預(yù)計到2050年,每年因抗生素耐藥性導(dǎo)致死亡的人數(shù)將從70萬上升至1000萬[1]。抗生素耐藥性問題產(chǎn)生的主要原因并非僅僅在于人類自身不合理地使用抗生素,還在于絕大部分(73%)抗生素用于給人類提供肉奶蛋等食品的養(yǎng)殖動物[2]。事實上,自20世紀(jì)50年代起,抗生素就應(yīng)用于畜禽生產(chǎn),起到了提高飼料轉(zhuǎn)化效率、促進(jìn)生長或治療疾病/降低疾病發(fā)生率的作用[3]。尤其是2000年以來,非洲、亞洲和南美等中低收入國家的肉類產(chǎn)量分別增長了68%、64%和40%[2],這很大程度上得益于集約化生產(chǎn)體系全球化的擴(kuò)展和普及,而抗生素的使用對于維持動物健康和提高生產(chǎn)力起到了至關(guān)重要的作用[4]。全球用于雞、豬和牛的抗生素總使用量將從2010年的約6.3×103t萬噸增加到2030年的約10.5×103t噸,增幅高達(dá)67%[5]。越來越多的證據(jù)證明抗生素在畜禽生產(chǎn)上的大量使用與人類抗生素耐藥性問題的加重存在緊密聯(lián)系[6-8],這是因為畜禽消化道或畜產(chǎn)品(如牛奶)微生物攜帶的抗生素耐藥基因(Antibiotic resistance gene,ARG)可以轉(zhuǎn)移到人類消化道微生物中[9]?;诖?,2017年世界衛(wèi)生組織呼吁其成員國減少獸用抗菌藥物的使用[10-11]。我國已經(jīng)禁止在日糧中添加任何促生長的抗生素,然而動物疫病發(fā)生時還需要使用抗生素治療。因此,抗生素耐藥性是21世紀(jì)全球面臨的最緊迫的挑戰(zhàn)之一,對現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和食品安全構(gòu)成威脅。

    為了降低畜禽生產(chǎn)環(huán)節(jié)ARG向人類的傳播,首先需要明確畜禽消化道或產(chǎn)品微生物攜帶哪些ARG。傳統(tǒng)上通過分離含有潛在ARG的細(xì)菌并提取其DNA,再通過PCR或者比較全基因組測序的方法明確該細(xì)菌含有哪些ARG[12]。但該方法的局限性在于僅能研究單一的、可體外培養(yǎng)的細(xì)菌。近年來,基于高通量測序技術(shù)來分析ARG的研究越來越受到青睞,因為該方法與傳統(tǒng)技術(shù)相比擴(kuò)大了ARG的監(jiān)測范圍[13-14]。例如,使用宏基因組學(xué)來確定某個環(huán)境微生物群落全部抗生素耐藥性基因—耐藥組(Resistome)[15-16]組成和相對豐度的方法已廣泛應(yīng)用于人類腸道[17-18]、水源[19-21]、土壤[22-23]等微生物群落的研究中,畜禽消化道微生物耐藥組研究也開始受到關(guān)注。本文首先介紹了微生物耐藥組的研究方法,隨后對近年來畜禽消化道和乳中微生物耐藥組及其影響因素研究進(jìn)展進(jìn)行了總結(jié)和歸納,最后提出了未來研究方向,包括研究方法的標(biāo)準(zhǔn)化、耐藥組基因表達(dá)的研究等,旨在為控制畜禽養(yǎng)殖過程中ARG向人類的傳播提供思路。

    1 微生物耐藥組的研究方法

    1.1 基于序列的研究方法

    該方法是利用生物信息學(xué)分析工具,將宏基因組或宏轉(zhuǎn)錄組測定的細(xì)菌基因組或轉(zhuǎn)錄組序列與ARG數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對來實現(xiàn)。具體而言,首先向分析工具提供測定的DNA或RNA序列,分析工具隨后使用不同的搜索算法與ARG參考數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,最終確定該序列是否存在已知的ARG(圖1)。上述流程可利用商業(yè)公司提供的專有平臺來實現(xiàn),或者從github及bitbucket等開源平臺上下載工具來完成分析。生物信息學(xué)分析工具雖然多種多樣,但按照接受輸入數(shù)據(jù)類型的不同,主要分為可分析組裝后序列和可分析原始序列兩大類[24]。需要指出的是,不論何種分析工具都不能對輸入序列數(shù)據(jù)質(zhì)量進(jìn)行控制,因此需要首先對原始序列或組裝后序列進(jìn)行質(zhì)量控制,再進(jìn)行耐藥組分析。

    圖1 基于宏基因組測序的微生物耐藥組分析流程[25]

