亞硒酸鈉和硒代蛋氨酸對(duì)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞的毒性作用

覃焱，許海釗，徐境懋，顧明華，韋燕燕

（廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣西農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530004）

硒（Se，selenium）是一種人體必需的微量元素，是生物體內(nèi)多種重要酶重要組成部分，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫力等作用[1]，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界有40多個(gè)國(guó)家和地區(qū)缺硒，中國(guó)是世界上缺硒最嚴(yán)重的地區(qū)，三分之二的地區(qū)屬于缺硒地區(qū)，約站國(guó)土面積70%，其中30%為嚴(yán)重缺硒地區(qū)（硒含量小于或等于0.02 mg/kg），全國(guó)有72%的人口存在不同程度的硒攝入不足[2,3]，缺硒會(huì)導(dǎo)致大骨節(jié)病、克山病的發(fā)生，在大骨節(jié)病區(qū)人群補(bǔ)充硒可穩(wěn)定控制病情[4]。由于人體內(nèi)不能合成硒，只能靠外界攝入來(lái)補(bǔ)充。硒的形態(tài)可分為無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒，其中亞硒酸鈉是常見(jiàn)的無(wú)機(jī)硒營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，而硒代蛋氨酸是植物中硒的主要形式，也是重要的有機(jī)硒營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。但是，硒對(duì)動(dòng)物既有營(yíng)養(yǎng)性又存在毒性，且其營(yíng)養(yǎng)劑量和毒性劑量范圍較窄，攝入過(guò)量的硒會(huì)引起中毒，如急性毒性，慢性毒性，免疫毒性以及細(xì)胞毒性等[5]，胡濱[6]等利用小鼠模型進(jìn)行亞硒酸鈉的急性和蓄積毒性試驗(yàn)研究，結(jié)果表明小鼠在5.61 mg/kg、7.90 mg/kg亞硒酸鈉溶液灌胃4 min后開(kāi)始出現(xiàn)活動(dòng)減少、嗜睡、乏力，反應(yīng)遲鈍等狀況。隨后精神極度沉郁，站立不穩(wěn)，呼吸困難，全身抽搐后死亡。而近期的研究則表明，硒毒性依賴于其化學(xué)形式，無(wú)機(jī)硒化合物毒性強(qiáng)于有機(jī)硒化合物[7,8]。因此，進(jìn)一步闡明無(wú)機(jī)硒與有機(jī)硒的生物學(xué)效應(yīng)和毒性差異，為缺硒人群選擇合適硒源、合理補(bǔ)充硒提供科學(xué)依據(jù)。

腸道是人體中重要的消化器官，單層腸上皮細(xì)胞在機(jī)體和外部環(huán)境之間形成了一道物理和功能性的屏障，調(diào)節(jié)維持人體生命活動(dòng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)，并能夠抵御有害物質(zhì)侵襲發(fā)揮重要作用。Caco-2細(xì)胞來(lái)自人結(jié)腸癌細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)和生化作用類似于人體小腸上皮細(xì)胞，目前是用于研究腸上皮細(xì)胞的常見(jiàn)體外模型[9]。目前，不同硒形態(tài)對(duì)對(duì)腸道上皮細(xì)胞Caco-2細(xì)胞的生物效應(yīng)機(jī)制研究不多。本研究采用體外培養(yǎng)的 Caco-2細(xì)胞，探討兩種不同形態(tài)硒化合物（亞硒酸鈉和硒代蛋氨酸）對(duì)腸細(xì)胞的毒性和氧化應(yīng)激作用，為進(jìn)一步闡明硒的細(xì)胞毒性作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

