伍麥爾·麥海提,徐遠(yuǎn)遠(yuǎn),阿迪萊·卡哈曼,布帕提買木·麥麥提,張秋林,陳薈旭,孫鵬亮,李蓮瑞★
(1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 843300;2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木動(dòng)物疫病診斷與防控工程實(shí)驗(yàn)室 843300)
禽流感 (avian influenza) 是由禽流感A 型病毒 (avian influenza virus)引起,在各種家禽和野生鳥類中感染的高度接觸性傳染病[1]。 根據(jù)毒性大小,禽流感還可分低致病性和非致病性禽流感[2]。 其中能引起高致病性禽流感的主要為H5 和H7 亞型毒株[3]。H5 和H7 血清型可以引起高致病性禽流感,以高發(fā)病率,高死亡率為主要特征,并且這兩種血清型的病毒能夠在禽與禽,禽與人,人與人之間快速傳播,不管是禽類還是人類被傳染后都存在高燒持續(xù)不退的癥狀,甚至比較嚴(yán)重可能會(huì)就此喪命[4]。 因此,家禽進(jìn)行禽流感抗體的檢測(cè)對(duì)預(yù)防禽流感的暴發(fā)至關(guān)重要。
本實(shí)驗(yàn)為了準(zhǔn)確掌握阿克蘇地區(qū)H5 和H7 亞型禽流感強(qiáng)制免疫效果,取阿克蘇地區(qū)八個(gè)縣一個(gè)市的屠宰場(chǎng)、交易市場(chǎng)、散養(yǎng)農(nóng)戶以及規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)家禽血清并檢測(cè)其抗體水平。 通過這一環(huán)節(jié),始終掌握禽流感的最新動(dòng)態(tài),將預(yù)防放在首位,對(duì)免疫狀況較差的禽類進(jìn)行補(bǔ)免, 為后續(xù)免疫程序提供精準(zhǔn)的指導(dǎo)與計(jì)劃,從而更好的預(yù)防和控制禽流感的暴發(fā)供科學(xué)依據(jù)。
1.1.1 樣品采集 2020 年,從阿克蘇地區(qū)8 縣1 市的規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、交易市場(chǎng)和散養(yǎng)戶的家禽中采集血清。 在取樣過程中,采集者應(yīng)清楚并完整的記錄從哪采集的家禽、家禽的免疫情況、各個(gè)地方家禽血清采集的數(shù)量,以便為后期免疫提供準(zhǔn)確方向。
1.1.2 主要試劑 H5、H7 亞型禽流感病毒的標(biāo)準(zhǔn)抗原、陰性和陽性血清均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司; 在無菌條件下,健康的公雞血液用肝素進(jìn)行抗凝,1%的紅細(xì)胞懸液按常規(guī)制備和儲(chǔ)存,以備后續(xù)使用。
1.2.1 血凝(HA)試驗(yàn)(微量法) 在微量反應(yīng)板的第1~12 孔均加入0.025mL PBS,換滴頭。吸取0.025mL 抗原,加入第1 孔混勻。 從第一孔吸取0.025mL 抗原液加入第2 孔。 混勻后吸取0.025mL 加入第3 孔,如此進(jìn)行對(duì)比稀釋至第11 孔,從第11 孔吸取0.025mL 棄之,換滴頭。每孔再加入0.025mL PBS。每孔均加入0.025mL 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液。 振蕩混勻, 在室溫(20℃~25℃)下靜置40min 后觀察結(jié)果(如果環(huán)境溫度太高,可置4℃環(huán)境下)。 對(duì)照孔紅細(xì)胞將成明顯的鈕扣狀沉到孔底。
結(jié)果判定:將板傾斜,觀察紅細(xì)胞有無淚滴狀流淌。 完全血凝(不流淌)的抗原最高稀釋倍數(shù)代表1 個(gè)血凝單位(HAU)。 本試驗(yàn)的一個(gè)血凝單位為1∶256。
1.2.2 血凝抑制(HI)試驗(yàn)(微量法) 根據(jù)2.1 試驗(yàn)結(jié)果配制4HAU 的抗原,以完全血凝的抗原最高稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn),終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4 即為含4HAU 的抗原的稀釋倍數(shù)。 例如,如果血凝的終點(diǎn)滴定為1∶256,則4HUA 抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1∶64(256除以4)。 在微量反應(yīng)板的第1~11 孔加入0.025mL PBS,第12 孔加入0.05mL PBS。吸取0.025mL 血清加入第1 孔。充分混勻后吸取0.025mL 加入第2 孔,依次對(duì)倍稀釋至第10 孔,從第10 孔吸取0.025mL 棄 之。 1 ~11 孔 均 加 入 含4HAU 混 合 的 抗 原 液0.025mL,室溫約20℃靜置至少30min。每孔加入0.025mL 體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻,輕輕混勻,靜置約40min(室溫約20℃,若環(huán)境溫度太高可治4℃條件下進(jìn)行),對(duì)照紅細(xì)胞將呈現(xiàn)鈕扣狀沉于孔底。
結(jié)果判定:以完全抑制4 個(gè)HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。 如果HI≤3log2,抗體為陰性。HI≥4log2 為抗體陽性,符合抗體標(biāo)準(zhǔn)。
表1 2020 年春季規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況
從表1 的檢驗(yàn)結(jié)果顯示,2020 年采自春季阿克蘇地區(qū)規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)中的家禽血清, 在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,除了阿克蘇市H5 亞型禽流感免疫抗體合格率為90%以外,其他八個(gè)縣H5 亞型禽流感免疫抗體合格率均為100%,免疫效果較好;在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,沙雅縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率極低(55%)。其次,新和縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率為95%,阿克蘇市是90%,其他縣H7 亞型禽流感抗體免疫良好。
表2 2020 年春季屠宰場(chǎng)禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況