    基于原始序列和基于組裝后序列的分析工具各有優(yōu)缺點:使用可分析組裝后的序列的工具時,組裝軟件的差異可能會影響結(jié)果的可比性[26-27],這時由于序列組裝后,將輸入數(shù)據(jù)與ARG參考數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較的最常見方法依賴于BLAST和隱馬爾可夫模型搜索[28]。基于BLAST的工具可以根據(jù)基因長度和相似性百分比的默認(rèn)設(shè)置給出不同的輸出結(jié)果,如果設(shè)置太低或太高,都會對特異性產(chǎn)生負(fù)面影響。此外,基于組裝的方法對于計算機(jī)配置要求很高。盡管有這些缺點,但是基于組裝的方法可以分析ARG的遺傳背景[25]。另一方面,使用可分析原始序列的工具時,其將序列數(shù)據(jù)與ARG數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對的方式較多,包括Bowtie2、BWA和KMA等[24]。該類分析工具的缺點是其比對時間相對于使用可分析組裝后序列的工具較長,但其優(yōu)點在于能夠檢測出由于組裝不完整可能會被忽略掉的耐藥基因[24]。

    除分析方法外,耐藥組預(yù)測準(zhǔn)確性還取決于耐藥基因參考數(shù)據(jù)庫的完整性。耐藥基因參考數(shù)據(jù)庫可細(xì)分為專門用于檢測特定類別的耐藥基因(例如ARGO參考數(shù)據(jù)庫用于檢測耐β-內(nèi)酰胺(beta-lactam)和萬古霉素(vancomycin)基因[29]),和用于檢測出DNA/氨基酸序列中理論上可能存在的耐藥基因(如ARDB[30]、ResFinder[31]、CARD[32]數(shù)據(jù)庫)。除了上述側(cè)重點不同,不同耐藥基因參考數(shù)據(jù)庫還具有其他重要特征。首先,耐藥基因參考數(shù)據(jù)庫中收錄條目的標(biāo)準(zhǔn)不同:如CARD中的條目必須已在科學(xué)文獻(xiàn)中發(fā)表[32],而在ResFinder對條目是否發(fā)布無嚴(yán)格的要求[31]。其次,條目的類型在參考數(shù)據(jù)庫之間也不同,大多數(shù)參考數(shù)據(jù)庫包括全部耐藥基因,只有少數(shù)參考數(shù)據(jù)庫也包括了染色體突變的耐藥基因(如MUBII-TB-DB[33]和PointFinder[34])。最后,耐藥基因參考數(shù)據(jù)庫在條目格式(fasta或json等)、下載權(quán)限,以及定期維護(hù)頻率方面也有所不同[25]。因此在選擇最佳的耐藥基因數(shù)據(jù)庫時需要對這些區(qū)別特征有充分的了解。

    1.2 基于功能宏基因組學(xué)的研究方法

    功能宏基因組學(xué)是一種多步驟的研究手段,其利用編碼混合微生物群落的分離DNA的表達(dá)文庫來轉(zhuǎn)化相關(guān)的宿主微生物。隨后可以從廣泛的目標(biāo)表型中選擇對應(yīng)的轉(zhuǎn)化克隆,如酶促、脂解或水解活性[35]。利用功能宏基因組學(xué)方法,結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù),篩選并構(gòu)建抗生素耐藥基因庫,最后再利用生物信息學(xué)分析,確定新型的ARG[36-37]。應(yīng)用功能宏基因組學(xué)的微生物耐藥組研究流程如圖2所示。

    圖2 基于功能宏基因組學(xué)的微生物耐藥組分析流程[36]

    宏基因組文庫構(gòu)建的第一步是DNA提取,需要盡力保證完全提取樣品中的總DNA。此外,還需要得到足夠的片段以獲取表達(dá)所需的完整的目的基因或基因簇[38];隨后選擇適宜的載體(如質(zhì)粒)和宿主菌(如大腸肝菌),利用提取的DNA構(gòu)建宏基因組文庫,根據(jù)所用載體的不同,需要將DNA片段化,以確保載體連接和轉(zhuǎn)化效率,然后通過化學(xué)轉(zhuǎn)化法或電轉(zhuǎn)化法將重組的質(zhì)粒載體導(dǎo)入宿主菌,實現(xiàn)宏基因組文庫的構(gòu)建[39]。

    文庫構(gòu)建完成后,即可進(jìn)行抗生素耐藥功能篩選,由于構(gòu)建宏基因組文庫的宿主菌大多為革蘭氏陰性大腸桿菌,因此盡可能避免革蘭氏陰性菌不敏感抗生素(如糖肽類、大環(huán)內(nèi)酯類、萬古霉素等),通常選擇在環(huán)境中檢出率較高的抗生素(如四環(huán)素類、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類)[39]。在進(jìn)行抗生素耐藥性篩選時,一般使用抗生素的最小抑菌濃度,收集在此濃度下存活的宿主菌(陽性克隆),提取其DNA,通過PCR擴(kuò)增并加入barcode序列[40];對DNA進(jìn)行質(zhì)檢后,構(gòu)建測序文庫,用于高通量測序(如Nanopore或Pacbio等平臺),最后通過生物信息學(xué)分析手段,檢測所篩選的ARG,具體可通過poreFUME等集成式的分析流程分析[36],也可自行選擇并組合分析軟件進(jìn)行分析[41]。

