黨參-茯苓-甘草水提物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的抗氧化及免疫調(diào)節(jié)功效評價

徐飛飛，王梓林，王潔，李欽青，田雅娟，楚世峰，賀文彬

（1.山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥與食品工程學(xué)院，中醫(yī)腦病學(xué)山西省重點實驗室，山西太原 030024）

（2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京 100050）

學(xué)習(xí)記憶障礙（Learning and memory impairment）作為機(jī)體正常衰老與癡呆之間的過渡階段，臨床表現(xiàn)為信息獲取和重現(xiàn)能力的缺失，是評價阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的主要神經(jīng)癥狀標(biāo)準(zhǔn)[1]。腹腔注射氫溴酸東莨菪堿是常用的建立學(xué)習(xí)與記憶能力損傷動物模型的方法，它能夠拮抗乙酰膽堿受體影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膽堿能功能，還能使海馬中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的酶活性降低，丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量升高[2-4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，腦氧化損傷是學(xué)習(xí)記憶障礙等神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的病理特征，過量的氧自由基蓄積會導(dǎo)致神經(jīng)元損傷或死亡，影響大腦的學(xué)習(xí)與記憶功能，因此減少氧自由基的形成及保護(hù)神經(jīng)元免受自由基影響，是改善學(xué)習(xí)記憶障礙的一種有效的途徑[5-7]。中草藥在中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)下，具有悠久的用藥歷史，尤其是“藥食同源”中藥，作為天然抗氧化劑安全營養(yǎng)，對預(yù)防、治療疾病有顯著療效[8,9]。

黨參為多年生草本植物桔?？泣h參（Codonopsis pilosula(Franch.) Nannf.）的干燥根，具有健脾補(bǔ)肺，益氣養(yǎng)血等功效，其活性成分黨參多糖，能夠清除自由基改善東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶學(xué)習(xí)障礙[10]；通過增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答水平，參與細(xì)胞免疫和體液免疫過程[11]；此外，研究發(fā)現(xiàn)黨參多糖能夠提高機(jī)體耐缺氧能力[12,13]?！侗静輳男隆吩唬骸皡㈨毶宵h者佳”，本實驗選用“藥食同源”山西道地藥材潞黨參。茯苓作為“四君八珍”中藥之一，《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品，有利水滲濕、健脾安神等功效，其活性成分茯苓多糖對失眠健忘、免疫力低下等癥狀均有改善作用[14-16]。蜜炙甘草藥性溫和，補(bǔ)脾和胃，益氣復(fù)脈，能夠改善脾氣虛弱，倦怠乏力，心悸氣短等癥狀[17,18]。研究發(fā)現(xiàn)甘草水提取物對阿爾茨海默病有一定的改善作用，其活性成分甘草酸可通過抗炎、抗氧化等藥理作用發(fā)揮腦保護(hù)功效[19,20]。

本研究將黨參、茯苓、甘草三味藥食兩用中藥材配伍，通過氫溴酸東莨菪堿誘導(dǎo)的的學(xué)習(xí)記憶障礙模型，評價不同劑量黨參-茯苓-甘草水提物的改善作用。分別檢測小鼠海馬中SOD、GSH-Px酶活力，及MDA含量；血清中白細(xì)胞介素-2（interleukin 2，IL-2）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平；脾臟中自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK）活力，探討水提物改善學(xué)習(xí)記憶障礙的作用機(jī)制。此外，還將黨參-茯苓-甘草水提物作用于正常小鼠，評價其抗疲勞功效。

1 材料與方法

1.1 受試動物

SPF級雄性健康昆明（KM）小鼠，體重25±3 g，100只，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2016-0006。小鼠于實驗前7 d置于實驗室適應(yīng)環(huán)境，室溫 23±2 ℃，相對濕度50%～60%，12/12 h明暗交替，自由飲食、攝水。本文所做實驗均獲得倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 試劑與儀器

潞黨參，購自山西省振晉堂中藥材發(fā)展有限公司，批號：20190603；茯苓、甘草，購自山西元和堂中藥有限公司，批號：1907005、190502；鹽酸多奈哌齊，購自衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司，批號：1902038；氫溴酸東莨菪堿，購自湖北佳諾信生物化工有限公司；SOD、GSH-Px、MDA試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；IL-2、TNF-α、NK試劑盒，均購自研吉生物（WKSUBIO）有限公司，批號：20191102、20191201、20191206。