MCO-18AIC二氧化碳培養(yǎng)箱，日本三洋電機(jī)株式會(huì)社；SW-CJ-1F型超凈工作臺(tái)，中國(guó)蘇凈安泰公司；80-2電動(dòng)離心機(jī)、XDS-1B型倒置顯微鏡均購(gòu)自重慶光電儀器有限公司；M200型酶標(biāo)儀，瑞士Tecan公司；亞硒酸鈉（Na2SeO3，SeIV，分析純）、硒代蛋氨酸（C5H11NO2Se，SeMet，純度99.5%）、MTT試劑、Annexin V-FITC/PI雙染色法試劑盒、SOD酶檢測(cè)試劑盒、LDH酶檢測(cè)試劑盒、GSH檢測(cè)試劑盒、BCA蛋白試劑盒、DMEM高糖完全培養(yǎng)基、25% EDTA胰酶，PBS購(gòu)買(mǎi)于索來(lái)寶公司；胎牛血清購(gòu)買(mǎi)于四季青；人結(jié)腸腺癌Caco-2細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院干細(xì)胞庫(kù)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞傳代于25 cm2的培養(yǎng)瓶中，用10%的胎牛血清，1%的雙抗高糖完全培養(yǎng)基，并置于37 ℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%左右，用PBS清洗細(xì)胞，25% EDTA胰酶消化細(xì)胞，以每孔106個(gè)接種于6孔板，每孔105個(gè)接種于12孔板，6孔板培養(yǎng)48 h后更換含硒培養(yǎng)基，每孔1 mL，培養(yǎng)24 h后用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡。12孔板每隔2 d換一次新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)7 d后，更換含硒化物的培養(yǎng)基，每孔1 mL，用于檢測(cè)酶。

1.2.2 硒溶液配制

準(zhǔn)確稱量適量的SeIV，SeMet溶于PBS中，過(guò)濾除菌后，用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基稀釋成適當(dāng)?shù)奈鴦舛?。其中SeIV 為0.4、0.8、2.0、4.0、8.0 μg Se/mL，SeMet為 0.8、40、80、160、320 μg Se/mL。

1.2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)

待細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以每孔 105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板，培養(yǎng)7 d后加入含0.8 μg Se/mL的SeIV和SeMet的培養(yǎng)基培養(yǎng)，并設(shè)置不含硒的空白組進(jìn)行對(duì)照。細(xì)胞經(jīng)處理24 h后，棄去培養(yǎng)基，用不含EDTA的 25%胰酶消化細(xì)胞并收集，用預(yù)冷的 PBS清洗三次，800 r/min離心5 min。再將收集好的細(xì)胞重懸于結(jié)合緩沖液中，調(diào)整細(xì)胞密度為5×108細(xì)胞/L。加入5μL AnnexinV-FITC和5 μL PI，混勻，室溫避光孵育10 min染色。設(shè)置以下對(duì)照組：?jiǎn)为?dú)加細(xì)胞不染色、細(xì)胞單獨(dú)染Anexin V-FITC和細(xì)胞單獨(dú)染PI。200目篩網(wǎng)過(guò)濾后，用ACCURI C6型流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀檢測(cè)AnnexinV-FITC和PI的熒光強(qiáng)度（Ex=488 nm，Em=525 nm；Ex=488 nm，Em=620 nm），每個(gè)劑量設(shè)置3個(gè)平行孔。

1.2.4 細(xì)胞存活率的測(cè)定

待細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用胰酶消化以每孔7000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板培養(yǎng)48 h，48 h后每孔加入100 μL含硒培養(yǎng)基，處理濃度分別為SeIV 0.4、0.8、2.0、4.0、8.0 μg Se/mL，SeMet為 40、80、160、320 μg Se/mL，并設(shè)置不含硒的培養(yǎng)基空白組作為對(duì)照。培養(yǎng)24 h后每孔加入10 μL MTT（5 g/L），溫育4 h后棄去上清液，每孔加入200 μL DMSO，震蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀490 nm處檢測(cè)吸光（A）值，代入以下公式：

應(yīng)用線性回歸模型計(jì)算各硒化物對(duì)細(xì)胞的半抑制濃度（IC50），實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每個(gè)劑量（含對(duì)照）設(shè)置6個(gè)平行孔。