    2 畜禽消化道微生物耐藥組分析

    畜禽消化道微生物及其耐藥組的分析研究在近年開始受到關(guān)注[42]。畜禽消化道微生物耐藥基因既可能來源自母體,也可能通過與周圍環(huán)境中的耐藥性微生物(主要是細(xì)菌)直接接觸而獲得[43]。另一方面,消化道微生物具有廣泛而多樣的遺傳庫,可促進(jìn)耐藥性在常駐共生菌種之間和內(nèi)部的傳播[44]。從目前研究報道來看,四環(huán)素(Tetracycline)耐藥基因是畜禽(包括豬、雞、反芻動物)消化道微生物普遍存在的耐藥基因。

    2.1 豬的消化道微生物耐藥組分析

    已有研究證明未接觸抗生素的豬糞便中存在耐藥性基因[45-46],其中最主要的是四環(huán)素耐藥基因[47]。在沒有使用抗生素的情況下,豬場中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的四環(huán)素耐藥基因包括tetO、tetW、tetM、tetX和tetQ,另外也有多個大環(huán)內(nèi)酯類(Macrolide)抗性基因(ermG、ermF和ermB)[48];同樣,新生仔豬在未接觸抗生素的情況下糞便中也有ARG[49]。基于宏基因組測序結(jié)果,我國學(xué)者對國內(nèi)4個大型豬場的豬糞耐藥組進(jìn)行了分析發(fā)現(xiàn),四環(huán)素、氨基糖苷(Aminoglycoside)和多藥(Multidrug)耐藥基因占全部耐藥基因相對豐度的近70%[50]。Munk等[51]對歐洲9個國家豬的糞便耐藥組進(jìn)行了分析,結(jié)果表明不同國家豬糞便耐藥基因組成和比例相對一致,四環(huán)素耐藥基因相對豐度最高,超過了60%,其次是大環(huán)內(nèi)酯、β-內(nèi)酰胺和氨基糖苷類等基因。此外,共發(fā)現(xiàn)了33個核心ARG,包括VanG、tetC、blaACI和cfxA等。最近有研究表明,四環(huán)素、β-內(nèi)酰胺和多藥耐藥類耐藥基因表達(dá)量與大腸埃希氏菌(Escherichia)和普雷沃氏菌(Prevotella)相對豐度存在正相關(guān)[52],說明這些菌可能是上述耐藥基因的主要宿主,為通過調(diào)控微生物組成降低豬生產(chǎn)中耐藥基因向環(huán)境中的傳播提供了依據(jù)。

    2.2 家禽的消化道微生物耐藥組分析

    Munk等[51]對歐洲9個國家家禽的糞便耐藥組進(jìn)行了分析,其中四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯和氨基糖苷類等基因為主,但三者相對豐度較接近,與豬糞便ARG中四環(huán)素耐藥基因占絕對優(yōu)勢有很大的區(qū)別;此外共發(fā)現(xiàn)了49個核心ARG,包括strAB、sul2、blaTEM和tetA基因等。金霉素是家禽和豬生產(chǎn)中最常用的抗菌藥物之一[53]。我國學(xué)者研究了使用金霉素對肉雞糞便耐藥組的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用治療劑量的金霉素促進(jìn)了糞便四環(huán)素耐藥基因tetA和tetW的豐度,并抑制了多藥耐藥基因mdtA、mdtC、mdtK、ompR和TolC的豐度[54]。此外,治療劑量的金霉素導(dǎo)致變形菌門(Proteobacteria)相對豐度降低,主要是由于其降低了該菌門中大腸埃希菌/志賀氏菌屬(Shigella)的相對豐度(從72%降至58%)。金霉素對大腸埃希菌的抑制作用是治療劑量組中多藥耐藥基因減少的主要原因,因為大腸埃希菌是多藥耐藥基因的主要宿主[54]。