Heraeus Multifuge X1R高速冷凍離心機(jī)，賽默飛世爾科技公司；R540增強(qiáng)型動物麻醉機(jī)，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；VERSA max-BNRO5709酶標(biāo)儀，上海美谷分子儀器有限公司；XR-XZ301小鼠曠場及分析系統(tǒng)，上海欣軟信息科技有限公司；THZ-92B氣浴恒溫箱，上海博訊實業(yè)有限公司；EX125DZH電子分析天平，奧豪斯儀器（上海）有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 黨參-茯苓-甘草水提物制備

取潞黨參粗粉、茯苓粗粉各100 g，甘草20 g（質(zhì)量比5:5:1），按照《中國藥典》2015年版蜜炙法通則0213方法對甘草進(jìn)行炮制，制得蜜炙甘草。上述三味中藥加10倍量的水浸泡1 h，煎煮1.5 h。過濾，藥渣加8倍量水煎煮1 h。過濾，合并兩次濾液，常壓濃縮至1 mL藥液相當(dāng)于原藥材1 g。取10、20、40 mL水煎液加三蒸水，得劑量為10、20、40 g/kg的藥液，即黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量，置于4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 實驗動物分組

100只KM小鼠中選取60只，隨機(jī)分為6組：正常組，模型組，黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量組（10、20、40 g/kg），陽性藥組，每組10只。正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水，黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量灌胃10、20、40 g/kg劑量水提物，陽性藥組灌胃鹽酸多奈哌齊（1.5 mg/kg），灌胃劑量為 10 mL/kg·d，不間斷給藥30 d，進(jìn)行黨參-茯苓-甘草水提物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的影響實驗。另40只KM小鼠，隨機(jī)分為4組：空白組，黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量組，每組10只，進(jìn)行黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠的影響實驗。

1.3.3 黨參-茯苓-甘草水提物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的影響

1.3.3.1 對自主活動的影響

小鼠于第30 d灌胃結(jié)束30 min后，進(jìn)行曠場實驗。用SuperMaze動物行為學(xué)視頻分析軟件將敞箱平均分為九格，小鼠每穿過一格記為一分，即水平得分；記錄在敞箱內(nèi)站立以及理毛次數(shù)總和，一次記一分，即垂直得分。各組小鼠依次置于敞箱內(nèi)，適應(yīng) 2 min后記錄小鼠在 5 min內(nèi)的水平得分與垂直得分。用75%乙醇對敞箱進(jìn)行擦拭，除去上一只小鼠的氣味后，將下一只小鼠放入。

1.3.3.2 對新物體識別的影響

新物體識別實驗分為適應(yīng)、熟悉和測試3個階段。實驗第30 d自主活動測試內(nèi)容即為適應(yīng)階段；第31 d，將兩個完全相同的木方塊（舊物體）放入實驗箱內(nèi)對稱的位置處，兩物體距離側(cè)箱壁、箱后壁的距離均相等，將小鼠從曠場箱中距物體等距離處放入，讓小鼠在試驗箱內(nèi)自由探究10 min，即為熟悉階段；第32 d，將其中一個木方塊換為另一個大小相近顏色為紅色的木三角塊（新物體），采用 SuperMaze分析軟件，分別記錄小鼠5 min對木三角塊和木方塊的探究時間，計算新物體識別指數(shù)，即測試階段。

本階段每只小鼠在放入敞箱20 min前，正常組小鼠腹腔注射生理鹽水，模型組、黨參-茯苓-甘草組、陽性藥組小鼠腹腔注射氫溴酸東莨菪堿（2 mg/kg）造成記憶障礙。實驗時需清理小鼠在實驗箱內(nèi)的排泄物，并用75%乙醇擦拭實驗箱及識別物體，消除對下一只小鼠實驗的影響。

1.3.3.3 對小鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的影響

行為學(xué)試驗結(jié)束后，異氟烷麻醉小鼠，記錄體重。眼眶取血后脫頸椎處死，迅速于冰上斷頭取腦，用生理鹽水沖掉血液，取海馬、脾臟、胸腺，濾紙擦干后稱重，置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。ELISA試劑盒檢測小鼠海馬中SOD、GXH-Px、MDA的含量。

1.3.3.4 對小鼠血液細(xì)胞因子及脾臟自然殺傷細(xì)胞活性的影響

小鼠血液離心（3000 r/min，15 min），取上清液分裝備用。ELISA試劑盒分別測定小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量，以及小鼠脾臟中NK細(xì)胞活性。

