獨(dú)活飲片炮制工藝研究

劉 斌，陳光宇，何 群，瞿昊宇，謝夢(mèng)洲*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410208)

獨(dú)活始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，為傘形科植物獨(dú)活重齒毛當(dāng)歸AngelicapubescensMaxim.f.的干燥根，主產(chǎn)于重慶、鄂西、四川、甘肅等地，在我國有數(shù)千年的應(yīng)用歷史，是常用藥材。其性微溫，味辛、苦，歸腎、膀胱經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕、通痹止痛等功效，系風(fēng)寒濕痹之要藥，主治腰以下風(fēng)寒濕痹及少陰伏風(fēng)頭痛?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，獨(dú)活具有鎮(zhèn)痛、抗炎、解痙、抗癌、抗氧化、催眠、免疫調(diào)節(jié)以及防治阿爾茨海默病等作用，可用于腫瘤、肝、腦、心血管、骨關(guān)節(jié)等疾病的預(yù)防和治療，為歷版《中國藥典》收載，以飲片入藥。2015版《中國藥典》一部263頁規(guī)定：“除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切薄片，曬干或低溫干燥?！备鞣N版本的中藥炮制規(guī)范中獨(dú)活的炮制工藝基本上皆為凈制、軟化、切制和干燥，無具體的工藝參數(shù)，欠規(guī)范，可操作性不強(qiáng)，批間差異大，重復(fù)性差，從而影響?yīng)毣铒嬈馁|(zhì)量。為使獨(dú)活炮制工藝科學(xué)、客觀、量化，提高可操作性，本實(shí)驗(yàn)以浸出物、蛇床子素及二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯為評(píng)價(jià)指標(biāo)，參照2015版《中國藥典》一部、各種炮制規(guī)范及相關(guān)文獻(xiàn)[1-5]，對(duì)獨(dú)活進(jìn)行炮制工藝參數(shù)優(yōu)化研究，優(yōu)選出科學(xué)、合理、穩(wěn)定、可行的獨(dú)活炮制工藝參數(shù)，為工業(yè)化生產(chǎn)提供質(zhì)量一致的獨(dú)活飲片。

1 儀器與藥材

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜系統(tǒng)(賽默飛世爾科技(中國)有限公司，包括G1316A四元梯度泵，G1313A標(biāo)準(zhǔn)型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A恒溫箱，G1314A紫外檢測(cè)器，Agilent Chemstation 色譜工作站)；中文液晶臺(tái)式超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)；ME204E型電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；TCS-100型電子臺(tái)秤(上海乾峰電子儀器有限公司)；PW135型中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；SHH.W21電子三用水箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；QY-1中藥切片機(jī)(溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司)；HWS-80B型恒溫恒濕培養(yǎng)箱(天津市意博高科實(shí)驗(yàn)儀器廠)；101-0AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

1.2 藥材及試劑

獨(dú)活購于湖北省竹溪縣，經(jīng)王智老師鑒定為傘形科植物獨(dú)活重齒毛當(dāng)歸(AngelicapubescensMaxim.f.)的干燥根；蛇床子素對(duì)照品(批號(hào)：110822-201710)購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))，供含量測(cè)定用(蛇床子素含量以99.5%計(jì)，ID：9USR-G73L)；二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品(批號(hào)：111583-201605)，購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))，供含量測(cè)定用(二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量以98.6%計(jì)，ID：479G-HTJU)；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水；液相色譜柱(月旭，Ultimate? XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm；AcclaimTM120 C18，5 μm，120 ? 4.6 mm×250 mm)。

2 方法與結(jié)果

2.1 獨(dú)活浸出物測(cè)定

將獨(dú)活飲片粉碎過二號(hào)篩，取獨(dú)活飲片粉末4.000 g，精密稱定，用乙醇作為溶劑，按照2015版《中國藥典》四部通則2201浸出物測(cè)定法202頁“醇熱浸法”測(cè)定[1]。

2.2 蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量測(cè)定[2]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用高效液相色譜法(通則0512)測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(49∶51)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為330 nm。理論塔板數(shù)按二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

2.2.2 二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品溶液制備 取二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品約0.010 0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯1.08 mg的二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯濃溶液1；精密移取1 mL二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯0.108 mg的二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯濃溶液2；再精密移取5 mL二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯濃溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯54.0 μg的二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進(jìn)樣小瓶中，即得。

