電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定NT-proBNP的效果及價(jià)值

王 靜

遼寧省鞍山市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧鞍山 114001

N-末端腦利鈉肽（NT-proBNP）用于急性冠狀動(dòng)脈綜合征分級(jí)、心衰治療和預(yù)后監(jiān)測(cè)、心源性呼吸困難、心衰疾病診斷、早期心功能不全等診斷中能夠提供準(zhǔn)確、快速的診斷依據(jù)[1]。NT-proBNP 指標(biāo)主要是通過(guò)心室肌合成且分泌而來(lái)，一旦出現(xiàn)心功能不全的癥狀，則會(huì)明顯升高血漿水平。越來(lái)越多的研究學(xué)者指出，NT-proBNP 在鑒別、診斷心功能不全患者的生化指標(biāo)中有一定的敏感性，且在心臟功能評(píng)價(jià)方面的價(jià)值也較為明顯[2]。目前，我國(guó)臨床在NT-proBNP 檢測(cè)中主要是通過(guò)電化學(xué)發(fā)光法來(lái)完成，應(yīng)該綜合分析以及評(píng)價(jià)其檢測(cè)性能以及評(píng)估價(jià)值，以便為臨床制定治療計(jì)劃奠定良好的基礎(chǔ)。本研究選取于鞍山市中心醫(yī)院開(kāi)展NT-proBNP 測(cè)定的86例心血管疾病患者作為研究對(duì)象，探析NT-proBNP分別采取電化學(xué)發(fā)光法、快速測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定的效果以及評(píng)估價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月～2019年12月于鞍山市中心醫(yī)院開(kāi)展NT-proBNP 測(cè)定的86例心血管疾病患者作為研究對(duì)象，其中男46例，女40例；年齡42～80歲，平均（68.65±5.12）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均需要開(kāi)展NT-proBNP 檢測(cè)；②患者符合與美國(guó)紐約心臟病學(xué)會(huì)（NYHA）分級(jí)方案區(qū)分心臟功能的標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有內(nèi)分泌疾病者；②患有腎疾病者；③患有肺疾病者；④患有黃疸者；⑤患有脂血者；⑥溶血者。本研究經(jīng)鞍山市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 在清晨空腹的狀態(tài)下采集10 mL 血液，采集符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的靜脈血標(biāo)本之后按照3000 r/min 的速度進(jìn)行15 min 的離心處理。

1.2.2 試劑選擇 選擇深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司制造的血清NT-proBNP 試劑[供應(yīng)商：基蛋生物科技股份有限公司；注冊(cè)證號(hào)：蘇食藥械（準(zhǔn)）字2014 第2400851號(hào)；國(guó)食藥監(jiān)械注冊(cè)號(hào)：蘇食藥械生產(chǎn)許20050035號(hào)]，根據(jù)試劑說(shuō)明書完成全自動(dòng)檢測(cè)以及定標(biāo)。

1.2.3 檢測(cè)方法 ①電化學(xué)發(fā)光法：選擇邁格魯米-Maglumi1000型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀開(kāi)展檢測(cè)。通過(guò)NT-proBNP 一株單克隆抗體作為ABEI 標(biāo)記之后，選擇另外一株單克隆抗體對(duì)磁性微球作包被處理，混勻單克隆抗體之后變成免疫復(fù)合物，同時(shí)添加磁場(chǎng)使其沉淀，將上清液去掉。通過(guò)洗滌液對(duì)沉淀物進(jìn)行3次洗滌之后，將發(fā)光底物A、發(fā)光底物B 自動(dòng)添加到儀器內(nèi)，進(jìn)行為期3 s 的自動(dòng)檢測(cè)，隨后將光強(qiáng)度發(fā)出，對(duì)NT-proBNP的含量給予計(jì)算。②快速法：采取普朗N-端腦利鈉肽前體檢測(cè)試劑卡完成，同時(shí)有配套的FIA8000 系列免疫定量分析儀，選擇高濃度混合血清作為NT-proBNP的陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4 試驗(yàn)方法 ①準(zhǔn)確度試驗(yàn)：選擇高濃度的樣本給予倍比稀釋之后開(kāi)展10次平行檢測(cè)，通過(guò)分析期望濃度以及實(shí)測(cè)濃度，計(jì)算檢測(cè)方法的稀釋回收率。②精密度試驗(yàn)：選擇NT-proBNP 低水平、高水平含量標(biāo)本，分別為330.13、588.42 pg/mL，給予20次的平行測(cè)定，計(jì)算平均變異系數(shù)。③靈敏度試驗(yàn)：選擇領(lǐng)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行20次的平行測(cè)定，計(jì)算2倍的平均偏差。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