1.3.4 黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠的影響

1.3.4.1 抗疲勞負(fù)重游泳實驗

小鼠于第30 d灌胃結(jié)束30 min后，每只動物尾部負(fù)重鉛片（體重×0.5 g），置于水箱中（50×50×40 cm），水深約為30 cm，水溫25±2 ℃，記錄每只動物放進(jìn)水箱至放棄游泳并下沉的時間。

1.3.4.2 對抗氧化系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)的影響

操作同1.3.3.3，計算小鼠海馬中SOD、GXH-Px、MDA的含量。采用稱重法，計算得出胸腺、脾臟指數(shù)，并測定脾臟NK細(xì)胞活性。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實驗結(jié)果均為計量資料，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，采用GraphPad Prism 6.02統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），p＜0.05視為具有顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 黨參-茯苓-甘草水提物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的影響

2.1.1 對自主活動的影響

本研究將以新物體識別行為學(xué)實驗對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行評價，需確保各組小鼠的自主活動無顯著差別，采用Li等人[21]的方法，對小鼠自主活動指標(biāo)水平得分與垂直得分進(jìn)行統(tǒng)計分析。如表1所示，各組小鼠水平得分與垂直得分無顯著差異（p＞0.05），表明不同劑量黨參-茯苓-甘草水提物對小鼠的自主活動不產(chǎn)生顯著影響，可進(jìn)行新物體識別行為學(xué)測試。

表1 黨參-茯苓-甘草水提物對小鼠自主活動的影響Table 1 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos- Radix glycyrrhizae water extract on mouse atonomous activities

2.1.2 對新物體識別指數(shù)的影響

新物體識別法是用于評價學(xué)習(xí)記憶能力使用最廣泛的行為學(xué)測試方法[22-25]。Lueptow等[22]研究發(fā)現(xiàn)，相比于Morris水迷宮、被動回避等其他行為學(xué)測試，新物體識別測試能夠利用嚙齒類動物對新異物探索的天性，使其在接近自然條件下做出反應(yīng)，該測試方法不會對實驗對象造成積極或消極刺激，能夠避免因應(yīng)激引起行為變化。

如圖1所示，在新物體識別實驗中，正常小鼠在對木方塊（舊物體）有記憶的情況下，對木三角塊（新物體）探索時間增加，所以正常組新物體識別指數(shù)大于50%；氫溴酸東莨菪堿建立的記憶障礙模型小鼠，由于對木方塊的記憶模糊，視木方塊與木三角塊均為新物體，并且對二者的探索時間相當(dāng)，所以其新物體識別指數(shù)下降至 50%左右，與正常組相比顯著降低（51.12±5.80v.s73.65±7.39，**p＜0.01），說明小鼠對熟悉的舊物體的記憶模糊，學(xué)習(xí)記憶障礙模型建立成功，趨勢與Li等研究相同[21]。水提物處理后，黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量組均能夠顯著增加模型鼠的新物體識別指數(shù)（62.97±4.45v.s51.12±5.80；64.32±5.21v.s51.12±5.80；69.41±7.12v.s51.12±5.80），均表現(xiàn)出極顯著差異（##p＜0.01），以高劑量組（40 g/kg）效果最明顯，說明不同劑量黨參-茯苓-甘草水提物能夠小鼠對記憶障礙起到一定的改善作用。

圖1 黨參-茯苓-甘草水提物對認(rèn)知障礙小鼠新物體識別指數(shù)的影響Fig.1 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on novel objects recognition index of learning and memory impairment mice

表2 黨參-茯苓-甘草水提物對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠海馬抗氧化系統(tǒng)的影響Table 2 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on hippocampal antioxidant system of learning and memory impairment mice