    2.3 反芻動物的消化道微生物耐藥組分析

    作為反芻動物獨有的消化器官,瘤胃微生物耐藥組在近年來受到廣泛關(guān)注。Auffret等[55]比較研究了不同精粗比、品種、使用抗生素對肉牛瘤胃微生物耐藥組的影響,結(jié)果表明,肉牛瘤胃耐藥基因以大環(huán)內(nèi)酯、氯霉素(chloramphenicol)、β-內(nèi)酰胺和氨基糖苷為主;品種對于瘤胃耐藥組的影響不顯著;飼喂高粗料的肉牛瘤胃樣品中氯霉素和微霉素(microcin)耐藥基因占主導(dǎo)地位,而飼喂高精料的肉牛對氨基糖苷和鏈霉素的耐藥性更豐富。此外,高精料日糧還增加了變形菌門的相對豐度,其中包括許多動物和人畜共患病原體。Thomas等[56]研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加莫能菌素和泰樂菌素的肉牛瘤胃中檢測到了大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因(ermF和ermG),在未添加抗生素的肉牛瘤胃中檢測到了氨基糖苷類耐藥基因(aadE和aph(3)-III)。上述研究結(jié)果表明牛瘤胃微生物普遍存在耐藥基因,與抗生素飼料添加劑的使用沒有必然聯(lián)系。目前關(guān)于羊瘤胃微生物耐藥組研究非常有限,Hitch等[57]在綿羊瘤胃中發(fā)現(xiàn)了30種不同的耐藥基因,以達(dá)托霉素(daptomycin)耐藥基因最為常見。

    除瘤胃外,還有學(xué)者研究了使用抗生素對肉牛糞便微生物耐藥組的影響。飼糧中添加莫能菌素后,肉牛糞便中共檢測到了43種耐藥基因,主要為氨基糖苷、β-內(nèi)酰胺、四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈霉菌素 B(macrolide-lincosamide-streptogramin B)類,與沒有添加莫能菌素的肉牛相比,四環(huán)素和MLS等耐藥基因相對豐度并未降低[58]。北美經(jīng)常在肉牛抵達(dá)飼養(yǎng)場后注射抗生素以控制呼吸道疾病,土拉霉素是一種用于預(yù)防與呼吸道疾病相關(guān)的抗生素[59-61],給新進(jìn)牛只皮下注射土拉霉素后,分別在注射后的第1天和第11天比較對照組和注射組微生物和耐藥組差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組之間的微生物組和耐藥組成并沒有顯著差異。這些結(jié)果表明,與普通的代謝型抗微生物藥物治療相比,向飼養(yǎng)場的過渡以及飲食、地理環(huán)境的變化可能對飼養(yǎng)場牛的糞便微生物耐藥組的影響更大[62]。此外,最近一項研究發(fā)現(xiàn),飼養(yǎng)過程中使用抗生素的牛場糞便中的耐藥基因要高于不使用抗生素牛場糞便中的耐藥基因豐度,其中育肥牛的四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)酯類-林可酰胺-鏈霉菌素B類耐藥性比奶牛糞便中豐富,而β-內(nèi)酰胺類在奶牛糞便中更豐富,但過程分析(Procrustes analysis)發(fā)現(xiàn)微生物群落與耐藥組缺乏一致性[63]。最近有學(xué)者研究了使用抗生素對犢牛糞便微生物耐藥組的長效作用影響。將42只小牛犢隨機(jī)分為3組,第一組在5 d內(nèi)每天口服兩次1 g土霉素(高土霉素),第二組在7周內(nèi)每天接受100-200 μg的土霉素(低土霉素),第三組未接受土霉素(對照組),通過宏基因組測序分析了對腸道菌群和耐藥基因豐度的時間影響。結(jié)果表明3種耐藥基因(tetM、floR和mel)的相對豐度在對照組和抗生素之間存在顯著差異。通過qPCR驗證宏基因組測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)高土霉素組在第28-35天的tetM豐度達(dá)到峰值,而在低土霉素組中未發(fā)現(xiàn)任何耐藥基因豐度的增加[64]。除使用抗生素外,最近也有研究表明飼糧中添加釀酒酵母對肉牛糞便中的耐藥組無顯著影響[65],該研究結(jié)果表明四環(huán)素耐藥基因的相對豐度最高,包括tetQ、tetO、tetW和tet32;大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈霉菌素 B的mefA基因相對豐度最高,其次是ermq、mphb和lunc;氨基糖苷類耐藥基因中,相對豐度最高的是ant9,其次是cfx。上述研究表明除使用抗生素或益生菌外,其他因素(例如農(nóng)場的位置、牛源、管理模式等)都可能影響了糞便耐藥組,因此無法簡單地將糞便耐藥組歸咎于單一因素的影響。

