奶牛布魯氏菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷和防控路徑

吳旭峰

（內(nèi)蒙古烏蘭察布市化德縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 013350)

布魯氏菌病（以下簡(jiǎn)稱布病）是一種常見(jiàn)的畜禽類疾病，尤其在家豬、牛羊飼養(yǎng)過(guò)程中極易發(fā)生，主要傳染源都是攜帶病菌的家畜或者患病的畜禽。這種病菌可以借助畜禽的排泄物、乳汁等途徑傳播和感染。尤其是病母?；疾『笕菀壮霈F(xiàn)流產(chǎn)癥狀，在流產(chǎn)或分娩的過(guò)程中，布病可以借助胎衣或者子宮分泌物進(jìn)行傳染，從而形成新的傳染源。除此之外，布病也可以通過(guò)消化道進(jìn)行傳播，因此，一旦飼養(yǎng)用的工具、飼料或者水源被污染后，基本能導(dǎo)致該病的大規(guī)模暴發(fā)。另外，此病還能通過(guò)血液進(jìn)行傳播，因此，吸血昆蟲(chóng)和皮膚破損也成為疾病傳播的途徑之一。布魯氏菌病多見(jiàn)于奶牛牛犢，且發(fā)病速度快、病情較為嚴(yán)重，極易死亡。

1 臨床癥狀

一般情況下，奶牛妊娠6～8 月，是布魯氏菌病的高發(fā)期。在感染病癥后，病牛大多會(huì)出現(xiàn)子宮炎癥，并且出現(xiàn)分娩預(yù)兆現(xiàn)象，同時(shí)病牛大多臥立不安，并且伴有明顯的食欲缺乏癥狀，存在乳房腫大或者外陰腫大的癥狀。對(duì)病牛進(jìn)行檢查后發(fā)現(xiàn)，病牛的陰道黏膜存在小結(jié)節(jié)，呈現(xiàn)紅色粟粒狀，并且會(huì)產(chǎn)生灰白色的分泌物[1]。病牛流產(chǎn)后，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)伴有膿樣的渾濁胎水，甚至?xí)嬖谔ヒ聹舻默F(xiàn)象，尤其以妊娠晚期的病牛最為突出。病牛在流產(chǎn)后，還會(huì)在2 周時(shí)間內(nèi)繼續(xù)排出棕紅色的分泌物，且分泌物伴隨惡臭。

對(duì)于妊娠早期的奶牛，流產(chǎn)的牛犢一般已經(jīng)死亡；而一些妊娠晚期的奶牛，雖然能夠順利生下成活的幼崽，但是這些牛犢的身體狀況較差，無(wú)法順利存活，在一段時(shí)間后也會(huì)逐漸死亡。很多奶牛在患病后導(dǎo)致第一次流產(chǎn)，但隨之病癥會(huì)逐漸消失，這代表此病一定的治愈性。在進(jìn)行奶牛飼養(yǎng)過(guò)程中，雖然不少奶牛并沒(méi)有患病，但是同樣攜帶病菌，雖然沒(méi)有明顯的臨床癥狀，但是攜帶的病菌也增加了傳染的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)布魯氏菌病的防控工作增加了難度。公畜的布魯氏菌病臨床病癥主要包括睪丸炎和附睪炎，患病后會(huì)出現(xiàn)睪丸疼痛、腫脹的情況，甚至?xí)袎乃赖目赡?，?yán)重影響公牛配種[2]。

2 病理變化

布魯氏菌病的特征性病變是胎膜水腫，嚴(yán)重的病牛甚至?xí)霈F(xiàn)充血水腫的現(xiàn)象，并且存在出血點(diǎn)，導(dǎo)致子宮黏膜炎癥。在病癥早期表現(xiàn)為卡他性，隨后會(huì)出現(xiàn)膿腫、化膿等癥狀，并且伴有嚴(yán)重的子宮黏膜充血現(xiàn)象，導(dǎo)致子宮內(nèi)出現(xiàn)較多的絨毛膜壞死物，引發(fā)胎膜水腫，同時(shí)伴有黃色的浸潤(rùn)現(xiàn)象，并且可能導(dǎo)致淋巴結(jié)腫大癥狀，還可能帶來(lái)肝脾等臟器的損傷[3]。同時(shí)，病牛體內(nèi)可能存在壞死灶，也可能產(chǎn)生肺炎病灶。除此之外，病母牛還可能產(chǎn)生輸卵管炎、乳房炎、卵巢炎等疾病。公畜患病后，也可能導(dǎo)致精囊出血的現(xiàn)象，也極有可能導(dǎo)致體內(nèi)出現(xiàn)壞死病灶，引發(fā)睪丸或附睪存在腫大現(xiàn)象，出現(xiàn)膿性病灶，導(dǎo)致陰莖紅腫癥狀等。