2.1.3 對海馬內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的影響

有研究表明，腦組織對氧化損傷較敏感，SOD、GSH-Px及MDA是評價氧化應(yīng)激的重要指標(biāo)[26]。由表2可知，與正常組相比，模型組小鼠海馬中SOD、GSH-Px酶活力分別降低了41%、46%，MDA水平升高了 88.6%，差異極顯著（**p＜0.01），說明學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠腦中的氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)失衡。而經(jīng)過不同劑量黨參-茯苓-甘草水提物處理后，小鼠海馬中SOD、GSH-Px酶活力均顯著升高，高于模型組（##p＜0.01），MDA 顯著降低（#p＜0.05，##p＜0.01），作用效果呈量-效關(guān)系，其中高劑量組表現(xiàn)出與陽性藥相接近的效果（##p＜0.01）。表明黨參-茯苓-甘草水提物可有效提高學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠腦海馬組織中SOD、GSH-Px活性，降低過氧化產(chǎn)物MDA以延緩氫溴酸東莨菪堿所致的腦組織氧化應(yīng)激，其中高劑量抗氧化效果最佳。學(xué)習(xí)與記憶作為腦的高級功能，是兩種相聯(lián)系且復(fù)雜的神經(jīng)過程，學(xué)習(xí)記憶功能障礙是多因素誘導(dǎo)的結(jié)果[27,28]。Lawrence[29]提出在學(xué)習(xí)記憶障礙階段進(jìn)行適當(dāng)干預(yù)，是防止疾病進(jìn)一步演化成癡呆的新方法。近年來，中藥在治療疾病的應(yīng)用中，表現(xiàn)出有效的抗氧化活性及其他廣泛的藥理作用[30,31]。李啟艷等[32]通過黨參多糖干預(yù)D-半乳糖所致衰老小鼠，發(fā)現(xiàn)能夠顯著提高小鼠血清與肝臟中SOD、GSH-Px酶活性，降低MDA含量；并且研究發(fā)現(xiàn)，潞黨參中多糖、炔苷含量優(yōu)于其他產(chǎn)地黨參，具有良好的抗氧化活性[33]。在盧華杰等[34]的抗氧化試驗研究中，發(fā)現(xiàn)茯苓中水溶性多糖與酸性多糖均能夠?qū)αu基自由基產(chǎn)生清除作用，且水溶性多糖清除率高于酸性多糖。早在上世紀(jì)，Kenzo等[35]發(fā)現(xiàn)甘草素清除活性氧能力是維生素E的3倍，甘草提取物在現(xiàn)代食品研究中常作為甜味劑、抗氧化劑等多種食品添加劑被廣泛應(yīng)用[36]，本實驗得到的黨參-茯苓-甘草水提物具有抗氧化活性結(jié)論與上述研究結(jié)論相符。

2.1.4 對血清細(xì)胞因子的影響

表3 黨參-茯苓-甘草水提物對認(rèn)知障礙小鼠血清細(xì)胞因子的影響Table 3 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on serum cytokines of learning and memory impairment mice

病理條件下，氧化應(yīng)激能夠引起炎性反應(yīng)，炎性反應(yīng)也能夠誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，二者形成惡循環(huán)，加重神經(jīng)病變[37]。本實驗通過檢測小鼠血清中IL-2、TNF-α評價黨參-茯苓-甘草水提物的免疫調(diào)節(jié)作用。由表 3可知，若以正常組血清中炎性因子 IL-2、TNF-α為100%，學(xué)習(xí)記憶障礙模型組小鼠血清中IL-2、TNF-α水平則明顯升高到 370.79%、265.36%，差異極顯著（**p＜0.01）。經(jīng)過黨參-茯苓-甘草水提物處理后，中、高劑量組小鼠血清中IL-2下降到291.29%、242.60%（##p＜0.01），TNF-α水平均顯著降低到 214.57%、175.05%（##p＜0.01）。Petitto 等[38]發(fā)現(xiàn)大腦中 IL-2 缺乏與免疫系統(tǒng)之間的復(fù)雜相互作用可能會改變大腦學(xué)習(xí)和記憶過程，認(rèn)為 IL-2缺乏會導(dǎo)致神經(jīng)生物學(xué)異常。不過，Eleanor等[39]證實輕度認(rèn)知功能障礙患者外周炎性反應(yīng)增加，炎性因子IL-2與TNF-α水平升高，認(rèn)為炎癥是造成AD早期病癥的主要原因之一，與本研究結(jié)果相一致。在病理條件下，炎性趨化因子在協(xié)調(diào)天然和獲得性免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，其引起的炎性反應(yīng)對機(jī)體穩(wěn)態(tài)起著保護(hù)性效應(yīng)，同時過度的炎性反應(yīng)又能夠損傷機(jī)體，導(dǎo)致機(jī)體穩(wěn)態(tài)失調(diào)[40]。此外，相關(guān)研究表明，潞黨參能夠抑制 TNF-αRⅠ、IL-15R基因的表達(dá)來降低炎性因子IL-6、TNF-α、IL-15水平[41,42]；茯苓多糖作用于免疫缺陷鼠后也能夠調(diào)節(jié)IL-2、TNF發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)活性[43]；蜜炙甘草可促進(jìn)小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖，相比甘草生品更能增加小鼠的免疫功能[44]，結(jié)合本實驗結(jié)果，可以說明黨參-茯苓-甘草水提物（20 g/kg、40 g/kg）對學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠具有有效的免疫調(diào)節(jié)作用。