1.2.5 細(xì)胞染毒及酶的測(cè)定

待細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以每孔 105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板，培養(yǎng)7 d后加入含硒的培養(yǎng)基培養(yǎng)，處理濃度為 SeIV 0.8、4.0、8.0 μg Se/mL，SeMet為 40、80、160 μg Se/mL，并設(shè)置不含硒的空白組進(jìn)行對(duì)照。細(xì)胞培養(yǎng)24 h收集培養(yǎng)上清液，冷凍PBS清洗細(xì)胞2次后，用定量PBS收集細(xì)胞，采用超聲波破碎細(xì)胞。用相關(guān)試劑盒檢測(cè)SOD、GSH、LDH、總蛋白，每個(gè)劑量設(shè)4個(gè)平行孔孔，具體操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，LDH釋放率計(jì)算公式為：

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果和討論

2.1 SeIV和SeMet處理下Caco-2細(xì)胞的凋亡率

在此前的研究中，1 μM 的亞硒酸鈉顯著提高了HepG-2細(xì)胞的凋亡率，1 μM的硒代蛋氨酸處理則不顯著[11]。在本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)濃度為0.8 μg Se/mL時(shí)，SeIV處理組的 Caco-2細(xì)胞的凋亡率與對(duì)照組相比顯著增加（p＜0.05），而SeMet處理的細(xì)胞凋亡率差異不顯著，見(jiàn)表1、圖1，其中對(duì)應(yīng)的細(xì)胞狀態(tài)Q1是細(xì)胞壞死狀態(tài)，Q2、Q3是細(xì)胞凋亡狀態(tài)，Q4是細(xì)胞存活狀態(tài)。由此說(shuō)明在較低濃度時(shí)，SeIV即可對(duì)Caco-2細(xì)胞表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒性，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，但是SeMet則沒(méi)有顯著影響。

圖1 0.8 μg Se/mL SeIV和SeMet處理下Caco-2細(xì)胞的凋亡圖Fig.1 The effect of the SeIV and SeMet on apoptosis of Caco-2 cell (0.8 μg Se/mL)

表1 SeIV和SeMet培養(yǎng)對(duì)Caco-2細(xì)胞的凋亡率影響Table 1 The effect of the SeIV and SeMet on apoptosis of Caco-2 cell (n±3, )

表1 SeIV和SeMet培養(yǎng)對(duì)Caco-2細(xì)胞的凋亡率影響Table 1 The effect of the SeIV and SeMet on apoptosis of Caco-2 cell (n±3, )

注：*表示與對(duì)照組的差異顯著（p＜0.05）。

處理組 凋亡率/%對(duì)照組（0 μg Se/mL） 5.38±0.57 SeIV（0.8 μg Se/mL） 19.09±0.95*SeMet（0.8 μg Se/mL） 4.75±0.39

2.2 不同硒形態(tài)作用下Caco-2細(xì)胞的存活率

本研究采用MTT評(píng)估不同硒形態(tài)對(duì)Caco-2細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，當(dāng) SeIV濃度范圍是 0.4～8 μg Se/mL，細(xì)胞存活率分別為75.94%，74.10%，36.82%和 19.29%，均顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）；SeMet濃度范圍是 40～320 μg Se/mL時(shí)，細(xì)胞存活率分別為75.88%，67.47%，50.73%和 45.76%，均顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）；兩者對(duì)細(xì)胞增殖的影響均并呈現(xiàn)出顯著的劑量-反應(yīng)效應(yīng)關(guān)系。經(jīng)計(jì)算SeIV和SeMet的IC50分別為2.56、215.55 μg Se/mL，見(jiàn)表2、表3，對(duì)Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用SeIV＞SeMet。且SeIV和SeMet對(duì)Caco-2細(xì)胞的毒性呈劑量依賴。這與此前研究結(jié)果相似，無(wú)機(jī)硒對(duì)HepG-2細(xì)胞的細(xì)胞毒性大于有機(jī)硒[11]，Takahashi[12]利用HepG-2研究硒對(duì)細(xì)胞毒性研究發(fā)現(xiàn)SeIV毒性強(qiáng)于SeMet，Hoefig[13]研究表明不同硒化物對(duì)細(xì)胞毒性作用的閾值存在一定差異，Lazard[14]研究表明不同的細(xì)胞系對(duì)硒化合物的敏感性不同。

