探索茵陳對(duì)小鼠酒精性脂肪肝的保肝作用及其效果

蔣鴻燕，高 悅，路夢(mèng)琦，劉小溶，隋竹欣*

（齊魯醫(yī)藥學(xué)院，山東 淄博 255300）

近年來(lái)，伴隨著人民生活質(zhì)量的增加和生活水平的上升，飲酒不良習(xí)慣的增加，酒精性脂肪肝的趨勢(shì)呈現(xiàn)出逐年上升的狀態(tài)，酒精性肝病在中國(guó)已成為第二大肝臟疾病。脂肪肝病因各種各樣，多種病因均可導(dǎo)致脂肪代謝障礙，導(dǎo)致形成脂肪肝。肝細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）合成和分泌之間不均衡是引起肝細(xì)胞脂質(zhì)非正常積蓄的重要因素。最近幾年來(lái)由于酒精誘發(fā)腸粘膜透析增加，血液內(nèi)腸內(nèi)毒素泄漏及肝k細(xì)胞活性化，生成了炎癥性cytork機(jī)制，是研究酒精肝損傷機(jī)制的熱點(diǎn)之一。其是因酒精性肝病類(lèi)型而產(chǎn)生，只要是因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間飲酒過(guò)量，肝細(xì)胞脂肪變性、損傷及炎細(xì)胞浸潤(rùn)為特點(diǎn)的疾病[1]。長(zhǎng)時(shí)間飲酒可引起酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化等[2]。酒精性肝病發(fā)病初期可無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，但其肝臟內(nèi)部結(jié)構(gòu)在鏡下與正常組織相比早就產(chǎn)生了明顯的變化，酒精性肝病的病因顯而易見(jiàn)，是以大量的并且長(zhǎng)期的飲酒為主所產(chǎn)生的，雖然病因簡(jiǎn)單，但是它的發(fā)病機(jī)理卻是非常復(fù)雜的。社會(huì)在發(fā)展人民的生活質(zhì)量也在抬高，患有酒精性脂肪肝的病人也越來(lái)越多。因此酒精中毒對(duì)病毒性的肝炎和肝癌的產(chǎn)生、進(jìn)展和預(yù)后有著非常重要的作用。目前，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)理想的靶向治療藥物，因此對(duì)治療酒精性脂肪肝的安全有效藥物的研究已引起越來(lái)越多國(guó)家和研究人士的關(guān)注。茵陳為菊科植物濱蒿或茵陳蒿干燥地上部分[3]。其具有利膽保肝、退黃利濕、鎮(zhèn)痛、抗炎等各種效用，特別是肝膽系統(tǒng)疾病療效確，也是黃疸治療方劑中使用率最高的藥物[4]。藥用植物中草藥茵陳可以有效的減少血清轉(zhuǎn)氨酶的活性，其中艾草色酮，6，7-二甲氧基香豆素，類(lèi)黃酮等成分具有保肝作用。關(guān)于肝臟保護(hù)方面，亦可用茵陳做成茵陳蒿湯，其可以通過(guò)調(diào)血脂減少脂肪在肝臟積蓄，從而防止酒精性脂肪肝形成[5]。本研究以酒精性脂肪肝小鼠為模型，觀(guān)察茵陳對(duì)酒精性脂肪肝小鼠的保護(hù)作用及其效果。

1 材料與方法

（1）藥品與試劑

TC和TG試劑盒南京建成生物工程研究所。茵陳草是采得野生頭茬綿茵陳干草，中醫(yī)藥房購(gòu)買(mǎi)?；A(chǔ)飼料和高脂飼料購(gòu)買(mǎi)于南京盛民科研動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，15%的乙醇按比例勾兌。

（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年雄性小白鼠，體重20～25 g，齊魯醫(yī)藥學(xué)院動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)。