2.1.5 對脾臟自然殺傷細(xì)胞活性的影響

圖2 黨參-茯苓-甘草水提物對認(rèn)知障礙小鼠脾臟NK細(xì)胞活性的影響Fig.2 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on activity of spleen NK cells of learning and memory impairment mice

黨參-茯苓-甘草水提物對小鼠脾臟 NK細(xì)胞活性的影響見圖 2。學(xué)習(xí)記憶障礙模型組小鼠脾臟中 NK細(xì)胞活性較正常組顯著降低（4022.51±556.35v.s5874.81±233.19，**p＜0.01），黨參-茯苓-甘草各劑量組能夠提高模型小鼠脾臟中 NK 細(xì)胞活性（ 4281.31±593.52v.s4022.51±556.35 ； 4989.67±1278.82v.s4022.51±556.35；6511.32±869.33v.s4022.51±556.35），隨著劑量的增加，NK細(xì)胞活性也顯著增強(qiáng)，且高劑量組差異極顯著（##p＜0.01）。細(xì)胞因子IL-2、TNF-α對NK細(xì)胞的活化和分化有調(diào)節(jié)作用，NK細(xì)胞主要分布于脾臟與外周血，是抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[45,46]。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為黨參、茯苓、炙甘草均具有健脾功效，所以本實驗對小鼠脾臟中自然殺傷（NK）細(xì)胞活性進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)高劑量黨參-茯苓-甘草水提物（40 g/kg）可有效增強(qiáng)記憶障礙小鼠機(jī)體免疫力。一般而言，IL-2、TNF-α能夠刺激NK細(xì)胞增殖[47]，實驗結(jié)果“2.1.4”中發(fā)現(xiàn)水提物對炎性因子IL-2、TNF-α起到抑制作用，則水提物作用后NK細(xì)胞活性應(yīng)呈現(xiàn)降低趨勢，但檢測結(jié)果卻相反，初步認(rèn)為可能與檢測樣本的來源不同相關(guān)。不過已有相關(guān)報道與本實驗結(jié)果趨勢一致，認(rèn)為黨參（提取物）、茯苓（茯苓多糖）、甘草（甘草酸、甘草甜素）均能夠促進(jìn)NK細(xì)胞增殖[48-50]。

2.2 黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠的影響

2.2.1 對小鼠負(fù)重游泳的影響

運(yùn)動耐力的下降能直觀的反映機(jī)體處于疲勞狀態(tài)，負(fù)重游泳是衡量藥物及保健食品抗疲勞特性最常選擇的評價指標(biāo)[51,52]。本實驗通過記錄游泳時間的長短以反映小鼠耐力[12,53,54]，黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠負(fù)重游泳時間的影響見圖3。結(jié)果顯示，黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量組均能夠延長正常小鼠游泳時間（97.38±26.14v.s67.88±14.16；118.00±27.11v.s67.88±14.16；128.00±29.66v.s67.88±14.16），且中劑量與高劑量組延長率高達(dá)73.84%及88.57%，差異極顯著（**p＜0.01）。張?zhí)旒t等[53]發(fā)現(xiàn)潞黨參提取液能顯著延長小鼠運(yùn)動耐力，并且彭梅等認(rèn)為黨參粗提多糖是通過抑制尿素氮的產(chǎn)生和控制乳酸的含量，從而達(dá)到抗疲勞的作用[12]；同樣，符輝[54]、楚麗雅[55]等通過運(yùn)動耐力及生化指標(biāo)的測定，發(fā)現(xiàn)茯苓多糖與甘草水提物也均能夠降低尿囊素及乳酸含量，延長小鼠負(fù)重游泳時間，本實驗結(jié)果與他們的結(jié)論一致，說明黨參-茯苓-甘草水提物具有一定的抗疲勞作用。