快速檢測(cè)法：NT-proBNP的陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為數(shù)值>300 pg/mL。電化學(xué)發(fā)光法：根據(jù)試劑盒設(shè)定的臨界值，根據(jù)不同的年齡段進(jìn)行陽(yáng)性的判斷：≥75歲患者在NT-proBNP>610 pg/mL 的情況下為陽(yáng)性；65～74歲患者在NT-proBNP>325 pg/mL 的情況下為陽(yáng)性；55～64歲患者在NT-proBNP>225 pg/mL 的情況下為陽(yáng)性；45～54歲患者在NT-proBNP>123 pg/mL 的情況下為陽(yáng)性；18～44歲患者在NT-proBNP>96.5 pg/mL的情況下為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

電化學(xué)發(fā)光法的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度（95.51%、97.67%、98.84%）均高于快速檢測(cè)法（88.37%、89.53%、87.21%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

表1 比較兩種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度、精密度以及靈敏度[n（%）]

3 討論

心血管疾病對(duì)患者的心臟或者心室舒張功能有著一定的影響，作為臨床綜合征中常見(jiàn)的一種疾病，對(duì)患者的生存質(zhì)量會(huì)產(chǎn)生一定的影響，及時(shí)確診疾病對(duì)改善患者的治療預(yù)后有著積極的作用[3]。1988年，日本學(xué)者第一次在豬腦中分離出一種多肽類物質(zhì)，能夠發(fā)揮著擴(kuò)張血管、排鈉、利尿等效果，將此作為腦鈉肽（BNP）物質(zhì)命名，緊接著在肺部、心臟、脊髓等組織中也明確了該物質(zhì)，而心臟中該物質(zhì)有著較高的水平。目前，可在脊髓動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)腎型肽尿擴(kuò)張素、V型利鈉肽（VNP）、D型利鈉肽（DNP）、C型利鈉肽（CNP）、BNP、心鈉素（心房利鈉肽，ANP）等物質(zhì)，與NPR-C、NPR-B、NPR-A 等受體互相對(duì)應(yīng)[4]。NPR-B、NPR-A的作用是通過(guò)結(jié)合利鈉肽物質(zhì)之后會(huì)出現(xiàn)抑制腎素血管緊張素、排鈉、擴(kuò)張血管、利尿等生物學(xué)效應(yīng)，NPR-C 的作用能促使利鈉肽分子得到有效清除。一旦心室容量負(fù)荷持續(xù)增加或者心室壁壓力逐漸增加，會(huì)導(dǎo)致心室心肌細(xì)胞BNP的表達(dá)受到快速誘導(dǎo)，生成134個(gè)氨基酸的前BNP 原，經(jīng)過(guò)酶將一個(gè)26-氨基酸信號(hào)肽全面切除之后，變成1800AA 的BNP 原（proBNP）[5]。proBNP 在血液內(nèi)釋放過(guò)后會(huì)受到內(nèi)肽酶裂分解，變成32個(gè)氨基酸組成的BNP 以及76個(gè)氨基酸組成的NT-proBNP 物質(zhì)。NT-proBNP 缺乏生物活性，而B(niǎo)NP 主要是通過(guò)一個(gè)和二流半胱氨基酸連接的特異性17-氨基酸環(huán)構(gòu)成，產(chǎn)生生物學(xué)活性[6]。NT-proBNP 屬于非活性的氨基酸片段，目前對(duì)于其生物學(xué)功能尚未明確。室壁張力以及左室牽張均能有效調(diào)節(jié)NT-proBNP的釋放，而健康人體中BNP 以及NT-proBNP 等摩爾分泌有著基本相同的血漿濃度，一旦機(jī)體出現(xiàn)心力衰竭癥狀，NT-proBNP 濃度上升速度較快，和BUP 相比至少多2～10倍[7]。