表2 SeIV暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Table 2 Effect of SeIV on Caco-2 cell viability (n±6,)

表2 SeIV暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Table 2 Effect of SeIV on Caco-2 cell viability (n±6,)

注：*表示差異顯著（p＜0.05）。下同。

Se 濃度/(μg/mL) 存活率/%0 100.61±7.77 0.4 75.94±7.04*2 74.10±12.84*4 36.82±5.34*8 19.29 ±6.89*

表3 SeMet暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Table 3 Effect of SeMet on Caco-2 cell viability (n±6,)

表3 SeMet暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Table 3 Effect of SeMet on Caco-2 cell viability (n±6,)

Se濃度/(μg/mL) 存活率/%0 100.61±7.77 40 75.88±6.84*80 67.47±2.11*160 50.73±8.32*320 45.76±5.67*

2.3 LDH釋放率的測(cè)定

表4 SeIV暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞LDH釋放率的影響Table 4 Effect of SeIV on Caco-2 cell LDH release (n±4,)

表4 SeIV暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞LDH釋放率的影響Table 4 Effect of SeIV on Caco-2 cell LDH release (n±4,)

Se濃度/(μg/mL) 釋放率/%0 14.80±2.01 0.8 35.72±1.45*4 80.73±4.18*8 85.83±3.39*

在體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，LDH屬于一種穩(wěn)定存在細(xì)胞內(nèi)部的酶，而當(dāng)細(xì)胞遭受應(yīng)激損傷后能迅速釋放到細(xì)胞外，因此，細(xì)胞外液中的 LDH活性是衡量細(xì)胞發(fā)生應(yīng)激損傷的指標(biāo)物[15]。當(dāng)SeIV濃度為0.8～8 μg Se/mL時(shí)，LDH釋放率分別為 35.72%，80.73%和85.83%，均顯著高于對(duì)照組（p＜0.05），見(jiàn)表4；SeMet濃度為 40～320 μg Se/mL時(shí)，LDH 釋放率分別為28.39%，32.69%和 50.08%，均顯著高于對(duì)照組（p＜0.05），見(jiàn)表5。在劉洋洋[16]等在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的實(shí)驗(yàn)中，在1.2～2.4 μmol/L范圍內(nèi)，SeMet處理的細(xì)胞LDH滲出比SeIV處理的細(xì)胞少，這說(shuō)明不同形態(tài)的硒對(duì)腸上皮細(xì)胞 Caco-2細(xì)胞膜的損傷程度存在差異，表現(xiàn)為SeIV＞SeMet。

表5 SeMet暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞LDH釋放率的影響Table 5 Effect of SeMet on Caco-2 cell LDH release (n±4,)

表5 SeMet暴露對(duì)Caco-2細(xì)胞LDH釋放率的影響Table 5 Effect of SeMet on Caco-2 cell LDH release (n±4,)