2.2.3 蛇床子素對(duì)照品溶液制備 取蛇床子素對(duì)照品約0.010 0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含蛇床子素1.01 mg的濃溶液1；精密移取1.5 mL蛇床子素濃溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含蛇床子素151.5 μg的蛇床子素對(duì)照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進(jìn)樣小瓶中，即得。

2.2.4 供試品溶液制備 精密稱取本品粉末(過三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心7 min，精密移取上清液2.5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，取上清液過0.22 μm微孔濾膜至進(jìn)樣小瓶中，備用。

2.2.5 測(cè)定方法 分別精密吸取兩種對(duì)照品溶液10 μL與供試品溶液15 μL，注入液相色譜儀中測(cè)定，見圖1、圖2、圖3、圖4。

圖1 蛇床子素對(duì)照品HPLC

圖2 二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品HPLC

圖3 獨(dú)活飲片供試品HPLC

圖4 獨(dú)活陰性對(duì)照品HPLC(甲醇空白)

2.3 獨(dú)活原藥材前處理方法[3]

取獨(dú)活藥材，除去泥沙、雜草、非藥用部位和蟲蛀、霉敗、腐爛品，將其放入瀝箕內(nèi)，用自來水淋濕，旋轉(zhuǎn)瀝箕(模擬滾筒式洗藥機(jī))1 min，再用自來水沖洗1 min，如此操作數(shù)次，直至洗凈為止(無肉眼可見泥沙灰塵等，約8 min)。

2.4 單因素考察悶潤工藝[3]

稱取藥材3份，每份100 g ，用自來水淋洗使藥材表面全部濕潤，將其放入廣口玻璃瓶中，密閉，分別置于20 ℃、30 ℃、40 ℃電熱培養(yǎng)箱中，并不時(shí)搖動(dòng)瓶子，待表面無明顯水跡，用噴壺均勻噴入清水，邊噴水邊翻動(dòng)藥材，使藥材表面全部濕潤(約5%)，裝入盆中蓋緊，再置于電熱培養(yǎng)箱中，并不時(shí)搖動(dòng)瓶子，待表面無明顯水跡后再噴水、悶潤，直至潤透(內(nèi)外含水一致、全體軟化)，記錄不同溫度軟化所需時(shí)間，見表1。

表1 獨(dú)活原藥材悶潤溫度與時(shí)間考察結(jié)果

表1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淋洗5 min后，悶潤2 h，取出，均勻噴水4.3 g，再悶潤2 h，須根吸水過多，顏色很深，呈褐色，主根顏色鮮艷色白，故須根與主根需分別潤。從不同溫度悶潤結(jié)果來看，20 ℃、30 ℃飲片顏色好，40 ℃獨(dú)活大飲片顏色較深，因20 ℃需要6 h方可軟化，而30 ℃只需4 h即可軟化，故悶潤溫度定為30 ℃。

獨(dú)活的最佳悶潤工藝為：取獨(dú)活，分離主根與須根，分別淋洗5 min，主根密閉潤2 h，取出噴水4.3%，再悶潤2 h；須根淋洗后敞開潤30 min即可切片，主根密閉潤4 h時(shí)，藥材吸水率達(dá)13%～19%左右即可，二者切片，切面顏色均佳。

但考慮到工業(yè)化生產(chǎn)分離主根與須根分別進(jìn)行淋洗與悶潤費(fèi)時(shí)費(fèi)力，人工成本過高，故未采用，正交設(shè)計(jì)與驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)仍采用主根與須根同時(shí)淋洗、悶潤。

2.5 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選獨(dú)活最佳切片(炮制)工藝參數(shù)

2.5.1 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素水平的確定 影響飲片質(zhì)量的因素主要有鼓風(fēng)干燥溫度、鋪層厚度、翻動(dòng)次數(shù)，考察因素水平參照文獻(xiàn)確定[4-8]，見表2。

表2 獨(dú)活切片工藝正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素水平

2.5.2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理 以蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯的含量百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，其組合方案見表3。飲片樣品制備：取凈藥材約900 g，按大小品質(zhì)均分為9份，每份100 g，分別淋洗5 min，30 ℃悶潤2.0 h，每份噴水4.3 g，再悶潤2 h，均切3 mm厚片，濕獨(dú)活飲片按表2的因素水平與表3的組合試驗(yàn)號(hào)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)9個(gè)試驗(yàn)號(hào)所得飲片按照“2.1”“2.2”項(xiàng)下評(píng)價(jià)指標(biāo)及方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3，極差分析見表4，方差分析見表5。

