阿弗他潰瘍患者鋅水平與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系研究

陳曉濤 王紫瑩 庫爾班·吾甫爾 張 淼

復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍(recurrent aphthous ulcer，RAU)是一種常見的口腔黏膜疾病，2017年數(shù)據(jù)顯示，我國復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍發(fā)生率為27.17%[1]。臨床呈典型“紅、黃、凹、痛”表現(xiàn)，因進(jìn)食、口腔衛(wèi)生下降而影響患者生活質(zhì)量。RAU發(fā)病與微量元素缺乏有關(guān)。鋅是人體不可缺少的微量元素之一。鋅通過抑制T細(xì)胞在口腔黏膜積累、阻止Ⅳ型膠原蛋白裂解，加快傷口愈合，在維持上皮、黏膜基底完整中發(fā)揮重要防御作用[2～4]。鋅與機(jī)體免疫系統(tǒng)功能也密切相關(guān)，其通過促使前T細(xì)胞凋亡、胸腺素活性降低，致成熟T細(xì)胞數(shù)量下降；鋅上調(diào)叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3)、鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子-10(KLF-10)表達(dá)，下調(diào)干擾調(diào)節(jié)因子-1(IRF-1)表達(dá)，誘導(dǎo)CD4+、CD25+、Foxp3+數(shù)量的增加及穩(wěn)定，增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能，對免疫細(xì)胞造成影響[5～7]。在RAU發(fā)病過程中鋅與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系尚不明確。本研究旨在分析RAU患者血清鋅水平與T淋巴細(xì)胞亞群之間的相關(guān)性。

資料與方法

1.一般資料：收集2016年1月～2020年2月在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院口腔科診斷為復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍患者115例。其中男性38例，女性77例，患者年齡20～79歲，平均年齡為44.9±15.0歲。另選同期60例口腔黏膜正常者作為對照組，其中男性18例，女性42例，患者年齡20～85歲，平均年齡為48.8±15.6歲。兩組年齡及性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。該研究經(jīng)筆者醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會通過，兩組人員知情同意并簽署知情同意書。

2.納入標(biāo)準(zhǔn)：參照《復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍診療指南(試行)》相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)：①反復(fù)發(fā)作、病程10～14天、可自愈；②潰瘍周圍紅暈，上覆假膜，病損處中央凹陷，疼痛，數(shù)目≤10，直徑5～10mm，邊緣整齊；③對照組選擇同期于筆者醫(yī)院進(jìn)行檢查的健康者，排除RAU史[8]。

3.排除標(biāo)準(zhǔn)： ①具有全身系統(tǒng)性疾病，如心臟病、肝腎功能不全、免疫性系統(tǒng)疾病、精神疾病者；②近1個月服用過抗生素、糖皮質(zhì)類激素類藥物。

4.樣本收集及檢測：受試對象血清鋅檢測：清晨空腹抽取靜脈血5ml，采用日本日立LST008AS全自動生化分析儀，進(jìn)行比色法檢測鋅含量。T淋巴細(xì)胞亞群檢測：清晨空腹抽取靜脈血2ml，EDTA 抗凝，免疫熒光染色、固定，不超過6h，標(biāo)記后細(xì)胞上機(jī)不超過72h。T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+及CD8+細(xì)胞的檢測均采用美國BD公司的多色流式細(xì)胞儀FACS Calibur，所用抗體及試劑均購自同一廠家并嚴(yán)格按照說明操作。

結(jié) 果

1.兩組血清鋅及T淋巴細(xì)胞亞群水平比較：觀察組中男性及女性患者的血清鋅水平均明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組中男性血清鋅水平均高于女性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。RAU患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+數(shù)量均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CD4+/CD8+比值兩組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表1 RAU患者與口腔黏膜健康組血清鋅表達(dá)水平比較

表2 RAU患者與口腔黏膜健康組T淋巴細(xì)胞亞群比較個/微升)

2.RAU患者與健康者各相關(guān)指標(biāo)共線性分析：各項(xiàng)指標(biāo)中CD3+方差膨脹系數(shù)(VIF)≥10，具有共線性予以排除，其余各指標(biāo)VIF<10，予以納入，詳見表3。

表3 RAU患者與健康者相關(guān)指標(biāo)共線性分析

3.年齡、性別、血清鋅水平、CD4+、CD8+數(shù)量與RAU關(guān)系的Logistic回歸分析結(jié)果：通過單因素分析發(fā)現(xiàn)，觀察組中血清鋅、CD4+、CD8+水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步將各指標(biāo)、年齡、性別作為自變量，是否診斷為RAU患者作為因變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示年齡、血清鋅和CD4+是RAU發(fā)病的獨(dú)立危險因素(P<0.05)，其余指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,詳見表4。

表4 RAU患者年齡、性別、血清鋅、CD4+、CD8+Logistic回歸分析

討 論

復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍又稱復(fù)發(fā)性口腔潰瘍，臨床上可分為輕型、重型(腺周口瘡)及皰疹型。其中輕型阿弗他潰瘍所占比例可高達(dá)到75%～85%，主要表現(xiàn)為數(shù)目<10個，直徑5～10mm，病程10～14天為主[9]。RAU患者其發(fā)病主要由各種局部及系統(tǒng)性因素共同作用，目前對RAU的病因尚未得到全面了解。