（3）茵陳全汁制備及給藥

干葉磨碎100 g加蒸餾水100 mL煮開(kāi)，即為100%全果汁，過(guò)濾后丟棄廢渣。茵陳葉干預(yù)組每天全汁0.5 mL，15%乙醇0.5 mL；模型組每天15%乙醇0.5 mL，對(duì)照組等量生理鹽水，各組連續(xù)6周每天灌胃一次。

（5）實(shí)驗(yàn)方法

30只小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分對(duì)照組、模型組和治療組，各組別為10只。對(duì)照組基礎(chǔ)飼料，模型組高脂飼料+15%乙醇不定量自由飲食，治療組高脂飼料+15%乙醇+茵陳。6周后小鼠眼球取血法取血，各組別隨機(jī)抽取6只取肝臟，多聚甲醛溶液固定，進(jìn)行石蠟切片制備HE染色。甘油三酯和總膽固醇采用酶偶聯(lián)比色法測(cè)定。

2 結(jié) 果

2.1 茵陳對(duì)酒精性脂肪肝小鼠肝組織學(xué)改變

對(duì)照組：鏡下可見(jiàn)肝細(xì)胞形態(tài)完整，核圓居中，偶爾有雙核的細(xì)胞，肝板以及肝板之間的肝血竇清晰規(guī)則。模型組：鏡下可見(jiàn)密集散布、大小不等脂滴空泡，部分細(xì)胞腫大，細(xì)胞核被脂滴推擠至細(xì)胞一側(cè)，肝板混亂，肝血竇辨別不清，正常肝組織結(jié)構(gòu)明顯遭到破壞。治療組：鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞體積輕度增大，胞漿內(nèi)有些許小泡狀脂滴，肝細(xì)胞排列較模型組規(guī)則，中央靜脈周?chē)渭?xì)胞較規(guī)則排列，可見(jiàn)到肝血竇，脂肪肝的改變明顯減輕。

2.2 TG、TC含量（表1）

表1 TC、TG含量結(jié)果（±s，n=10）

表1 TC、TG含量結(jié)果（±s，n=10）

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aP＜0.05vs對(duì)照組bP＜0.05vs模型組。模型組TC和TG的含量較對(duì)照組明顯升高，經(jīng)茵陳干預(yù)治療后，TC和TG較模型組明顯下降，但是較對(duì)照組還是略有升高，結(jié)果提示茵陳對(duì)酒精性脂肪肝小鼠肝臟TC和TG有降低作用，從而可以有效保護(hù)肝臟的作用。

3 討 論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果模型組小鼠TC和TG含量水平均明顯升高，肝細(xì)胞也發(fā)生了組織學(xué)變化，提示很好復(fù)制酒精性脂肪肝動(dòng)物模型。經(jīng)茵陳喂養(yǎng)干預(yù)后，對(duì)小鼠酒精性脂肪肝的肝細(xì)胞形態(tài)有明顯變化。茵陳中的主要成分為6，7-二甲基香豆素，這個(gè)成分對(duì)于酒精性脂肪肝的損害有著較為極強(qiáng)的改變，是茵陳保肝作用的最重要的成分，可以抗氧化，從而起到保肝的作用。我們?cè)诶靡痍愰_(kāi)展實(shí)驗(yàn)查閱文獻(xiàn)的同時(shí)發(fā)現(xiàn)，茵陳還可用作茵陳蒿湯，是祖國(guó)醫(yī)學(xué)經(jīng)典方劑，首見(jiàn)于東漢張仲景的《傷寒論》和《金匱要略》，前者治療陽(yáng)明病“瘀熱在里”的發(fā)黃，后者治療黃疸病的“谷疸”[6-7]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明茵陳干預(yù)組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損害比模型組癥狀明顯有所降低，茵陳對(duì)于TC和TG含量有明顯的下降，這說(shuō)模型組在一點(diǎn)點(diǎn)誘導(dǎo)酒精性脂肪肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變，表明茵陳對(duì)酒精性脂肪肝小鼠具有一定的保護(hù)作用，但是具體酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制以及如何預(yù)防和保護(hù)還有待后期進(jìn)一步的研究。