表3 獨(dú)活飲片炮制正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 獨(dú)活炮制正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)極差分析結(jié)果

由表4、表5結(jié)果可知，以蛇床子素的含量百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，因素水平皆無統(tǒng)計(jì)意義，各因素可取任意水平。以二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯的含量百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，A因素有統(tǒng)計(jì)意義，其水平數(shù)按最佳確定，A因素取2水平；從降低成本考慮，B因素取3水平，C因素取1水平；綜合分析可得，A因素取2水平，B因素取3水平，C因素取1水平，最終確定最佳組合為A1B3C1，即獨(dú)活最佳切制炮制工藝為50℃鼓風(fēng)干燥，切3 mm厚片，堆放2 cm厚，翻動(dòng)1次。

表5 獨(dú)活炮制正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)方差分析(完全隨機(jī)模型)

2.5.3 獨(dú)活炮制正交設(shè)計(jì)驗(yàn)證試驗(yàn) 取除去雜質(zhì)和泥沙的獨(dú)活原藥材3份，每份1 000 g，淋洗5 min，裝入不銹鋼桶中蓋緊密閉2 h，分別置于30 ℃電熱培養(yǎng)箱中，用噴壺均勻噴入清水4.3%，邊噴水邊翻動(dòng)藥材，使藥材表面全部濕潤，悶潤2 h，再按正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)確定的最佳組合因素水平，即切3 mm厚片，堆放2 cm厚，50 ℃鼓風(fēng)干燥，翻動(dòng)1次，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，并與同批次原藥材3份樣品比較，按“2.1”“2.2”項(xiàng)下評(píng)價(jià)指標(biāo)及方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表6。

表6 獨(dú)活炮制正交設(shè)計(jì)驗(yàn)證試驗(yàn)

由表6結(jié)果可知，浸出物、蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量百分率均優(yōu)于正交設(shè)計(jì)中最佳的6號(hào)，量值傳遞率均達(dá)到115%以上，表明優(yōu)選出的工藝穩(wěn)定可靠，故確定獨(dú)活飲片最佳炮制工藝為50 ℃鼓風(fēng)干燥，切3 mm厚片，堆放20 mm厚，翻動(dòng)1次。

3 討論

獨(dú)活炮制工藝中的干燥時(shí)間以干燥至含水量達(dá)5%為標(biāo)準(zhǔn)，故無須考察干燥時(shí)間，而且正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)9個(gè)樣品的含水量皆一致，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有可比性。

本實(shí)驗(yàn)悶潤采用恒溫恒濕培養(yǎng)箱，不僅可控制溫度，還可控制濕度，設(shè)定RH=80%，使實(shí)驗(yàn)過程中悶潤的濕度參數(shù)一致，結(jié)果具有可比性。

理論上來講，鼓風(fēng)干燥溫度越低，蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯被破壞的量越少，則含量越高，但鼓風(fēng)干燥溫度越低，干燥時(shí)間越長，蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯被破壞的量則越多，故干燥溫度和時(shí)間兩者有一使蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯被破壞最少的最佳平衡值，故正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選出了最佳的鼓風(fēng)干燥溫度為50 ℃，而不是40 ℃。

獨(dú)活切片厚度確定為切3 mm厚片，系因切太厚不宜干燥，太薄則干燥后易碎，開始手工切制薄厚不均，后改用切藥機(jī)切制，發(fā)現(xiàn)切成3 mm厚片最佳，故未列入正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)表中考察。

4 結(jié)語

隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，中藥炮制逐步走向現(xiàn)代化、智能化，如干洗法清洗藥材，采用切藥機(jī)切片，無需悶潤軟化，更不需要加熱干燥。本實(shí)驗(yàn)開始采用手工切片，因切的厚度不一，改用切藥機(jī)切片，發(fā)現(xiàn)可以不經(jīng)悶潤過程，藥材淋洗后，瀝干水可直接用切藥機(jī)切片，若采用干洗技術(shù)，無需加熱，則可徹底顛覆傳統(tǒng)的炮制方法。