    3 乳中微生物耐藥組分析

    據(jù)估計,美國至少有3%的人口消費未經(jīng)巴氏消毒的生牛乳,且對于生牛乳需求持續(xù)增長。但是,食用原奶會導(dǎo)致食源性疾病,并且是含有可轉(zhuǎn)移的抗微生物耐藥基因(ARG)的細(xì)菌的來源。Liu等[66]比較分析了加利福尼亞州生牛乳和不同方式巴氏消毒后牛乳中微生物組及其耐藥組。結(jié)果表明剛采集的生牛乳和高溫瞬時巴氏消毒的牛乳中未檢測到任何耐藥基因,在室溫下放置24 h后,生牛乳中檢測到了49種耐藥基因,分別為多藥、氨基糖苷、β-內(nèi)酰胺和四環(huán)素這4大類耐藥基因。對耐藥組的微生物宿主進(jìn)行預(yù)測發(fā)現(xiàn),9個已知菌科可能攜帶這些ARG,其中假單胞菌科(Pseudomonadaceae,36個)具有最多的獨特ARGs、其次是腸桿菌科(Enterobacteriaceae,28個)、耶爾森菌科(Yersiniaceae,14個)和莫拉菌科(Moraxellaceae,8個)。最近研究發(fā)現(xiàn)坦桑尼亞北部地區(qū)居民攜帶的耐藥性大腸桿菌可能來源自生牛奶[67];巴西的一項研究表明,從水牛奶中分離出的凝固酶陰性葡萄球菌可能是潛在的耐藥基因如耐甲氧西林基因(mecA)的宿主[68]。上述研究表明,耐藥基因經(jīng)牛奶向人體中的傳播對人類健康造成的潛在危害可能比特定的病原體更為普遍,因此需要特別關(guān)注消費未經(jīng)巴氏消毒奶制品的低收入國家[69-70]的微生物食品安全風(fēng)險。

    4 未來研究方向

    全球范圍內(nèi)對于畜禽消化道及其產(chǎn)品微生物耐藥組分析研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展,主要體現(xiàn)在初步明確了上述耐藥組的基因組成和相對豐度。然而目前微生物耐藥組分析還存在著一定的局限性,從分析技術(shù)方法和研究思路方面還需要進(jìn)一步拓展挖掘。

    首先,目前科學(xué)文獻(xiàn)中至少公開了近50種可用于分析耐藥組的資源[71-72],既包括了可以嵌入用戶自己的生物信息學(xué)流程的基礎(chǔ)ARG參考數(shù)據(jù)庫,也包括了自帶參考數(shù)據(jù)庫且集成搜索工具的全套分析工具。由于這些分析工具的功能差異很大,因此需要考慮使用不同工具獲得的結(jié)果的可比性[73]。

    其次,耐藥組依賴于細(xì)菌組成,而后者的分析受限于已知的微生物數(shù)據(jù)庫,鑒于細(xì)菌數(shù)據(jù)庫的局限性,目前尚有大量無法鑒定的微生物,因此已知的ARG可能僅代表實際抗菌素耐藥菌種群的一小部分。可以合理假設(shè),隨著細(xì)菌基因組測序和功能宏基因組學(xué)的爆炸式增長以及數(shù)據(jù)庫的不斷完善,將鑒定出許多以前功能未知且無法單獨通過序列識別的新型ARG[24]。

    第三,細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的一個重要原因是能夠通過質(zhì)粒(Plasmid)之類的可移動遺傳元件(Mobile genetic element,MGE)獲得耐藥基因的能力[74]。這是由于細(xì)菌之間存在廣泛的水平基因轉(zhuǎn)移(Horizontal gene transfer,HGT)[75-76]。質(zhì) 粒 介導(dǎo)的耐藥基因包括qnrA、blaCTX-M和mcr-1等[77]已追溯到了其環(huán)境和動物起源,然而目前針對畜禽微生物質(zhì)粒等MGE攜帶的耐藥組研究仍然非常有限。已有研究表明,質(zhì)粒是牛瘤胃細(xì)菌群體中大量存在的MGE之一[78],未來可基于ACLAME[79]和PlasmidFinder[80]等參考數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步明確畜禽消化道或產(chǎn)品中MGE攜帶的耐藥組,為限制耐藥基因通過HGT在細(xì)菌之間傳播提供依據(jù)。

    第四,目前畜禽微生物耐藥組研究主要基于宏基因組短鏈[55-56]或長鏈測序[81]等技術(shù),基因表達(dá)能夠更好地評估生物生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)功能活性[82],但耐藥組的表達(dá)及其影響因素尚不清楚。最近已有研究利用宏基因組學(xué)和宏轉(zhuǎn)錄組評估了廢水處理廠的耐藥組,并揭示了工廠位置不僅影響耐藥組組成,而且影響具體耐藥基因的表達(dá)[83]。最近也有基于宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究分析了雞和豬腸道的耐藥組,但其樣本數(shù)理有限(每種動物只有6個樣品)[84],因此未來需要更多基于宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究,充分了解耐藥基因的表達(dá)情況,從而有針對性地對其進(jìn)行調(diào)控。

    最后,目前耐藥組研究的最大局限在于沒有對耐藥基因的功能進(jìn)行驗證,通過基因注釋獲得的耐藥基因未必具有真正的耐藥活性,因此一定程度上限制了將ARG微生物標(biāo)記物用于新興耐藥機(jī)制的臨床應(yīng)用。對于畜禽等養(yǎng)殖動物腸道等環(huán)境中新型ARG的存在以及上述ARG的耐藥和傳播機(jī)制有待于系統(tǒng)地研究和進(jìn)一步驗證[85]。