歐洲心臟病協(xié)會(huì)建議在對(duì)心血管疾病評(píng)價(jià)時(shí)利用BNP 作為主要的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，但是BNP的生物半衰期只有20 min，所以BNP 在離開(kāi)機(jī)體之后處于較不穩(wěn)定的狀態(tài)，但NT-proBNP的生物半衰期可維持在60～120 min，所以對(duì)NT-proBNP水平進(jìn)行檢測(cè)的診斷意義較好[8]。大部分研究學(xué)者均指出，對(duì)于風(fēng)濕性心臟病開(kāi)展換瓣手術(shù)、既往心梗、高血壓、遺傳性心臟病、糖尿病等高危人群的篩查工作中能夠獲得指導(dǎo)的效果，需要對(duì)NT-proBNP 數(shù)值進(jìn)行定期檢測(cè)，對(duì)心臟功能狀況進(jìn)行全面了解[9-11]。

臨床上及時(shí)對(duì)NT-proBNP水平進(jìn)行測(cè)定，能夠早期確診疾病，為疾病的治療提供良好的依據(jù)，同時(shí)為判斷危險(xiǎn)分層以及治療預(yù)后奠定良好的基礎(chǔ)。NT-proBNP不但和患者的存活率有一定的關(guān)系，和體力活動(dòng)受限情況的相關(guān)性較為明顯，而且能夠恢復(fù)循環(huán)穩(wěn)定能力以及對(duì)機(jī)體代償病理生理的變化進(jìn)行反應(yīng)[12]。但血漿中BUP 物質(zhì)具有較短的半衰期，僅能開(kāi)展床旁快速檢測(cè)干預(yù)，而NT-proBNP水平具有較長(zhǎng)的半衰期，有著較為穩(wěn)定的生理活性，能夠在-20℃的情況下長(zhǎng)時(shí)間的保存血漿，適合在臨床批量測(cè)定中使用。有學(xué)者指出，相對(duì)于BNP 來(lái)說(shuō)，心功能受損的情況下NT-proBNP水平會(huì)出現(xiàn)明顯增高，在早期心功能損害標(biāo)志物發(fā)揮的意義較大，有著極大的敏感性[13-14]。目前，常見(jiàn)通過(guò)電化學(xué)發(fā)光法、快速免疫熒光法對(duì)NT-proBNP水平進(jìn)行檢測(cè)。電化學(xué)發(fā)光法能夠在18 min 內(nèi)獲得檢測(cè)NTproBNP的結(jié)果，測(cè)試范圍在5～35 000 ng/L，選擇NTproBNP 測(cè)定的試劑盒，通過(guò)兩種多克隆抗體進(jìn)行干預(yù)之后，通過(guò)電化學(xué)發(fā)光技術(shù)、夾心法免疫分析對(duì)樣本中NT-proBNP 濃度進(jìn)行測(cè)定，屬于全自動(dòng)分析方法[15]。快速免疫熒光法可在15 min 內(nèi)獲取結(jié)果，常用于床旁即時(shí)檢測(cè)工作中，測(cè)試區(qū)域在5～5000 ng/L。本研究結(jié)果顯示，電化學(xué)發(fā)光法的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度 （95.51%、97.67%、98.84%） 均高于快速檢測(cè)法（88.37%、89.53%、87.21%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。需要注意的是，NT-proBNP 檢測(cè)結(jié)果不會(huì)受到日?；顒?dòng)、時(shí)間、體位等影響，且有著長(zhǎng)達(dá)60～120 min 的半衰期，其體外濃度在24 h 內(nèi)維持在不變的狀態(tài)，且外源性含BNP 成分的藥物不會(huì)產(chǎn)生影響，以上穩(wěn)定性較高的情況下能使檢測(cè)結(jié)果與BNP 藥物服用、標(biāo)本運(yùn)送等沒(méi)有關(guān)系，但是，為了確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要及時(shí)將血液標(biāo)本送往檢測(cè)以及送檢。而腎功能、肥胖、性別、年齡等生理因素會(huì)影響NT-proBNP的濃度，而NT-proBNP 會(huì)伴隨著年齡的增加而出現(xiàn)升高的情況，主要是由于心舒張功能減退或者腎小球?yàn)V過(guò)率降低造成的。

綜上所述，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定NT-proBNP水平能夠有效地評(píng)估治療預(yù)后，有著完全自動(dòng)化、快速可靠、無(wú)創(chuàng)傷等優(yōu)勢(shì)，值得全面推廣應(yīng)用。