突發(fā)公共衛(wèi)生事件中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用

河南省漯河市源匯區(qū)疾病預(yù)防控制中心（462000）張真真 謝明慧

突發(fā)公共衛(wèi)生事件為突然發(fā)生，造成或者可能造成社會(huì)公眾健康嚴(yán)重?fù)p害的重大傳染病疫情、群體性不明原因疾病、重大食物和職業(yè)中毒以及其他嚴(yán)重影響公眾健康的事件，為盡量降低突發(fā)公共事件的危害性，在其發(fā)生后需要及時(shí)做出有效的處理[1]。近年來(lái)隨著我國(guó)環(huán)境的不斷惡化，各種傳染性疾病的發(fā)病率越來(lái)越高，由于其發(fā)展迅速、波及范圍較廣，在對(duì)其進(jìn)行處理時(shí)要格外注重時(shí)效性[2]。微生物快速檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用不僅可以有效幫助醫(yī)務(wù)人員快速了解病情發(fā)生根源以及各類(lèi)病原微生物變異情況等，而且還可以為其控制措施的制定帶來(lái)一定指導(dǎo)[3]。面對(duì)不同的突發(fā)公共衛(wèi)生事件，微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用以及要求也不同，為此本文將圍繞如何在突發(fā)公共衛(wèi)生事件中有效應(yīng)用各種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)作詳細(xì)綜述，以望為后期突發(fā)公共衛(wèi)生事件微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的選擇以及應(yīng)用開(kāi)展帶來(lái)一定參考指導(dǎo)作用。

1 微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)

微生物是個(gè)體無(wú)法用肉眼觀察到的極小生物的統(tǒng)稱(chēng)，主要包括細(xì)菌、病毒等，涉及藥品、食品、環(huán)境等諸多領(lǐng)域。其對(duì)人類(lèi)的影響包括有益和有害兩個(gè)方面，其中有害方面對(duì)人類(lèi)影響最大的是傳染病的流行，人類(lèi)有50%的疾病是由病毒引起的，但人類(lèi)在對(duì)抗病毒的同時(shí)也取得了巨大進(jìn)步，比如青霉素的發(fā)現(xiàn)，這在二戰(zhàn)中挽救了無(wú)數(shù)人的性命[4]。

由于微生個(gè)體較小且生長(zhǎng)繁衍非常迅速，這對(duì)微生物的檢驗(yàn)提出了挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的檢驗(yàn)技術(shù)主要是采用試管法、培養(yǎng)膜法和濾膜法進(jìn)行檢驗(yàn)，這種方法步驟較繁瑣、檢驗(yàn)數(shù)量有限以及技術(shù)的限制，一般經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)才能做出判斷?？焖贆z驗(yàn)方法主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)技術(shù)以及膠體金免疫技術(shù)，這些技術(shù)可以減少成本、縮短庫(kù)存時(shí)間、培養(yǎng)時(shí)間，提高檢驗(yàn)的靈敏度[5]。

國(guó)家現(xiàn)使用微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)是國(guó)內(nèi)外安全的需要，是現(xiàn)在日益嚴(yán)重的安全局勢(shì)的需要，比如2003年的SARS和2019年的新冠狀病毒的流行。使用這類(lèi)技術(shù)可以快速得到檢驗(yàn)結(jié)果，節(jié)省人力物力，保障國(guó)家和人們生命安全。因此從長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展趨勢(shì)來(lái)說(shuō)，微生物快速檢驗(yàn)方法是應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件的一大方向。

2 微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)在各類(lèi)突發(fā)公共衛(wèi)生事件中的應(yīng)用

