比較分析ELISA法和實(shí)時熒光PCR法在麻疹檢測上的應(yīng)用

遼陽市衛(wèi)生健康服務(wù)中心臨床檢驗(yàn)科 （遼寧 遼陽 111000）

內(nèi)容提要：目的：分析ELISA法和實(shí)時熒光PCR檢測麻疹的效果。方法：挑選2018年10月～2019年10月本院收治的161例疑似麻疹患者，采用ELISA法與實(shí)時熒光PCR（RT-PCR）法檢測所有患者，分析兩種檢測方法檢測結(jié)果。結(jié)果：ELISA法檢測麻疹I(lǐng)gM抗體陽性66例，陰性95例，陽性檢出率為40.99%，RT-PCR法檢測麻疹病毒核酸陽性100例，陰性61例，陽性檢出率為62.11%，RT-PCR法檢測陽性率高于LISA法（P＜0.05）。出疹當(dāng)日RTPCP法陽性率為44.00%，ELISA法陽性率為16.00%。伴隨時間移動，ELISA法檢測陽性率日益升高，RTPCR法在第4d陽性檢出率就開始下降。對比出疹2d內(nèi)兩種檢測法的陽性檢出率，RT-PCP法陽性率高于ELISA法（P＜0.05）。結(jié)論：實(shí)時熒光PCR法可以有效診斷早期麻疹病毒，提高麻疹陽性檢出率，減少漏診率。

麻疹的病原體就是麻疹病毒，病毒入侵人體后會引發(fā)急性病毒性呼吸道傳染病，麻疹極具傳染性，且發(fā)病率極高。麻疹病毒的感染速度極快，有效精準(zhǔn)的診斷早期疑似麻疹患者，意義重大，疾病確診后就一定要馬上采取針對性的預(yù)防治療手段，控制麻疹暴發(fā)概率。本文分析ELISA法和實(shí)時熒光PCR檢測麻疹的效果，現(xiàn)作如下報告。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年10月～2019年10月本院收治的161例疑似麻疹患者，男92例，女69例，年齡1～12歲，平均（6.5±2.1）歲，患者知情，本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。患者出疹5d內(nèi)采集血液樣本與咽拭子標(biāo)本，實(shí)施檢測。

儀器與試劑：選擇安圖-2010酶標(biāo)儀、ABI7300熒光定量PCR儀作為檢測儀器，選擇珠海經(jīng)濟(jì)特區(qū)海泰生物制藥有限公司的麻疹病毒IgM抗體檢測試劑盒。確定QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit試劑盒作為RNA提取試劑盒。熒光RT-PCR試劑盒則選擇廣州達(dá)安基因公司的流感病毒核酸檢測試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 收集樣本。①收集咽拭子：運(yùn)用專門的病毒采樣管拭子頭擦拭患者咽喉部，收集上皮細(xì)胞，盡可能錯開口腔中的黏膜、唾液、舌頭等組織及液體，然后，放置完成收集的拭子頭到樣本保存液內(nèi)，放到2～8?C的條件下進(jìn)行冷藏以備用。②采集患者2～3mL靜脈血，設(shè)定轉(zhuǎn)速2000r/min，在4?C條件下實(shí)施離心，離心10min后提取上層血清，放到2～8?C條件下冷藏以備用。

1.2.2 血清中麻疹I(lǐng)gM運(yùn)用ELISA法檢測。依據(jù)試劑盒使用說明書，運(yùn)用試劑盒檢測患者血液標(biāo)本中麻疹病毒IgM抗體，同時設(shè)定專用空白對照孔，添加任意液體至孔內(nèi)；接著設(shè)定陽性、陰性2個對照孔，以100μL/孔的比例分別注射對應(yīng)的對照液至兩孔內(nèi)；遵循100μL/孔比例，依次加入10μL待測血清、標(biāo)本稀釋液到樣品孔內(nèi)。在檢測過程中，運(yùn)用麻疹病毒IgM抗體檢測試劑盒檢測所有血清標(biāo)本病毒IgM，從而減少檢測受到麻疹病毒的影響。

