王雪芬,周守長(zhǎng),李小慶,許金朋,盧 婷,劉 喆,劉 洋
(華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 057151)
大腸桿菌病是由埃希氏大腸桿菌的某些致病株所引起的一類疾病,各種年齡的雞均可感染,大腸桿菌病可以單獨(dú)發(fā)病也可以通過其他疾病的繼發(fā)感染,由于近年來抗菌藥物的濫用,大腸桿菌耐藥株日益增多,使得該病呈蔓延趨勢(shì)。 所以本次針對(duì)臨床分離的三種大腸桿菌菌群,進(jìn)行牛津杯藥敏試驗(yàn),同時(shí)對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)藥敏片。 結(jié)果顯示成品牛津杯藥敏結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)藥敏片結(jié)果一致性較高,可通過藥敏結(jié)果來指導(dǎo)現(xiàn)場(chǎng)用藥防止耐藥產(chǎn)生。
為了現(xiàn)場(chǎng)出現(xiàn)大腸桿菌引起的心包炎、肝周炎、腹膜炎等原發(fā)和繼發(fā)感染,防止耐藥對(duì)成品藥品的使用篩選,選用三個(gè)分離的大腸桿菌進(jìn)行牛津杯藥敏試驗(yàn)。
大腸桿菌分離株A 菌株、B 菌株、C 菌株、藥敏片、牛津杯、成品藥、離心管、超純水、生理鹽水、涂布棒、珠子、酒精燈、取菌環(huán)、MH 培養(yǎng)基等。
表1 產(chǎn)品信息
將121℃高壓滅菌的MH 瓊脂培養(yǎng)基, 冷卻至50℃~60℃后, 在超凈臺(tái)中酒精燈火焰旁, 倒在無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi), 每皿約25mL,凝固后備用。
在超凈臺(tái)內(nèi),用酒精燈外焰灼燒接種環(huán),待接種環(huán)冷卻后接將三個(gè)場(chǎng)區(qū)純化的單個(gè)菌落到裝有3mL 無(wú)菌生理鹽水的樣品瓶中,制成菌懸液。
將10 種產(chǎn)品進(jìn)行按照推薦量稀釋,并縮小10 倍,擴(kuò)大10倍做三個(gè)梯度備用。
在超凈臺(tái)內(nèi),吸取0.1mL 菌液到平板表面,用涂布棒或珠子5 顆將菌液涂布均勻。
表2 稀釋比例
在超凈臺(tái)內(nèi),在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無(wú)空隙,每個(gè)平皿放置6 個(gè)牛津杯。
在超凈臺(tái)內(nèi)往牛津杯中加入不同濃度的藥液200uL。
選與本次試驗(yàn)同類的標(biāo)準(zhǔn)藥敏片進(jìn)行對(duì)比。
將做好的培養(yǎng)皿放置在37℃培養(yǎng)16~18h, 取出觀察結(jié)果,進(jìn)行分析對(duì)比。
4.1.1 A 菌株牛津杯藥敏結(jié)果
縮小10 倍濃度結(jié)果:多西環(huán)素、桿特、痢康、復(fù)方阿莫西林為極敏,普得康為中敏;
推薦濃度結(jié)果:桿特、痢康、復(fù)方阿莫西林為高敏,多西環(huán)素為中敏,普得康為不敏;
擴(kuò)大10 倍濃度結(jié)果:桿特、痢康為中敏,普得康、多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為不敏。
4.1.2 B 菌株牛津杯藥敏結(jié)果
縮小10 倍濃度結(jié)果:多西環(huán)素、桿特、復(fù)方阿莫西林為極敏,普得康、痢康為高敏;
推薦濃度結(jié)果:桿特為極敏,多西環(huán)素、痢康、復(fù)方阿莫西林為高敏,普得康為不敏;
擴(kuò)大10 倍結(jié)果:桿特為高敏,痢康為中敏,普得康、多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為不敏。
4.1.3 C 菌株牛津杯藥敏結(jié)果
縮小10 倍濃度結(jié)果:多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為極敏,普得康為高敏,痢康為不敏;
推薦濃度結(jié)果:桿特為極敏,多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為中敏,普得康、痢康為不敏;
擴(kuò)大10 倍濃度結(jié)果:桿特為中敏,普得康、多西環(huán)素、痢康、復(fù)方阿莫西林為不敏。
表3 成品藥牛津杯藥敏結(jié)果
備注: 以下藥敏結(jié)果圖示編號(hào)代表意義,A 開始的均為A菌株,A1 的1、2、3 標(biāo)記代表1 號(hào)普得康縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍,A1 的4、5、6 標(biāo)記代表2 號(hào)產(chǎn)品多西環(huán)素50%,縮小10倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍;A2 的1、2、3 代表3 好產(chǎn)品桿特,縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍;A2 的4、5、6 代表4 號(hào)產(chǎn)品痢康,縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍;A3 的1、2、3 代表5 號(hào)產(chǎn)品復(fù)方阿莫西林縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍;A3 的4、5、6 代表6號(hào)產(chǎn)品,因?yàn)闆]有同樣的藥敏片所以不進(jìn)行分析。
圖1 A 菌株牛津杯藥敏結(jié)果
圖2 B 菌株牛津杯藥敏結(jié)果
圖3 C 菌株牛津杯藥敏結(jié)果
4.2.1 A 菌株:黏菌素、環(huán)丙沙星、慶大霉素高敏,阿莫西林/克拉維酸中敏,氟苯尼考低敏,多西環(huán)素和氯霉素不敏;
4.2.2 B 菌株:慶大霉素極敏,環(huán)丙沙星、黏菌素高敏,氟苯尼考、阿莫西林/克拉維酸、多西環(huán)素中敏,氯霉素不敏;
4.2.3 C 菌株耐藥:環(huán)丙沙星高敏,氟苯尼考低敏,慶大霉素、多西環(huán)素、氯霉素、粘菌素、阿莫西林/克拉維酸不敏;
4.2.4 ABC 混合菌株與C 菌株耐藥的結(jié)果基本一致。
表4 藥敏片藥敏結(jié)果
圖4 A 菌、右B 菌株藥敏片結(jié)果
圖5 C 菌株、三個(gè)混合菌藥敏片結(jié)果
通過本次實(shí)驗(yàn)牛津杯成品藥敏結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)藥敏片一致性較高,且成品藥更方便現(xiàn)場(chǎng)的選擇優(yōu)勢(shì)。 本次實(shí)驗(yàn)三種菌株均顯示環(huán)丙沙星敏感性最高,其次是粘菌素、復(fù)方阿莫西林,且C 菌株都表現(xiàn)有一定程度的耐藥情況。 根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,牛津杯藥敏試驗(yàn)配成品藥的濃度建議使用推薦劑量。 臨床獸醫(yī)可以根據(jù)牛津杯藥敏的結(jié)果開具處方,選擇敏感的藥物進(jìn)行治療,防止耐藥菌株的產(chǎn)生。 牛津本實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單方便使用,有條件的實(shí)驗(yàn)室均可以操作。 為現(xiàn)場(chǎng)臨床提供有效的指導(dǎo)意義。