兒童急性呼吸道病毒感染986例抗原檢測(cè)及分析

朱 琳

(開(kāi)封市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 開(kāi)封 475000)

急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection，ARTI)是目前臨床最常見(jiàn)的傳染病類(lèi)型之一，全世界范圍內(nèi)發(fā)病率高居首位[1]。兒童是急性呼吸道感染的高發(fā)人群，對(duì)兒童的生命安全造成了嚴(yán)重的威脅，每年因該疾病死亡的兒童高達(dá)200萬(wàn)例，是導(dǎo)致5歲以下兒童死亡的第二大疾病[2]。兒童急性呼吸道感染主要是由于細(xì)菌意外的病原微生物導(dǎo)致的，其中病毒占比最高[3]。呼吸道病毒感染會(huì)受到多種因素的影響，例如國(guó)家、地區(qū)、省份、季節(jié)等，目前主要通過(guò)病原學(xué)檢測(cè)進(jìn)行診斷，是臨床治療的重要參考依據(jù)之一[4]。本次研究通過(guò)直接免疫熒光法(direct immunofluorescence assay，DFA)對(duì)本院2019年6月～2020年6月共986例急性呼吸道感染兒童進(jìn)行檢測(cè)，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料

將本院2019年6月～2020年6月確診為急性呼吸道感染的986例患兒作為研究對(duì)象，其中男605例，女381例，年齡0～14歲，平均年齡(6.64±2.45)歲。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)本收集

在患兒鼻咽部水平伸入植絨鼻咽拭子約5cm，緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)取樣，取樣完成后置入生理鹽水儲(chǔ)存管內(nèi)，進(jìn)行檢查。

1.2.2細(xì)胞涂片制備

于旋渦混勻器上輕微震蕩拭子儲(chǔ)存罐，將植絨拭子取出，經(jīng)2000r/min持續(xù)離心5min，去除上清液后留取150μl?；靹蚝笮纬苫鞚峒?xì)胞懸浮液，載玻片點(diǎn)樣，25μl/點(diǎn)，通過(guò)電吹風(fēng)吹12min左右，直至其干燥。再置入冷丙酮溶液中10min，取出后風(fēng)干。在試劑盒配套已點(diǎn)樣對(duì)照撥片、標(biāo)本玻片每個(gè)細(xì)胞點(diǎn)分別加入25μl熒光抗體，通過(guò)濕盒孵育15～30min，先用PBS清洗載玻片，再將其浸入PBS中清洗2遍，風(fēng)干后加封閉液，蓋玻片覆蓋。在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。呼吸道病毒抗原試劑盒來(lái)自于Diagnostic Hybrids Inc公司。

1.2.3判定標(biāo)準(zhǔn)

在對(duì)標(biāo)本檢測(cè)前應(yīng)先對(duì)照標(biāo)本，保證測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。在顯微鏡下放大200倍時(shí)，若視野內(nèi)至少出現(xiàn)2個(gè)蘋(píng)果綠熒光細(xì)胞，則為陽(yáng)性；若未發(fā)生抗原抗體特異性反應(yīng)，被伊文思藍(lán)負(fù)染成暗紅色的細(xì)胞，則為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過(guò)SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。若P<0.05，則對(duì)比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道病毒檢出情況

986例確診為急性呼吸道感染的兒童中，7種常見(jiàn)呼吸道病毒共檢出348例，檢出率35.29%，見(jiàn)表1。

表1 7種呼吸道感染病毒檢出情況

2.2 不同年齡兒童呼吸道病毒檢出情況

0～6月兒童病毒總陽(yáng)性率最高，隨著年齡的增長(zhǎng)，病毒陽(yáng)性率逐漸下降。0～6月陽(yáng)性率明顯高于6月～1歲、1～3歲及3歲以上，6月～1歲陽(yáng)性率明顯高于1～3歲及3歲以上，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但1～3歲與3歲以上陽(yáng)性率對(duì)比無(wú)明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同年齡兒童呼吸道病毒檢出情況[n(%)]

2.3 不同季度兒童呼吸道病毒檢出情況

第一季度病毒檢出率占比41.95%，第二季度病毒檢出率占比11.49%，第三季度病毒檢出率占比12.64%，第四季度病毒檢出率占比33.91%。第一季度、第四季度檢出率占比明顯高于第二季度、第三季度，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同季度兒童呼吸道病毒檢出情況[n(%)]