布魯氏菌共有三種抗原分別為M、A、G，牛種Ⅰ型含M抗原與A 抗原之比為1：20。布魯氏菌具有較強(qiáng)的抵抗能力，存活時(shí)間也各不相同，在胎衣中存活時(shí)間可達(dá)4 個(gè)月，在干燥的胎衣中存活時(shí)間約為4～9d，在牛乳中存活時(shí)間約為20～60d，在塵埃中存活時(shí)間約為15～40d，在皮毛、土壤和水中存活時(shí)間可達(dá)數(shù)月；布魯氏菌對(duì)熱敏感，在80℃的溫度中存活時(shí)間約為7～19min，在100℃的溫度中存活時(shí)間約為1～4min；布魯氏菌對(duì)低溫的抵抗性較強(qiáng)；布魯氏菌較為敏感的消毒藥物主要包括：3%漂白粉、3%苯酚、3%來(lái)蘇水、2%苛性鈉、1%甲醛等。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌學(xué)診斷

在實(shí)驗(yàn)室診斷中，分離布魯氏桿菌是最準(zhǔn)確和可靠的方法之一。工作人員應(yīng)采取病牛的胎衣、乳汁、尿液、陰道分泌物、血液、膿汁等組織，制成檢測(cè)涂片，并采用沙黃亞甲藍(lán)鑒別染色法對(duì)涂片進(jìn)行染色，采用油鏡對(duì)涂片進(jìn)行檢測(cè)，在觀察視野中，可以清晰地看到布魯氏桿菌呈現(xiàn)紅色，而其他細(xì)菌則呈現(xiàn)藍(lán)色。

3.2 血清學(xué)診斷

隨著血清學(xué)診斷的快速發(fā)展，檢驗(yàn)布魯氏菌病的血清學(xué)方法有很多，例如試管凝集反應(yīng)、平板凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、虎紅平板凝集反應(yīng)等等。當(dāng)奶牛感染布魯氏菌病后，通過(guò)凝集反應(yīng)，血液中會(huì)存在凝集素，大約在患病后一周之內(nèi)出現(xiàn)，并且凝集滴度會(huì)逐漸增高，凝集素的存在時(shí)間可達(dá)兩年或者更久。對(duì)于一次感染布魯氏菌病的牛進(jìn)行采血工作，并通過(guò)虎紅平板血清凝集測(cè)試等方法進(jìn)行檢驗(yàn)，如果牛試管凝集價(jià)達(dá)到1 : 100（++）則代表陽(yáng)性，如果凝集價(jià)為1 : 50（++），則代表疑似。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)具有較強(qiáng)的特異性和敏感性，在奶牛布魯氏菌病的檢驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用。對(duì)于剛剛感染病菌的牛而言，補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的檢測(cè)效果可能會(huì)比凝結(jié)反應(yīng)更快，而對(duì)于一些病癥表現(xiàn)較為緩慢的陽(yáng)性牛而言，即便血清凝集反應(yīng)的結(jié)果呈現(xiàn)疑似甚至陰性，補(bǔ)體結(jié)合的檢測(cè)結(jié)果仍然為陽(yáng)性。因此，補(bǔ)體結(jié)合檢測(cè)方法能夠極大地提高奶牛布魯氏菌病臨床檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 防控措施

4.1 加強(qiáng)檢疫，凈化牛群

為了進(jìn)一步有效控制奶牛布魯氏菌病的傳播，在省內(nèi)應(yīng)該提倡自繁自養(yǎng)，盡可能減少?gòu)耐獾刭?gòu)買奶牛的頻率。當(dāng)購(gòu)入新的奶牛或家畜后，應(yīng)該采用隔離觀察的方法，并對(duì)新家畜進(jìn)行布魯氏桿菌檢疫，一個(gè)月后如果家畜沒(méi)有明顯的病癥且檢疫結(jié)果為陰性，才可以混入畜群進(jìn)行飼養(yǎng)。每年需要對(duì)配種公畜進(jìn)行檢疫，確保公畜身體健康后才能進(jìn)行配種。同時(shí)要做好整個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的檢疫防控工作，當(dāng)場(chǎng)內(nèi)出現(xiàn)感染病畜后，應(yīng)該立即對(duì)其進(jìn)行撲殺，做好凈化工作，并且對(duì)于病牛的流產(chǎn)胎兒、分泌物和排泄物也應(yīng)盡快做好凈化處理。同時(shí)需要注意對(duì)病牛的牛床和食槽進(jìn)行嚴(yán)格的消毒工作，采用10%石灰乳、10%漂白粉、2%燒堿進(jìn)行消毒，每年對(duì)牛床和食槽進(jìn)行1 次消毒，牛舍和飼養(yǎng)工具每天進(jìn)行1 次消毒，運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地每天進(jìn)行1 次消毒并持續(xù)3～5d，并將病牛接觸過(guò)的墊料和飼料進(jìn)行無(wú)害化處理，以減少交叉感染的可能。

