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    全自動核酸檢測分析系統(tǒng)在無償獻(xiàn)血者病毒檢測中的應(yīng)用

    2021-01-14 10:01:18劉永霞
    實用臨床醫(yī)藥雜志 2020年23期
    關(guān)鍵詞:窗口期無償獻(xiàn)血者檢測法

    劉永霞, 劉 歡, 劉 燕, 趙 妮

    (延安大學(xué)附屬醫(yī)院 輸血科, 陜西 延安, 716000)

    保證血液及血液制品的安全性和提高輸血相關(guān)傳染病的防控能力等是目前臨床廣泛關(guān)注的焦點[1]。中國常用的血液篩查方法是以檢測血液中病毒抗原或抗體滴度為原理的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法,但該方法具有較長的病毒感染檢測窗口期,使得窗口期病毒檢測結(jié)果呈假陰性,降低了對血液病毒的有效防控能力[2-3]。核酸檢測法是一種利用核酸擴(kuò)增技術(shù)直接檢測病原體核酸的新型血液病毒篩查檢測技術(shù),該方法敏感度高,可檢測出微量病毒,并將乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人類免疫缺陷病毒(HIV)感染窗口期分別縮短9~36 d、25~60 d和7~15 d, 大大降低了血液傳播病毒的感染風(fēng)險[4-6]。2010年起中國將核酸檢測法應(yīng)用于血液病毒篩查工作中,為加強臨床輸血安全和降低輸血相關(guān)傳染病發(fā)生率提供了可能[7]。為了探討核酸檢測法在血液篩查中的臨床應(yīng)用價值,本研究將全自動核酸檢測分析系統(tǒng)應(yīng)用于無償獻(xiàn)血者血液HBV、HCV和HIV檢測中,并與ELISA法檢測結(jié)果進(jìn)行比較,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2018年1—5月在延安市中心血站獻(xiàn)血的1 229例無償獻(xiàn)血者作為研究對象,其中男658例、女571例,年齡20~55歲,平均(41.14±6.49)歲。每位獻(xiàn)血者均采集2管靜脈血, 1管(7 mL真空抗凝管)用于ELISA檢測,另外1管(5 mL EDTA-K2抗凝帶分離膠真空采血管)用于核酸檢測。

    1.2 檢測方法

    1.2.1 ELISA檢測: 收集7 mL靜脈血轉(zhuǎn)移至真空抗凝管中,室溫條件下,離心20 min后保存于2~8 ℃冰箱中備用。采用全自動加樣儀自動加樣,全自動酶免分析儀分析血液,詳細(xì)記錄檢測結(jié)果。

    1.2.2 核酸檢測: 將經(jīng)離心處理的5 mL血樣應(yīng)用全自動核酸提取儀進(jìn)行處理。匯集管中樣本總量為1 440 μL加入1 000 μL裂解液和40 μL磁珠,加100 μL去抑制劑裂解血液樣本,注意防止血樣污染。分別加950 μL的A、B、C洗液洗脫后,加入120 μL結(jié)合液,核酸提取儀從96孔深孔板中提取核酸,同時配備擴(kuò)增核酸的反應(yīng)液。核酸擴(kuò)增步驟為加入核酸提取液及新配制的核酸擴(kuò)增液反應(yīng)液,隨后置于ABI7500 PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增分析,詳細(xì)記錄結(jié)果,并根據(jù)陽性血液樣本數(shù)目計算血液樣本陽性率。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析本研究數(shù)據(jù),計數(shù)資料的比較使用McNemar檢驗,檢驗水準(zhǔn)α=0.05, 以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 2種方法的HBV檢測結(jié)果比較

    核酸檢測的HBV陽性率為2.03%(25/1 229), 高于ELISA檢測的HBV陽性率0.98%(12/1 229), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

    表1 核酸檢測與ELISA檢測的HBV檢測結(jié)果比較

    2.2 2種方法的HCV檢測結(jié)果比較

    核酸檢測的HCV陽性率為1.22%(15/1 229), 高于ELISA檢測的HCV陽性率1.14%(14/1 229), 但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 見表2。

    表2 核酸檢測與ELISA檢測的HCV檢測結(jié)果比較

    2.3 2種方法的HIV檢測結(jié)果比較

    核酸檢測的HIV陽性率為0.24%(3/1 229), 低于ELISA檢測的HIV陽性率1.06%(13/1 229), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 見表3。