從表2 的檢測(cè)結(jié)果顯示,2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)屠宰場(chǎng)中的家禽血清,在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,除了溫宿縣H5 亞型禽流感免疫抗體合格率為90%以外,其他七個(gè)縣一個(gè)市H5 亞型禽流感免疫抗體合格率均為100%,免疫效果較好;在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中, 沙雅縣和新和縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率較低,分別為40%和75%。 溫宿縣與阿瓦提縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率為95%,低于其他H7 亞型禽流感免疫抗體合格率100%的縣市。
表3 2020 年春季散養(yǎng)戶禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況
從表3 的檢測(cè)結(jié)果顯示,2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)散養(yǎng)戶的家禽血清,在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,除了阿瓦提略低外,總體的免疫效果還是比較良好的;在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,沙雅(60%)、新和(70%)、阿瓦提(75%)偏低,有待于進(jìn)一步補(bǔ)免,其他縣市免疫效果良好。
表4 2020 年春季交易市場(chǎng)禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況
從表4 的檢測(cè)結(jié)果顯示,2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)交易市場(chǎng)的家禽血清,在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,新和縣的H5 亞型禽流感免疫情況還有待加強(qiáng), 阿瓦提的H5 亞型禽流感出現(xiàn)了很明顯的免疫不合格問題,應(yīng)提醒注意防患;在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中,沙雅縣和阿瓦提縣免疫效果仍然不佳,拜城縣的免疫情況也需加強(qiáng)。
表5 2020 年春季H5 亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)情況匯總
從表5 的檢測(cè)結(jié)果顯示,2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)的家禽血清,總體來看,H5 亞型禽流感免疫抗體獲得情況良好。 但有個(gè)別縣免疫效果沒有達(dá)到100%,新和縣、阿克蘇市、溫宿縣、阿瓦提縣免疫過程可能進(jìn)行的不完善,需要進(jìn)一步加強(qiáng)免疫。
表6 2020 年春季H7 亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)情況匯總
從表6 的檢測(cè)結(jié)果顯示,2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)的家禽血清,H7 亞型禽流感免疫抗體的獲得情況較差。 其中,沙雅縣對(duì)于H7 亞型禽流感的免疫抗體獲得情況極差,需及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免措施。 結(jié)合表5 分析,庫(kù)車、烏什以及柯坪縣對(duì)禽流感的防控很好;沙雅、阿瓦提縣需要防范禽流感的潛在威脅。
本次監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示, 阿克蘇地區(qū)8 個(gè)縣和1 個(gè)市的禽流感整體免疫效果較好, 少數(shù)縣H7 亞型禽流感的免疫效果仍需加強(qiáng),應(yīng)盡早加強(qiáng)免疫,以抵抗野生毒株的感染。 本試驗(yàn)結(jié)果表明,不同飼養(yǎng)條件下的免疫效果具有些許差異。 禽流感抗體水平在規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)是最高的。 造成這種現(xiàn)象的原因可能是規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生環(huán)境干凈整潔,通風(fēng)系統(tǒng)良好,管理水平高,免疫程序合理,因此,規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)的禽流感抗體水平最高;屠宰場(chǎng)的禽流感抗體水平較好, 出現(xiàn)這種現(xiàn)象原因可能是屠宰場(chǎng)中一般是肉用雞以及淘汰蛋雞,肉雞養(yǎng)殖周期比較短,因此免疫數(shù)量較少,可能存在禽流感病毒;散養(yǎng)戶的禽流感抗體水平普遍較低,形成這種現(xiàn)象的原因可能是散戶飼養(yǎng)數(shù)量少, 對(duì)免疫接種的重要性沒有得到很深的認(rèn)識(shí);交易市場(chǎng)的禽流感抗體水平也一般,形成這種現(xiàn)象的原因可能是交易市場(chǎng)主要從事為規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶銷售飼養(yǎng)的家禽,造成抗體水平不平均,流動(dòng)性高,禽流感傳播的可能性高。 因此,需要做好禽流感的免疫工作以知道及時(shí)進(jìn)行調(diào)查處理。 除此之外,在免疫中需要注意以下方面,疫苗應(yīng)妥善保存,防止應(yīng)保存不當(dāng)而降低免疫原性;選擇合適的天氣條件,按疫苗接種規(guī)定使用培養(yǎng)箱;避免免疫時(shí)的繁重工作,以避免防疫人員在追求速度的時(shí)忽略質(zhì)量,降低免疫效果;注射用針頭避免倒刺,以防止注射部位感染,影響免疫應(yīng)答[5]。
本實(shí)驗(yàn)為了監(jiān)測(cè)阿克蘇地區(qū)禽流感免疫抗體水平, 通過采集阿克蘇地區(qū)的家禽血清, 采用血凝和血凝抑制法檢測(cè)禽流感免疫抗體。結(jié)果顯示,目前,阿克蘇地區(qū)H5 亞型禽流感免疫抗體合格率良好,可以再更一步完善和提高;但是,部分縣對(duì)于H7 亞型禽流感的接種情況較差,易造成禽流感暴發(fā)的潛在可能性。 在這項(xiàng)研究中,通過抗體水平檢測(cè),及時(shí)反饋各養(yǎng)雞場(chǎng),并指導(dǎo)補(bǔ)免加強(qiáng)和后期監(jiān)測(cè), 可以使得免疫不格的雞場(chǎng)的抗體陽性率有大幅度提升,起到了良好的預(yù)警作用和指導(dǎo)作用[6]。