4.2 定期注射疫苗

目前我國(guó)市場(chǎng)上針對(duì)布魯氏菌病的家畜疫苗分為三種，分別是牛19 號(hào)疫苗、羊5 號(hào)疫苗和豬2 號(hào)疫苗。這三種疫苗對(duì)布魯氏菌病的防控都有很好的效果。牛19 號(hào)弱毒菌疫苗采用皮下注射的方式注射5mL，接種反應(yīng)較小，且保護(hù)期可達(dá)八年之久，但需要注意不能對(duì)妊娠期的奶牛注射。羊5 號(hào)疫苗可以在每年母牛配種前的2 個(gè)月時(shí)間內(nèi)進(jìn)行注射250 億活菌，室內(nèi)氣霧應(yīng)含250 億活菌，室外氣霧應(yīng)含400 億活菌，免疫期約為1 年左右，且具有很好的免疫效果，副作用也較少。豬2 號(hào)疫苗可以實(shí)現(xiàn)口服免疫，劑量為500 億活菌，對(duì)于妊娠期的母牛是很好的防疫選擇，除此之外如果采用其他方法對(duì)妊娠期母牛進(jìn)行免疫，都極有可能導(dǎo)致母牛流產(chǎn)。除此之外，還可以選擇亞單位苗進(jìn)行疫苗接種，主要包括OMP 類、LPS 類和CW 類、核糖體類，目前針對(duì)活載體苗、抗獨(dú)特性苗、基因工程苗也在研究之中，并積極推動(dòng)布魯氏菌DNA 免疫苗的研究。

4.3 培育健康犢牛

奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)要建立獨(dú)立的犢牛培育舍，并且要與母牛養(yǎng)殖劃分開(kāi)來(lái)。安排專業(yè)人員對(duì)牛犢進(jìn)行飼養(yǎng)管理，使用固定的飼養(yǎng)工具。在犢牛出生后，應(yīng)該采用3%～5%來(lái)蘇爾溶液對(duì)犢牛進(jìn)行全身消毒，消毒完成后才可放入培育舍內(nèi)。犢牛出生后應(yīng)該采用健康牛的初乳進(jìn)行喂養(yǎng)，同時(shí)要做好牛犢培育舍環(huán)境的消毒工作，工作人員在進(jìn)出前后都要進(jìn)行完備的消毒。在牛犢出生20d、120d 和6 個(gè)月時(shí)進(jìn)行布魯氏菌病的檢疫工作，一旦發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性牛應(yīng)及時(shí)進(jìn)行處理，并完成相應(yīng)的消毒凈化工作。

5 養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員做好防護(hù)

在奶牛飼養(yǎng)過(guò)程中，養(yǎng)殖場(chǎng)的工作人員應(yīng)做好平日的自我防護(hù)工作，堅(jiān)持安全生產(chǎn)的原則，把安全、衛(wèi)生放在首位，在日常工作中要時(shí)刻把無(wú)菌工作的意識(shí)貫徹到每一個(gè)環(huán)節(jié)中，嚴(yán)格按照程序進(jìn)行工具、飼料和場(chǎng)地的消毒工作，同時(shí)要檢驗(yàn)消毒工作的完成情況，確保消毒完善、徹底、嚴(yán)格，不能留下病毒傳播的隱患。飼養(yǎng)人員在進(jìn)入牛場(chǎng)進(jìn)行日常工作前，需要做好防疫措施，嚴(yán)格穿好防護(hù)服和防護(hù)手套，戴好口罩和頭部的防護(hù)工具。工作人員在處理牛場(chǎng)的病牛及其排泄物、飼料等物品時(shí)，要小心謹(jǐn)慎地按照流程規(guī)定進(jìn)行操作，避免操作失誤沾染病菌帶來(lái)疫病風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)注意處理的密封性，避免造成病菌的傳播。在完成牛場(chǎng)工作后，工作人員應(yīng)該及時(shí)將防護(hù)工具更換下來(lái)，并統(tǒng)一進(jìn)行處理，絕對(duì)不能存有僥幸心理，不能不做任何防護(hù)措施就進(jìn)入存在疫情風(fēng)險(xiǎn)的牛場(chǎng)進(jìn)行工作，并及時(shí)洗澡清理身體，做好消毒保護(hù)工作。工作人員每年也要按照規(guī)定定期去醫(yī)院進(jìn)行體檢，檢查自己的身體狀況，確保自己處于健康狀態(tài)，便于及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情傳染的風(fēng)險(xiǎn)，為布魯氏菌病的防控工作提供有效信息。

6 小結(jié)

奶牛布魯氏菌病作為奶牛飼養(yǎng)的常見(jiàn)病癥，飼養(yǎng)人員應(yīng)積極做好消毒和預(yù)防工作，對(duì)病牛及時(shí)撲殺，避免病菌傳染。飼養(yǎng)人員還應(yīng)加強(qiáng)對(duì)奶牛的檢疫防控工作，從源頭上杜絕病菌傳染的可能性，為人民群眾提供健康的畜牧產(chǎn)品。