    表3 核酸檢測與ELISA檢測的HIV檢測結(jié)果比較

    3 討 論

    目前,經(jīng)血液傳播疾病有20多種,其中包括艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎等傳染性較強的疾病。無償獻(xiàn)血者血液中存在HBV、HCV、HIV的概率不斷升高[8], 因此做好血液病毒篩查工作對于保證血液及血液制品的質(zhì)量至關(guān)重要。臨床上常選用特異性較高的ELISA法進(jìn)行血液病毒篩查,但該方法的影響因素較多[9-11]: ① 血樣污染。非一次性全自動酶免分析儀使用自動加樣針,若加樣針被陽性血樣污染后未徹底清洗,會導(dǎo)致下一次血樣檢查出現(xiàn)假陽性。② 抗原試劑質(zhì)量不達(dá)標(biāo)也可能影響檢測結(jié)果。國產(chǎn)抗原試劑一般純度較低,易造成假陽性,而進(jìn)口試劑純度較高,假陽性率相對較低, 2種試劑聯(lián)合檢測可提升血樣結(jié)果的真陽性概率。相關(guān)研究[12]顯示,應(yīng)用國產(chǎn)抗原試劑進(jìn)行ELISA檢測時,由于試劑質(zhì)量不高,檢測結(jié)果假陽性率可高達(dá)0.18%。③ 樣本溶血、自身免疫性抗體和有交叉反應(yīng)的物質(zhì)等也會影響檢測結(jié)果。病毒進(jìn)入體內(nèi)至能夠被檢測到的時間為病毒感染的窗口期,ELISA檢測窗口期較長,可使窗口期血液病毒的檢查結(jié)果呈假陰性,但實際上此時已存在病毒感染,且病毒具有一定復(fù)制能力,傳染能力較強。

    病原體核酸檢測技術(shù)簡稱核酸檢測技術(shù),利用生物、物理、化學(xué)技術(shù)對微量靶核酸及其附帶的信號進(jìn)行擴(kuò)增并轉(zhuǎn)化成光電和可視信號來反映病毒陽性情況。本研究結(jié)果顯示,核酸檢測技術(shù)對HBV的檢測陽性率高于ELISA檢測,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 與何培元等[13]研究結(jié)論一致。李天駒等[14]報道,核酸檢測技術(shù)能檢測極微量病毒感染幾天后的感染情況,靈敏度較高。相關(guān)研究[15]顯示,核酸檢測法不僅能使HBV檢測窗口期縮短25 d, 還能避免ELISA法的HBV篩查假陽性率高現(xiàn)象。雖然核酸檢測法并不能完全消除窗口期的影響,但未能被此法檢測到時的HBV傳染能力較弱,故采用核酸檢測法篩查HBV可大大降低HBV輸血傳播風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示,相較于核酸檢測技術(shù), ELISA法對血液HIV具有更高的篩查陽性率,說明ELISA法更適用于血液HIV篩查,這可能與病毒載量低、未能達(dá)到核酸檢測水平有關(guān)。但當(dāng)機體長期處于病毒感染狀態(tài)時,血液中抗原和抗體滴度較高,不影響ELISA檢測。盡管如此,本研究中ELISA法的HIV檢測陽性率僅1.06%, 出現(xiàn)漏診現(xiàn)象的原因主要是窗口期的影響,且HIV屬于RNA病毒,結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,故采用ELISA法檢測易出現(xiàn)假陰性。核酸檢測法是檢測病毒核酸,ELISA法則是檢測抗原或抗體, 2種檢測方法的應(yīng)用原理不同,聯(lián)合應(yīng)用時可有效提高血液病毒篩查的靈敏性和特異性,進(jìn)而提升血液篩查的準(zhǔn)確性。相較于ELISA法,核酸檢測法需要更高的樣本處理和操作技術(shù),實驗室條件要求和檢測成本更高,且檢測載量低的病毒時易出現(xiàn)假陰性,此時采用ELISA法檢測血液中抗原或抗體滴度可提高血液病毒篩查陽性率。

    綜上所述,全自動核酸檢測分析系統(tǒng)在無償獻(xiàn)血者血液HBV、HCV、HIV檢測中具有重要作用,與ELISA法比較各具優(yōu)勢, 2種方法聯(lián)合應(yīng)用可提高病毒檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,進(jìn)而提升血液篩查的安全性。

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