Se濃度/(μg/mL) 釋放率/%0 14.80±2.01 40 28.39±9.51*80 32.69±2.23*160 50.08±10.31*

2.4 細(xì)胞中SOD活力和GSH含量的測(cè)定結(jié)果

作為機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化物SOD和GSH，在機(jī)體對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷的過(guò)程中發(fā)揮著相當(dāng)重要的作用。SOD能夠清除外源物質(zhì)刺激產(chǎn)生的活性氧，減輕氧化物自由基對(duì)細(xì)胞質(zhì)膜的毒害[17-19]。已有研究表明，SeIV可以刺激人急性早幼粒細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的活性氧物質(zhì)生成，對(duì)NB4細(xì)胞造成損傷[20]。采用不同濃度的 SeIV處理大鼠口腔鱗癌細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)的SOD活性隨著SeIV濃度的增加而降低[21]。在本研究中，當(dāng)SeIV濃度為4和8 μg Se/mL，SOD活性分別為40.43 U/mg prot和13.02 U/mg prot，Caco-2細(xì)胞的SOD活性均顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）；SeMet濃度40～160 μg Se/mL時(shí)，SOD活性分別為40.35 U/mg prot、23.24 U/mg prot和 9.39 U/mg prot，Caco-2 細(xì)胞的SOD活性均顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）。當(dāng)SeIV濃度 4 μg Se/mL，GSH 含量為 31.40 μg/mg prot，Caco-2細(xì)胞GSH含量均顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）；而SeMet濃度則為160 μg Se/mL時(shí)，Caco-2細(xì)胞GSH含量（39.05 μg /mg prot）顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）。隨著SeIV硒濃度的升高，細(xì)胞中的SOD活力和GSH含量成下降趨勢(shì)，SeMet在較高濃度時(shí)，細(xì)胞中的SOD活力和GSH含量也明顯下降，見(jiàn)表6、表7。這些結(jié)果說(shuō)明，高于一定劑量的SeIV和SeMet可降低機(jī)體內(nèi)源抗氧化系統(tǒng)活性，破壞細(xì)胞氧化與抗氧化之間的平衡從而導(dǎo)致氧化損傷的產(chǎn)生，造成細(xì)胞的活性下降和誘導(dǎo)凋亡。比較SeIV和SeMet，相同劑量下SeIV對(duì)腸上皮細(xì)胞Caco-2的氧化損傷能力高于SeMet。

GSH是細(xì)胞內(nèi)的三肽物質(zhì)，參與無(wú)機(jī)硒在細(xì)胞內(nèi)代謝[22]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，一定濃度（4～8 μg Se/mL）的SeIV顯著降低Caco-2細(xì)胞內(nèi)的GSH含量，最高濃度（160 μg Se/mL）的SeMet顯著降低Caco-2細(xì)胞內(nèi)GSH的含量。Cristina[23]的研究得到相似結(jié)果，不同濃度（1～50 μM）的SeIV處理增加了F36P細(xì)胞的GSH水平。但SeMet處理（5～500 μM），低濃度誘導(dǎo)谷胱甘肽水平下降，而高濃度誘導(dǎo)谷胱甘肽水平顯著上升。Ganther和Kumari等人[24-26]研究發(fā)現(xiàn)，在體外實(shí)驗(yàn)中，SeIV在谷胱甘肽（GSH）的作用下被還原成氫化硒，Bao等[27]研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的納米硒引起的多重毒理效應(yīng)是硒化物引起細(xì)胞毒性的原因之一，這與GSH參與硒的還原反應(yīng)有密切關(guān)系，超過(guò)一定劑量的SeIV在細(xì)胞內(nèi)與谷胱甘肽（GSH）進(jìn)一步反應(yīng)生成內(nèi)生性納米硒，細(xì)胞內(nèi)GSH/GSSG比值降低以及蛋白質(zhì)氧化和脂質(zhì)過(guò)氧化的增加，硒納米粒子的尺寸效應(yīng)、邊際效應(yīng)引起細(xì)胞氧化還原失衡和氧化應(yīng)激，加劇細(xì)胞凋亡或壞死[28]。

表6 SeIV對(duì)Caco-2細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的影響Table 6 Effects of SeIV on Caco-2 cell SOD and GSH activity(n±4, )

表6 SeIV對(duì)Caco-2細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的影響Table 6 Effects of SeIV on Caco-2 cell SOD and GSH activity(n±4, )