3 討論

病毒作為除細(xì)菌外最重要的病原體，造成的急性呼吸道感染極為常見(jiàn)，尤其對(duì)兒童、年老體弱者及免疫功能缺陷者危害重大。呼吸道病毒具有感染性強(qiáng)、傳播速度快的特點(diǎn)，多發(fā)于兒童，極易產(chǎn)生局部流行，若未得到及時(shí)有效的控制，甚至可能導(dǎo)致爆發(fā)性流行，目前已成為我國(guó)衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的重點(diǎn)監(jiān)督對(duì)象[5]。有大量研究報(bào)告提出，呼吸道病毒的病原學(xué)表達(dá)譜與構(gòu)成比受到多種因素的影響，例如地理位置、時(shí)間、季節(jié)、環(huán)境等，存在較大的區(qū)別。臨床中一般會(huì)根據(jù)患兒的年齡、臨床癥狀對(duì)病毒類(lèi)型進(jìn)行診斷，但由于多種呼吸道病毒所產(chǎn)生的臨床癥狀類(lèi)似，診斷難度較高，但治療方案卻明顯不同[6]。因此，尋找一種快速、簡(jiǎn)單、高特異性、高靈敏度的呼吸道病毒診斷方法至關(guān)重要。

從年齡分組中可以看出，0～6個(gè)月的嬰兒發(fā)病率明顯高于其他年齡組，提示臨床醫(yī)師嬰兒呼吸道病毒的感染率明顯較高，在面對(duì)這類(lèi)患兒時(shí)，可進(jìn)行早期呼吸道病原體篩查，盡早明確病毒類(lèi)型，制定針對(duì)性的治療方案[7～10]。從本次研究結(jié)果中還可以看出，呼吸道病毒感染呈現(xiàn)出明顯的季節(jié)性趨勢(shì)，春季和冬季流行性較強(qiáng)。總的來(lái)說(shuō)，急性呼吸道感染情況受年齡和季節(jié)的影響較大，并表現(xiàn)出各年齡段兒童的感染率不同。鑒于近年來(lái)RSV感染明顯增多，每個(gè)地區(qū)一年四季均可發(fā)病，常引起嚴(yán)重的呼吸道疾病，所以在臨床上不容忽視[11]。流感病毒感染發(fā)生高峰在北半球一般是從11月至來(lái)年4月，腺病毒出現(xiàn)在深冬到夏初，RSV通常是在冬天到早春，持續(xù)5個(gè)月流行，副流感病毒爆發(fā)會(huì)持續(xù)1年。

通過(guò)對(duì)呼吸道病毒的抗原檢測(cè)，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情的爆發(fā)流行趨勢(shì)，早期對(duì)患兒進(jìn)行呼吸道病毒抗原檢測(cè)，能夠盡早明確患兒所感染的病毒種類(lèi)，有利于控制病情發(fā)展，為臨床治療提供參考。直接免疫熒光法是檢測(cè)呼吸道病毒抗原的重要方法之一，具有快速、準(zhǔn)確、特異性高、靈敏度高等優(yōu)勢(shì)，但同時(shí)也存在一定的局限性。例如標(biāo)本采集質(zhì)量難以保證，可能發(fā)生漏檢，且檢測(cè)結(jié)果未經(jīng)核酸檢測(cè)核實(shí)，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況[12]。但和核酸檢測(cè)比，該方法的優(yōu)勢(shì)也較為明顯，對(duì)人員及設(shè)備的要求較低，成本不高，在基層可行性較高。早期診斷對(duì)使用抗病毒藥物治療、緩解流感癥狀、縮短病程、降低并發(fā)癥發(fā)生率、縮短排毒時(shí)間、降低病死率有積極作用，在流行期間，預(yù)防性使用抗病毒藥物可能降低患病率，節(jié)省患者開(kāi)支和醫(yī)院資源。

綜上所述，病毒感染是兒童急性呼吸道感染的主要病原，臨床通過(guò)直接免疫熒光法進(jìn)行檢測(cè)，能為診斷提供全面的參考，保證藥物治療的針對(duì)性與合理性，避免抗生素濫用的情況，具有較高的價(jià)值。