全自動氨基酸分析儀測定藥物中16種氨基酸

張 鑫，劉文竹，張 艷，李瀅倩，郜金金

（1.吉林省食品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130103；2.吉林省正恒檢測有限公司，吉林 長春 130033）

氨基酸在醫(yī)藥上主要用來制備復(fù)方氨基酸輸液，也用作治療藥物和用于合成多肽藥物。此外氨基酸衍生物在癌癥治療上出現(xiàn)了希望。[1]目前氨基酸的分析方法[2]主要有化學(xué)方法、熒光光譜法、電化學(xué)方法和分光光度法等.全自動氨基酸分析儀[3-7]與其他方法相比，具有靈敏度高、檢出限低、操作簡單、數(shù)據(jù)容易分析等優(yōu)勢。本研究運(yùn)用全自動氨基酸分析儀測定藥品中16種氨基酸的方法，節(jié)省前處理時間，降低檢測成本。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

L-8900高速氨基酸分析儀（日本日立公司）；BGZ-246電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；AB204-N電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜

混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品（1 mL，2.5mmol/mL，SIGMA）；蛋白水解液用緩沖液PH套裝MCI BufferL-8500-PH Kit（WAKO）；茚三酮顯色液 NINHYDRIN COLORING SOLUTION KIT FOR HITACHI（WAKO）；鹽酸（優(yōu)級純）；實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q超純水。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制：16種混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；50%鹽酸溶液配制：將優(yōu)級純鹽酸與水等體積混合。

1.2.2 樣品的前處理：稱取適量樣品（氨基酸含量約在10 mg～20 mg）置聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，加入50%鹽酸溶液15 mL，混勻后，在140℃干燥箱中水解4 h，轉(zhuǎn)移全部水解液置50 mL容量瓶中，加入超純水定容至刻度線，混勻后，從中取出10 mL溶液置50 mL容量瓶中，加入超純水定容至刻度線，混勻，過濾，上機(jī)。

1.2.3 氨基酸分析儀儀器運(yùn)行條件：熒光檢測器；檢測波長440、570 nm；離子交換色譜柱；柱溫57℃；檸檬酸緩沖液；進(jìn)樣體積20 μL；流速0.4 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分析

樣品水解后，運(yùn)用氨基酸全自動分析儀測定，脯氨酸在波長440 nm測定，其余15種氨基酸在570 nm波長下測定，16種氨基酸在該分離條件下達(dá)到很好的分離效果，16種氨基酸標(biāo)樣色譜見圖1和圖2，橫坐標(biāo)為保留時間（min），縱坐標(biāo)為振幅（mv）

2.2 樣品在干燥箱中水解的時間優(yōu)化

稱取適量樣品（氨基酸含量約在10 mg～20 mg）置聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，加入50%鹽酸溶液15 mL，混勻后，干燥箱溫度保持在140℃，水解時間分別為60 min、120 min、180 min、240 min、300 min，按照1.2.2樣品的前處理方法進(jìn)行，隨著水解時間的增加，16種氨基酸的回收率逐漸增大，但在干燥箱中水解時間在240 min以上，回收率達(dá)到100%左右，繼續(xù)增加水解時間，回收率變化不大，因此確定樣品在干燥箱中最佳水解時間為240 min。

2.3 樣品在干燥箱中溫度的時間優(yōu)化

稱取適量樣品（氨基酸含量約在10 mg～20 mg）置聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，加入50%鹽酸溶液15 mL，混勻后，干燥箱中水解240 min，干燥箱溫度分別為50℃、80℃、110℃、140℃、170℃，按照1.2.2樣品的前處理方法進(jìn)行，隨著干燥箱中溫度逐漸增加，16種氨基酸的回收率也在逐漸增大，在干燥溫度為140℃時，回收率達(dá)到100%左右，繼續(xù)增加干燥溫度，回收率變化不大，因此確定樣品在干燥箱中最佳干燥溫度為140℃。

2.4 精密度

按照2.2和2.3中確定的樣品前處理最佳水解時間240min和干燥溫度140℃，重新處理6份樣品，考察儀器的精密度，同樣是以回收率的RSD值為判定依據(jù)，結(jié)果顯示出16種氨基酸精密度很好均小于2.0%。

2.5 線性關(guān)系和檢出限

為考察該方法的線性關(guān)系，準(zhǔn)確配制了16種氨基酸濃度分別為的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.2前處理?xiàng)l件進(jìn)行分析，以f(x)值為峰面積，x值為檢測濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。該測定方法具有較寬的線性范圍，16種氨基酸的線性范圍為，線性回歸系數(shù)均達(dá)到0.999以上；16種氨基酸的方法檢出限范圍在0.17～0.51 μmol/L。說明用該方法檢測中的16種氨基酸是可行的。

3 結(jié) 論

通過對樣品前處理的簡化，建立了運(yùn)用氨基酸分析儀檢測藥品中氨基酸含量的方法。該方法不同于以往的前處理方法繁瑣、復(fù)雜、耗時長，整個方法的前處理時間簡短，操作簡單，同時能得到較低的方法檢出限和高效、穩(wěn)定的回收率要求，該方法適用于各種樣品中氨基酸含量的檢測。