電針足三里對重度失血性休克大鼠肝臟損傷的影響△

陸化梅 于國軍 郭永娟 耿智隆

(1.河南省洛陽正骨醫(yī)院(河南省骨科醫(yī)院)麻醉科 洛陽 471000；2.解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第940醫(yī)院麻醉科(原蘭州軍區(qū)總醫(yī)院) 蘭州 730000)

研究表明[1～2]，穴位電針可以有效抑制腦、心等器官缺血再灌注后炎性細(xì)胞浸潤，調(diào)控炎性信號傳導(dǎo)通路，改善再灌注損傷，但尚無對失血性休克后肝損傷的影響。此項(xiàng)研究在重度HS大鼠模型的基礎(chǔ)上，探討電針刺激足三里療法應(yīng)用于HS與液體復(fù)蘇后肝臟的效果及可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

選用雄性成年健康SD大鼠，體重約280～310g，購于蘭州大學(xué)動物中心。所有動物適應(yīng)性飼養(yǎng)5d，溫度22℃～26℃，濕度40%～70%，自由進(jìn)食水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1重度失血性休克模型制備及穴位電刺激

采用改良wigger's法[3]復(fù)制失血性休克模型, 3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，經(jīng)右側(cè)股動脈放血，30min內(nèi)使MAP降低至35mmHg，通過放血或自體血回輸維持MAP 35±5mmHg水平60min，復(fù)制重度失血性休克模型。實(shí)驗(yàn)全程動物保持自主呼吸，肛溫控制在(37±0.5)℃。穴位定位參照《腧穴名稱與定位》[2]，采用0.3mm×25mm針灸針，刺入雙側(cè)足三里穴，進(jìn)針深度5mm，接電針儀，疏密波2/15Hz，強(qiáng)度0.1mA，30min。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方案及分組

隨機(jī)數(shù)字表法將60只大鼠(n=10)分為6組：對照組(C組)只麻醉，置管，不放血；休克組分為單純休克組(S)和休克復(fù)合穴位電針組(SEN)。重度失血性休克模型制備成功后，休克60min時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，取標(biāo)本保存。復(fù)蘇組分為乳酸林格液復(fù)蘇組(LR)、乳酸林格液復(fù)合穴位電針1組(LREN1)和乳酸林格液復(fù)合穴位電針2組(LREN2)。復(fù)蘇方案：各復(fù)蘇組于休克60min后行3倍失血量LR液復(fù)蘇處理，30min內(nèi)均速輸注。LREN1組液體復(fù)蘇同時(shí)以相同參數(shù)在相應(yīng)位置電刺激30min。LREN2組復(fù)制重度失血性休克模型同時(shí)相應(yīng)位置相同電針刺激維持30min。復(fù)蘇液輸注結(jié)束，生理鹽水6ml/kg·h持續(xù)輸注240min。

1.2.3指標(biāo)檢測

1.2.3.1靜脈血AST、ALT檢測

于未休克時(shí)(基礎(chǔ)值)、休克60min、復(fù)蘇后240min 這3個(gè)節(jié)點(diǎn)分別抽取1ml的股動脈血，同時(shí)等量血經(jīng)股靜脈回輸，測定AST、ALT。

1.2.3.2肝組織TNF-α、MIP-2蛋白含量及MPO活性測定

休克組在休克60min，其余各組在復(fù)蘇后240min，采用穿刺心臟法處死大鼠，取部分肝組織比色法測定MPO活性； ELISA法測定TNF-α與MIP-2。

1.2.3.3肝組織病理學(xué)觀察

休克組在休克60min，其余各組在復(fù)蘇后240min，處死大鼠，采集左葉肝組織(大小為0.1cm見方)，制作電鏡標(biāo)本，觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血內(nèi)AST、ALT的變化

與C組相比，在休克后60min、復(fù)蘇后240min這2個(gè)節(jié)點(diǎn)其余各組的血漿ALT、AST升高(P<0.05)；3個(gè)復(fù)蘇組在復(fù)蘇后240min血漿ALT、AST含量升高(P<0.05)；對比LR組，另2個(gè)復(fù)蘇組顯著偏低(P<0.05)；與LREN1組比較，LREN2組復(fù)蘇后240minAST、ALT降低(P<0.05)，見表1。

2.2 肝組織中TNF-α、MIP-2表達(dá)及MPO活性的變化

與休克各組比較，液體復(fù)蘇各組以上各指標(biāo)升高(P<0.05)；與LR組比較，LREN1及LREN2組TNF-α、NF-κB、MIP-2明顯降低，MPO活性降低(P<0.05)；與LREN1組比較，LREN2組以上各指標(biāo)明顯降低(P<0.05)，見表2。

表1 各組大鼠血漿AST、ALT含量變化

表2 各組TNF-α、MIP-2表達(dá)及MPO活性

2.3 肝組織病理學(xué)改變(圖1)

C組肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)正常；S組細(xì)胞膜和核膜變形，線粒體腫脹透亮化，嵴明顯疏松，毛細(xì)膽管膽汁淤積；SEN組，肝細(xì)胞線粒體腫脹輕度異常，毛細(xì)膽管正常； LR組，細(xì)胞染色質(zhì)邊集，局灶性肝細(xì)胞見溶解壞死現(xiàn)象，核膜消失，線粒體明顯腫脹； LREN1組，肝細(xì)胞核輕度變異，線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；LREN2組，肝血竇腔輕度增大，線粒體損傷較輕。

C組

S組

LR組

LREN1組

LREN2組

3 討論

本實(shí)驗(yàn)中，各組大鼠失血量、MAP基礎(chǔ)值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，失血性休克后MAP降低，液體復(fù)蘇后MAP上升，各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與休克各組比較，各復(fù)蘇組血漿AST、ALT含量明顯升高，肝組織TNF-α及MIP-2等細(xì)胞因子生成明顯增加，超微結(jié)構(gòu)顯示肝細(xì)胞膜及核膜變形，線粒體腫脹，嵴明顯疏松，空泡形成。雖然失血性休克導(dǎo)致了肝損傷，但復(fù)蘇后肝臟損傷加重，出現(xiàn)了再灌注損傷。3個(gè)復(fù)蘇組中，以LR組肝臟損傷最重，炎癥反應(yīng)最劇烈，超微結(jié)構(gòu)顯示線粒體高度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，局灶性肝細(xì)胞溶解壞死等。與LREN1組比較，LREN2組肝損傷明顯減輕，表明在出血性休克同時(shí)電刺激雙側(cè)足三里肝臟保護(hù)效果最好。

已有研究表明[4]在促腎上腺皮質(zhì)激素 (ACTH)和高張鹽水等措施逆轉(zhuǎn)失血性休克時(shí),膽堿能抗炎通路也發(fā)揮著必不可少的重要作用，抑制TNF-α等炎癥因子的生成。電針刺激足三里可對迷走神經(jīng)膽堿能纖維施以有效刺激，使膽堿能抗炎途徑活化。MIP-2屬于一類趨化因子，其特定靶細(xì)胞為中性粒細(xì)胞，可評估炎癥活動情況[5]。本研究顯示，失血性休克的同時(shí)電針刺激雙側(cè)足三里，能夠抑制復(fù)蘇后TNF-α、中性粒細(xì)胞趨化因子MIP-2的生成，阻止其之間的相互作用，減少中性粒細(xì)胞在肝組織中聚集，進(jìn)而抑制肝組織炎癥反應(yīng)起到保護(hù)作用，其機(jī)制或許是通過激活膽堿能抗炎通路實(shí)現(xiàn)的。