    5 總結(jié)

    耐藥組分析表明畜禽消化道及其產(chǎn)品微生物存在豐富的耐藥性基因,這些耐藥性基因的存在可能與抗生素的使用沒有直接聯(lián)系,但其組成和相對豐度可能受到抗生素、益生菌或其他飼料添加劑的影響。未來需要進(jìn)一步完善耐藥組分析手段和技術(shù),探明耐藥組的表達(dá)以及質(zhì)粒攜帶的耐藥組,從而獲得完整全面的畜禽消化道微生物耐藥組分析結(jié)果。這將有助于充分評價動物養(yǎng)殖過程中耐藥基因向人類傳播的可能性,并通過有效調(diào)控途徑降低耐藥性基因?qū)θ祟惤】岛铜h(huán)境的威脅。

    猜你喜歡
    耐藥性糞便畜禽
    畜禽夏季喂野菜 防病快長真不賴
    菌株出馬讓畜禽污染物變廢為寶
    夏季養(yǎng)畜禽 驅(qū)蚊有妙招
    A new pet obsession of Silkie chicken
    長絲鱸潰爛癥病原分離鑒定和耐藥性分析
    移植糞便治療克羅恩病
    嬰幼兒感染中的耐藥菌分布及耐藥性分析
    WHO:HIV耐藥性危機(jī)升級,普及耐藥性檢測意義重大
    多胚蛋白酶 高效養(yǎng)畜禽
    “糞便移稙”治病真有用
    人妻制服诱惑在线中文字幕| 日韩强制内射视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 91在线观看av| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲无线在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 久久久国产成人精品二区| 国产精品野战在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 97热精品久久久久久| 中文字幕免费在线视频6| 国产免费男女视频| 日韩欧美精品v在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一本一本综合久久| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲一区二区三区色噜噜| avwww免费| 69人妻影院| 成人鲁丝片一二三区免费| 99热精品在线国产| 亚洲精品亚洲一区二区| 深爱激情五月婷婷| 一级av片app| 欧美+日韩+精品| 国产av在哪里看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲在线自拍视频| av在线蜜桃| 黑人高潮一二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 成人综合一区亚洲| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲精品国产av成人精品 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲在线自拍视频| 此物有八面人人有两片| 国产黄色小视频在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美在线一区亚洲| 又爽又黄a免费视频| av天堂中文字幕网| 亚洲自偷自拍三级| 一级黄片播放器| 少妇的逼水好多| 国产爱豆传媒在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 可以在线观看的亚洲视频| 国产av麻豆久久久久久久| 免费在线观看影片大全网站| a级毛片a级免费在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产av麻豆久久久久久久| 午夜福利高清视频| 亚洲内射少妇av| av女优亚洲男人天堂| 精品国内亚洲2022精品成人| 日本免费一区二区三区高清不卡| 露出奶头的视频| 亚洲人与动物交配视频| 赤兔流量卡办理| 国产三级中文精品| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美成人精品欧美一级黄| 伊人久久精品亚洲午夜| 高清日韩中文字幕在线| 午夜老司机福利剧场| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产大屁股一区二区在线视频| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲成人精品中文字幕电影| 露出奶头的视频| 一进一出抽搐动态| 99热精品在线国产| 亚洲第一区二区三区不卡| 色综合亚洲欧美另类图片| 天美传媒精品一区二区| 日本欧美国产在线视频| 国产精品野战在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 淫秽高清视频在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 在线看三级毛片| 天堂网av新在线| 在线观看66精品国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日韩中字成人| 久久久久久久久久黄片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 最近2019中文字幕mv第一页| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 三级毛片av免费| 国产精品一二三区在线看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av在线亚洲专区| av中文乱码字幕在线| 校园人妻丝袜中文字幕| av在线老鸭窝| 久久久久久九九精品二区国产| 露出奶头的视频| 国产单亲对白刺激| 不卡一级毛片| 一夜夜www| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美最新免费一区二区三区| 色哟哟·www| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久久久久久久成人| av免费在线看不卡| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产男人的电影天堂91| 国产成人aa在线观看| 中文资源天堂在线| 美女黄网站色视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美激情国产日韩精品一区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产视频内射| av天堂中文字幕网| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲久久久久久中文字幕| 日本成人三级电影网站| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产探花极品一区二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 性欧美人与动物交配| 成年版毛片免费区| 欧美性猛交黑人性爽| 国产视频内射| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 精品一区二区免费观看| 亚洲欧美清纯卡通| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产视频内射| 永久网站在线| 成人午夜高清在线视频| 真人做人爱边吃奶动态| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久国产av精品国产电影| 日韩欧美在线乱码| 97超视频在线观看视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 黄色一级大片看看| 久久久久久国产a免费观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 波野结衣二区三区在线| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品久久久久久久久免| 午夜福利高清视频| 一夜夜www| 国内精品一区二区在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲18禁久久av| 韩国av在线不卡| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲自偷自拍三级| 老司机福利观看| 在线天堂最新版资源| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产乱人偷精品视频| 国产成人精品久久久久久| 久久精品综合一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲成人久久性| 