Se 濃度/(μg/mL) SOD/(U/mg prot) GSH/(μg/mg prot)0 56.76±3.64 61.67±4.73 0.8 48.62±7.41 54.27±3.47 4 40.43±2.30* 31.40±4.03*8 13.02±5.39* 27.90±1.45*

表7 SeMet對(duì)Caco-2細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的影響Table 7 Effects of SeMet on Caco-2 cell SOD and GSH activity（n±4,）

表7 SeMet對(duì)Caco-2細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的影響Table 7 Effects of SeMet on Caco-2 cell SOD and GSH activity（n±4,）

Se濃度/(μg/mL) SOD/(U/mg prot) GSH/(μg /mg prot)0 56.76±3.64 61.67±4.73 40 40.35±8.53* 64.05±8.78 80 23.24±6.85* 67.96±2.48 160 9.39±1.66* 39.05±4.39*

本實(shí)驗(yàn)中一定濃度的SeIV和SeMet均不同程度的降低Caco-2細(xì)胞的SOD活性和GSH的含量，并提高細(xì)胞外液的LDH活性（見(jiàn)2.3），說(shuō)明高劑量的SeIV和SeMet均能破壞Caco-2的氧化還原平衡，損傷其細(xì)胞膜，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。此前的研究表明，SeMet與 SeIV的細(xì)胞毒性可能是硒在細(xì)胞內(nèi)還原而產(chǎn)生活性氧自由基（ROS和O2-·）導(dǎo)致，但是它們的毒性中心不同，SeIV的毒性中心為H2Se，SeIV在還原成H2Se的過(guò)程中降低谷胱甘肽比例（GSH/GSSG），并產(chǎn)生的ROS可誘導(dǎo)細(xì)胞的DNA損傷，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和壞死；而SeMet進(jìn)入細(xì)胞后會(huì)生成硒代半胱氨酸（SeCys），進(jìn)而生成硒代胱氨酸（SeCys2），SeCys2和SeCys的循環(huán)可產(chǎn)生ROS導(dǎo)致細(xì)胞氧化應(yīng)激，并引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白錯(cuò)誤折疊破壞細(xì)胞功能，有研究認(rèn)為，SeCys可能是通過(guò)誘導(dǎo)蛋白質(zhì)毒性而使細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激，這與無(wú)機(jī)硒誘導(dǎo)的DNA損傷不同[29-32]。

3 結(jié)論

硒是哺乳動(dòng)物的必需的微量元素，但環(huán)境中過(guò)高的硒背景值和過(guò)量的攝入會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒害作用。國(guó)家食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑標(biāo)準(zhǔn)（GB14880-2012）中食物內(nèi)硒的添加量為 0.03～0.280 mg/kg，添加劑為亞硒酸鈉（SeIV）和硒酸鈉（SeVI），遠(yuǎn)低于本研究的劑量范圍。由于植物可將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化成硒蛋白儲(chǔ)存，其硒蛋白組成主要為SeMet，近年來(lái)富硒農(nóng)產(chǎn)品如富硒大米成為新的補(bǔ)硒手段，而對(duì)農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行外源添加無(wú)機(jī)硒或者有機(jī)硒是生產(chǎn)富硒農(nóng)產(chǎn)品的主要途徑。本研究對(duì)比了SeIV和SeMet的細(xì)胞毒性和氧化損傷能力，發(fā)現(xiàn)高于一定劑量的SeIV和SeMet均可不同程度地對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，但是 SeIV的氧化損傷能力明顯高于SeMet，因此在生產(chǎn)和銷售富硒農(nóng)產(chǎn)品的過(guò)程中，需加強(qiáng)對(duì)富硒農(nóng)產(chǎn)品的硒含量和無(wú)機(jī)硒肥殘留的檢測(cè)，同時(shí)更需要關(guān)注農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒的占比。