1.2.3 運(yùn)用RT-PCR法檢測病毒核酸。將采集的標(biāo)本放到3～5mL的病毒標(biāo)本保存液加以存儲，運(yùn)用柱式病毒RNAout試劑盒將RNA提取出來，后續(xù)實(shí)施擴(kuò)增。接著運(yùn)用RT-PCR法檢測樣本，檢測人員遵循麻疹病毒RNA檢測試劑盒說明書，按流程開展檢測，順利實(shí)施反應(yīng)體系后，運(yùn)用PCR儀開展擴(kuò)增，開展反應(yīng)應(yīng)當(dāng)具備下列條件：逆轉(zhuǎn)錄溫度為50?C，時間15min，1次循環(huán)；預(yù)變性溫度在95?C，時間15min，1次循環(huán)退火、變性、延伸溫度在94?C，時間15s，循環(huán)40次。等溫度達(dá)到55?C，收集所有熒光信號。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

運(yùn)用SPSS19.0分析數(shù)據(jù)。用（%）呈現(xiàn)計數(shù)資料，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05說明有顯著差異。

2.結(jié)果

2.1 兩種檢測方法的陽性檢出情況

ELISA法檢測麻疹I(lǐng)gM抗體陽性66例，陰性95例，陽性檢出率為40.99%（66/161），RT-PCR法檢測麻疹病毒核酸陽性100例，陰性61例，陽性檢出率為62.11%（100/161），RT-PCR法檢測陽性率高于LISA法（χ2=14.3741，P=0.0001），見表1。

2.2 不同出疹時間檢測結(jié)果

出疹當(dāng)日RT-PCP法陽性率為44.00%，ELISA法陽性率為16.00%。伴隨時間移動，ELISA法檢測陽性率日益升高，RT-PCR法在第4d陽性檢出率就開始下降。對比出疹2d內(nèi)兩種檢測法的陽性檢出率，RT-PCP法陽性率高于ELISA法（P＜0.05）。比較出疹2d、以及2d以后的陽性檢出率，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表1.兩種檢測方法的陽性檢出情況(n)

3.討論

麻疹屬于出疹性疾病，現(xiàn)在疾病缺少更為突出的癥狀，主要原因是運(yùn)用疫苗，病毒毒性轉(zhuǎn)變，成年麻疹患者不斷增加，如此以來，增加臨床鑒別麻疹與其他發(fā)熱出疹性疾病的難度[1]。出疹前后5d有著極強(qiáng)的傳染性，鑒于比較少見麻疹病毒陰性感染者與病毒攜帶者，所以，盡早診斷并實(shí)施針對性措施有著極為重要的意義。

臨床主要運(yùn)用RT-PCR與ELISA法檢測麻疹病毒。ELISA法操作便捷，有著較高的敏感性與特異性，然而，人體不同就會有不同的生特異性IgM抗體的免疫反應(yīng)，采集血液樣本的時段差異也會對血清學(xué)診斷精準(zhǔn)度帶去影響，太早收集樣本會很大程度上出現(xiàn)假陰性，太晚采集樣本則會耽誤治療時機(jī)，采血難度也隨之加大，更會影響早期診斷與防護(hù)措施的實(shí)施。

RT-PCR法的優(yōu)勢是高敏感性與精準(zhǔn)性，操作流程簡單，可以迅速對麻疹病毒核酸進(jìn)行檢測，無須實(shí)施PCR處置，可以直觀地呈現(xiàn)檢測結(jié)果，防止人為因素影響到檢測結(jié)果，只要大約3h就可以完成提取核酸，以及實(shí)施檢測[2,3]。運(yùn)用RTPCR法處置麻疹疫情時，僅僅幾個小時內(nèi)就可以獲得實(shí)驗(yàn)室確診。

本研究顯示，RT-PCR法檢測陽性率高于LISA法（P＜0.05）。對比出疹2d內(nèi)兩種檢測法的陽性檢出率，RT-PCP法陽性率高于ELISA法（P＜0.05）。

總之，RT-PCR法檢測麻疹效果更佳，安全可靠。

表2.不同出疹時間檢測結(jié)果