日韩欧美免费精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 精品人妻视频免费看| 中国美女看黄片| 麻豆一二三区av精品| 黄片wwwwww| 欧美色视频一区免费| 色5月婷婷丁香| 日日撸夜夜添| 国产单亲对白刺激| 悠悠久久av| 激情 狠狠 欧美| 国产91av在线免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 岛国在线免费视频观看| 免费人成在线观看视频色| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 午夜免费激情av| 日韩欧美在线乱码| 波多野结衣高清作品| 最新在线观看一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 我要看日韩黄色一级片| 中文字幕久久专区| 欧美日韩精品成人综合77777| 最近在线观看免费完整版| 特级一级黄色大片| 99久久精品热视频| 少妇熟女欧美另类| 三级国产精品欧美在线观看| 六月丁香七月| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲内射少妇av| 国产91av在线免费观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 天天一区二区日本电影三级| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日本三级黄在线观看| 国产三级中文精品| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久久国产网址| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 毛片女人毛片| 成年版毛片免费区| 一夜夜www| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美激情在线99| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一区福利在线观看| 免费看日本二区| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品成人久久久久久| 观看美女的网站| 欧美中文日本在线观看视频| 成年女人看的毛片在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 97超碰精品成人国产| 亚洲美女视频黄频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品国产高清国产av| 亚洲av成人av| 老女人水多毛片| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品电影一区二区三区| 亚洲av免费在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 日本与韩国留学比较| 国内精品宾馆在线| 精品不卡国产一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 成人欧美大片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲不卡免费看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲欧美清纯卡通| 成人亚洲欧美一区二区av| 99九九线精品视频在线观看视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 最新中文字幕久久久久| 免费看日本二区| 久久热精品热| 好男人在线观看高清免费视频| 一个人看的www免费观看视频| 我要看日韩黄色一级片| 少妇的逼水好多| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 欧美激情久久久久久爽电影| 综合色丁香网| 尾随美女入室| 久久久精品94久久精品| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成年免费大片在线观看| 波多野结衣高清无吗| 国产亚洲精品久久久com| 日韩精品中文字幕看吧| 国产黄色小视频在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产一区二区在线av高清观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久99热这里只有精品18| 性欧美人与动物交配| 日韩精品青青久久久久久| 久久久色成人| 国产高清不卡午夜福利| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 一级毛片aaaaaa免费看小| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 久久精品国产自在天天线| 国产精品久久久久久av不卡| 成年av动漫网址| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 深夜精品福利| 日韩欧美国产在线观看| 免费av毛片视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩av不卡免费在线播放| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| av在线观看视频网站免费| 成人漫画全彩无遮挡| 国产精品一二三区在线看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 美女内射精品一级片tv| 又黄又爽又免费观看的视频| 69人妻影院| 色5月婷婷丁香| 成人特级av手机在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产成人a区在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 久久久色成人| 看十八女毛片水多多多| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲在线自拍视频| 国产亚洲91精品色在线| 99精品在免费线老司机午夜| 国产一区二区在线av高清观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人妻久久中文字幕网| 无遮挡黄片免费观看| 国产日本99.免费观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 少妇高潮的动态图| 嫩草影院入口| .国产精品久久| 免费搜索国产男女视频| 国语自产精品视频在线第100页| 成人午夜高清在线视频| 亚洲色图av天堂| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日韩国内少妇激情av| 日韩欧美免费精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 一区二区三区四区激情视频 | 色在线成人网| 亚洲一区高清亚洲精品| 日本色播在线视频| 国产亚洲欧美98| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩人妻高清精品专区| aaaaa片日本免费| 日韩人妻高清精品专区| 在线看三级毛片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲国产精品成人久久小说 | 国产极品精品免费视频能看的| 日韩欧美免费精品| 亚洲在线自拍视频| 久久亚洲精品不卡| 国产精品伦人一区二区| 一区二区三区高清视频在线| 男女视频在线观看网站免费| 欧美日本视频| 免费电影在线观看免费观看| 日本黄色片子视频| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美zozozo另类| 亚洲天堂国产精品一区在线| 免费在线观看影片大全网站| 两个人视频免费观看高清| 青春草视频在线免费观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲国产色片| 亚洲经典国产精华液单| 露出奶头的视频| av在线老鸭窝| www日本黄色视频网| 精品人妻熟女av久视频| 婷婷精品国产亚洲av| 听说在线观看完整版免费高清| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 最好的美女福利视频网| 亚洲最大成人手机在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 成年女人永久免费观看视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 3wmmmm亚洲av在线观看| 在线播放国产精品三级| 