除已證實(shí)的免疫因素外，微量元素缺乏也是導(dǎo)致RAU發(fā)病的原因之一[10]。鋅在細(xì)胞免疫功能中的作用至關(guān)重要，它是超過3000種人類蛋白質(zhì)的輔助因子，至少300種酶、1000個轉(zhuǎn)錄因子需要鋅才能發(fā)揮其作用。鋅不僅調(diào)節(jié)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫力，還可抗氧化、抗炎、抗病毒活性，鋅缺乏與人類疾病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[11]。Bao等[3]研究表明在口腔黏膜類疾病中，患者總?cè)变\率為19.0%，其中口腔潰瘍患者的缺鋅率可達(dá)21.2%。調(diào)查顯示在胃潰瘍、十二指腸球部潰瘍患者中男性占72.2%、81.7%,明顯高于女性的27.8%、18.3%，猜測是否由于不同性別患者體內(nèi)鋅元素水平不同所致潰瘍發(fā)生率不同；但在本研究中潰瘍組及口腔黏膜健康組男性血清鋅水平均高于女性，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[12]。

鋅可以維持基膜完整，具有有效的抗?jié)冏饔肹2，3]。在胃潰瘍大鼠模型中，鋅可發(fā)揮降低氧化應(yīng)激、減輕炎癥的作用，從而促進(jìn)胃黏膜潰瘍愈合；鋅制劑的補(bǔ)充對糖尿病足潰瘍傷口愈合和代謝狀態(tài)也有明顯改善[13,14]。Mehdipour等[4]在治療潰瘍性口炎時發(fā)現(xiàn)，在傷口愈合過程中使用含鋅漱口水與口腔潰瘍的傳統(tǒng)治療方式一樣有效。另有研究證實(shí)，使用鋅制劑治療RAU可得到良好的愈合，提示鋅的缺乏可能與RAU發(fā)病有關(guān)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，RAU患者體內(nèi)血清鋅水平明顯低于健康人群，這與國內(nèi)外大多數(shù)研究結(jié)果一致，支持RAU的發(fā)病與鋅缺乏密切相關(guān)[16，17]。

鋅元素輕度或中度缺乏可削弱免疫力，延緩傷口愈合，引起炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生并增加氧化應(yīng)激。缺乏鋅的癥狀包括感染、性腺功能減退、皮膚炎和傷口愈合延遲等。免疫細(xì)胞對缺鋅的反應(yīng)更加敏感，鋅的缺乏可至胸腺萎縮、淋巴細(xì)胞減少，尤其是CD4+T輔助細(xì)胞數(shù)量減少，導(dǎo)致CD4+/CD8+比率降低[5]。本研究通過比較兩組T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)現(xiàn)，RAU患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+水平均低于健康人群，說明RAU的發(fā)病與細(xì)胞免疫降低相關(guān)。排除共線性，進(jìn)行Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),年齡、鋅元素和CD4+可作為RAU發(fā)病的獨(dú)立危險因素,與以往研究結(jié)果顯示外周血中CD3+、CD4+、CD8+是RAU的獨(dú)立危險因素不一致[18]。分析原因可能與本研究所選觀察對象多為輕型RAU、病例典型性不夠、樣本量相對較少有關(guān)。

動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果缺鋅大鼠模型中，脾臟細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CD3+、CD8+數(shù)量顯著降低，而輔助性T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為鋅缺乏導(dǎo)致細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CD3+、CD8+減少，但對輔助性T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+影響不顯著[19]。Iovino等[20]研究發(fā)現(xiàn)，臨床患者口服大劑量鋅補(bǔ)充劑可使幼稚淋巴細(xì)胞CD4+顯著增加，從而利于造血干細(xì)胞移植后的免疫重建，多項(xiàng)研究結(jié)果提示機(jī)體免疫的復(fù)雜性。細(xì)胞免疫用于維持機(jī)體的正常功能，當(dāng)其功能發(fā)生紊亂時，可導(dǎo)致感染或自身免疫性疾病的發(fā)生。有研究表明，鋅缺乏與機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)，但鋅水平的升高或降低是否能引起CD3+、CD8+、CD4+/CD8+的改變尚缺乏大樣本可靠的臨床證據(jù)[21]。

綜上所述，本研究顯示RAU患者的血清鋅、CD3+、CD4+、CD8+水平顯著低于健康者，且年齡、血清鋅及CD4+可作為RAU的獨(dú)立危險因素。故檢測血清鋅水平及CD4+數(shù)量可在臨床中作為RAU的診斷參考；提示通過補(bǔ)充鋅元素輔助RAU治療。RAU的發(fā)病與細(xì)胞免疫降低、鋅缺乏有關(guān)。后期尚需擴(kuò)大樣本量，選擇不同類型病例做進(jìn)一步研究。