圖3 黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠負(fù)重游泳的影響Fig.3 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on weight-bearing swimming of normal mice

2.2.2 對小鼠抗氧化系統(tǒng)的影響

同樣，我們對黨參-茯苓-甘草水提物的抗氧化活性進(jìn)行了重復(fù)驗證，判斷其是否能夠顯著調(diào)節(jié)正常小鼠腦組織的抗氧化系統(tǒng)。如表4所示，與空白組相比，黨參-茯苓-甘草高劑量組小鼠海馬中SOD酶活力顯著升高（**p＜0.01）；黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量組GSH-Px酶活力顯著升高（**p＜0.01），MDA水平顯著降低（*p＜0.05，**p＜0.01），高劑量組依然能顯著升高SOD、GSH-Px酶活力，增加約正常組指標(biāo)的一半（48.20%、57.07%），進(jìn)一步證明黨參-茯苓-甘草水提物對小鼠腦海馬的抗氧化活性。

表4 黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠海馬抗氧化系統(tǒng)的影響Table 4 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on hippocampal antioxidant system of normal mice

表5 黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠免疫系統(tǒng)的影響Table 5 Effect of Radix codonopsis-Poria cocos-Radix glycyrrhizae water extract on immune system of normal mice

2.2.3 對小鼠免疫系統(tǒng)的影響

本研究采用任穎朗等[56]的方法，通過對胸腺與脾臟指數(shù)的分析，以及自然殺傷細(xì)胞活性的檢測，簡單判斷黨參-茯苓-甘草水提物對細(xì)胞免疫與體液免疫的影響。由表 5可知，黨參-茯苓-甘草水提物高劑量組能夠顯著增加正常小鼠胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)（*p＜0.05）；而且黨參-茯苓-甘草低、中、高劑量組能夠使小鼠脾臟中NK細(xì)胞活性增加32.97%（*p＜0.05）、30.31%（*p＜0.05）與 43.29%（**p＜0.01）。胸腺與脾臟都是機(jī)體重要的免疫器官，胸腺能夠產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞和分泌胸腺素，參與細(xì)胞免疫；脾臟中有豐富的B淋巴細(xì)胞，與體液免疫密切相關(guān)，所以臟器指數(shù)在一定程度上能夠反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱[57]。本實驗結(jié)果說明黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠免疫系統(tǒng)能夠起到一定的調(diào)節(jié)作用。

3 結(jié)論

3.1 黨參-茯苓-甘草水提物對學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用實驗中，低、中、高劑量黨參-茯苓-甘草水提物分別使記憶障礙小鼠的新物體識別指數(shù)提高 11.85%、13.2%與18.35%；各劑量水提物能夠顯著提高海馬組織清除自由基酶SOD、GSH-Px活性，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA水平。此外，血清中炎性因子IL-2、TNF-α也顯著降低；高劑量黨參-茯苓-甘草水提物還能夠使學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠脾臟中 NK細(xì)胞的活性提高2488.81 U/g。黨參-茯苓-甘草水提物能夠發(fā)揮抗氧化活性，提高記憶障礙小鼠機(jī)體的免疫力。

3.2 黨參-茯苓-甘草水提物對正常小鼠抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)作用實驗中，中劑量與高劑量黨參-茯苓-甘草水提物均能夠顯著延長小鼠的負(fù)重游泳時間，比正常鼠分別增加50.12 s、60.12 s；水提物還能夠顯著提高正常鼠胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)，及酶SOD、GSH-Px、NK細(xì)胞活性；顯著降低過氧化產(chǎn)物MDA水平。該結(jié)果重復(fù)驗證了的黨參-茯苓-甘草水提物抗氧化活性與免疫調(diào)節(jié)作用，而且發(fā)現(xiàn)水提物能夠?qū)φＪ笃鸬娇蛊诘男Ч?/p>

3.3 黨參-茯苓-甘草水提物能夠?qū)W(xué)習(xí)記憶障礙小鼠起到改善作用，作用機(jī)制與抗氧化、免疫調(diào)節(jié)活性相關(guān)，并且黨參-茯苓-甘草水提物還具有抗疲勞的作用。這為今后參苓草口服液功能保健食品提供了實驗基礎(chǔ)，更為“藥食同源”中藥對疾病的預(yù)防、治療與保健功能提供研究依據(jù)，使其在保健食品行業(yè)中具有可觀的研究與開發(fā)前景。