天堂动漫精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 特级一级黄色大片| 天天躁日日操中文字幕| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 99riav亚洲国产免费| 国产熟女欧美一区二区| 日韩亚洲欧美综合| 久久欧美精品欧美久久欧美| 成人二区视频| 99久久精品热视频| 天堂网av新在线| 精品久久久久久久久av| 尾随美女入室| 91久久精品国产一区二区成人| 国产毛片a区久久久久| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲乱码一区二区免费版| 中出人妻视频一区二区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 露出奶头的视频| 久久久久久久久久成人| 嫩草影院入口| 三级国产精品欧美在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲七黄色美女视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产老妇女一区| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品电影一区二区三区| 男女下面进入的视频免费午夜| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 不卡一级毛片| 国产亚洲精品久久久com| 国产高潮美女av| 久久精品夜色国产| www日本黄色视频网| 色尼玛亚洲综合影院| av免费在线看不卡| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 欧美最新免费一区二区三区| 最近在线观看免费完整版| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日韩av在线大香蕉| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 深夜a级毛片| 中文字幕免费在线视频6| 91麻豆精品激情在线观看国产| 老女人水多毛片| 色综合亚洲欧美另类图片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 在线观看午夜福利视频| 亚洲经典国产精华液单| 日韩亚洲欧美综合| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 中文字幕免费在线视频6| 我的女老师完整版在线观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久综合国产亚洲精品| .国产精品久久| 1024手机看黄色片| 亚洲真实伦在线观看| 校园春色视频在线观看| 国产成年人精品一区二区| 中文字幕av在线有码专区| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲成人久久爱视频| 国产精品无大码| 久久久久久久久久久丰满| 久久人人爽人人爽人人片va| 色5月婷婷丁香| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国内精品美女久久久久久| 一本久久中文字幕| 黄色日韩在线| 久久韩国三级中文字幕| 国内精品一区二区在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 真人做人爱边吃奶动态| 色哟哟·www| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 香蕉av资源在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲精品在线观看二区| 中国美女看黄片| 婷婷亚洲欧美| 日韩欧美免费精品| 午夜视频国产福利| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 有码 亚洲区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 午夜福利18| 国产中年淑女户外野战色| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲国产色片| 久久久久久国产a免费观看| 日本熟妇午夜| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久精品国产亚洲av天美| 少妇的逼好多水| 国产成人freesex在线 | 国产精品福利在线免费观看| 日本三级黄在线观看| 国产精品三级大全| 少妇高潮的动态图| 人妻少妇偷人精品九色| 男女下面进入的视频免费午夜| 成人综合一区亚洲| 国产高清有码在线观看视频| 国产免费一级a男人的天堂| 最新在线观看一区二区三区| av免费在线看不卡| 亚洲无线观看免费| 插阴视频在线观看视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品久久久久久久久av| 白带黄色成豆腐渣| 乱系列少妇在线播放| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久久精品大字幕| а√天堂www在线а√下载| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品色激情综合| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产亚洲精品久久久com| 村上凉子中文字幕在线| 日本一本二区三区精品| 午夜亚洲福利在线播放| 精品一区二区三区人妻视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲熟妇熟女久久| 又黄又爽又免费观看的视频| 能在线免费观看的黄片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产在线男女| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲精品一区av在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| av在线天堂中文字幕| 日本黄色视频三级网站网址| 国产单亲对白刺激| 亚洲熟妇熟女久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩欧美在线乱码| 亚洲欧美清纯卡通| 日本色播在线视频| av专区在线播放| 亚洲五月天丁香| 大型黄色视频在线免费观看| 在线播放国产精品三级| 深爱激情五月婷婷| 日本黄大片高清| 欧美极品一区二区三区四区| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲成人av在线免费| 成年免费大片在线观看| 波多野结衣高清作品| 黄色一级大片看看| 久99久视频精品免费| 日韩制服骚丝袜av| 91狼人影院| 老司机影院成人| 国内揄拍国产精品人妻在线| 人人妻人人看人人澡| 高清毛片免费观看视频网站| 深夜a级毛片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久韩国三级中文字幕| 日本五十路高清| 日本一本二区三区精品| 久久6这里有精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产在视频线在精品| 综合色丁香网| 久久久久久九九精品二区国产| 久久久久久久久久久丰满| 偷拍熟女少妇极品色| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美高清性xxxxhd video| 嫩草影院精品99| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 特大巨黑吊av在线直播| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成年免费大片在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 干丝袜人妻中文字幕| 色哟哟·www| 插逼视频在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 老司机午夜福利在线观看视频| 97在线视频观看| 欧美三级亚洲精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 听说在线观看完整版免费高清| 我的老师免费观看完整版| 欧美国产日韩亚洲一区| 一个人免费在线观看电影| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美zozozo另类| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 99精品在免费线老司机午夜|