2.1 鼠疫 鼠疫是由鼠疫耶爾森菌感染引起的烈性傳染病，主要傳播途徑為鼠蚤叮咬，除此之外通過(guò)病獸或者是直接接觸患者體液等也可以傳染。鼠疫屬于我國(guó)法定傳染疾病中的甲類(lèi)傳染病，不僅傳播速度快，而且致死率高，暴發(fā)后容易發(fā)生大面積傳染發(fā)病，會(huì)對(duì)人們的健康以及生命安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅。以往細(xì)菌培養(yǎng)是鼠疫的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方式，不足之處在于檢驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)。近年來(lái)鼠疫的檢驗(yàn)水平隨著我國(guó)醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷提高而發(fā)生了明顯上升，其中雙重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)具有良好的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)效果。既往有相關(guān)研究[6]在對(duì)66例鼠疫患者的研究中，通過(guò)雙重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)其淋巴液進(jìn)行了檢查，結(jié)果顯示陽(yáng)性例數(shù)共計(jì)61例，陽(yáng)性檢出率為92.42%，認(rèn)為雙重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可以有效提高鼠疫檢出效果，能夠有效幫助臨床診療工作的開(kāi)展。除此之外，也有學(xué)者[7]表示，在鼠疫細(xì)菌檢驗(yàn)中，膠體金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)由于不會(huì)和其他類(lèi)型細(xì)菌發(fā)生交叉影響，加之其檢驗(yàn)耗時(shí)短，通常可以在十分鐘之內(nèi)完成檢驗(yàn)，因此在鼠疫細(xì)菌檢驗(yàn)中具有良好的檢驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值。膠體金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)和反向間接血凝實(shí)驗(yàn)比較相似，但是二者檢驗(yàn)效果比較，前者要更優(yōu)。

2.2 SARS 它是一種由于SARS冠狀病毒引起的重癥急性呼吸綜合征，于2002年在我國(guó)廣東發(fā)生，同時(shí)迅速擴(kuò)散至東南亞乃至全球，為全球性傳染病疫潮之一。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、病毒管分離檢測(cè)、間接免疫熒光法抗體檢測(cè)以及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定等均為SARS常見(jiàn)檢驗(yàn)方法[8]。其中間接免疫熒光法抗體檢測(cè)在SARS檢驗(yàn)中，患者發(fā)病10小時(shí)后是其最有效的應(yīng)用時(shí)間，檢測(cè)結(jié)果具有較高的可靠性以及客觀性。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)已經(jīng)普遍應(yīng)用于SARS檢驗(yàn)中。而對(duì)于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，目前較多研究均表示其在SARS發(fā)病21天后具有更為良好的檢測(cè)效果。除此之外，也有學(xué)者[7]表示，通過(guò)在SARS病毒診斷期間制作基因芯片進(jìn)行檢驗(yàn)，可以獲取更高的檢測(cè)準(zhǔn)確性，通?；颊邫z測(cè)準(zhǔn)確性可以超過(guò)90%，同時(shí)還具有較高的檢測(cè)靈敏度。

2.3 霍亂 霍亂主要是攝入被霍亂弧菌污染的食物或水而導(dǎo)致發(fā)生的一種急性腹瀉性傳染病，以腹瀉以及嘔吐等為常見(jiàn)臨床表現(xiàn)。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)資料顯示[9]，每年大約有四百萬(wàn)的霍亂病例，每年因霍亂死亡的患者例數(shù)大約有十萬(wàn)左右，以夏季為高發(fā)季節(jié)?；魜y作為烈性腸道傳染病，病情發(fā)展迅速，不及時(shí)治療可能會(huì)導(dǎo)致患者發(fā)生脫水以及水電解質(zhì)絮亂等情況，影響體內(nèi)循環(huán)質(zhì)量，嚴(yán)重可導(dǎo)致患者發(fā)生循環(huán)衰竭，對(duì)其生命安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅。分離培養(yǎng)聯(lián)合血清凝集試驗(yàn)為霍亂常見(jiàn)的一種傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)技術(shù)方法，檢測(cè)耗時(shí)一般需要24小時(shí)以上，檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)[10]。通過(guò)對(duì)水樣便分離進(jìn)行4號(hào)瓊脂培養(yǎng)可以對(duì)檢測(cè)時(shí)間進(jìn)行縮短，一般檢驗(yàn)結(jié)果可以在7小時(shí)左右出具。近年來(lái)，在霍亂檢驗(yàn)中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，檢驗(yàn)耗時(shí)短，其整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程一般2小時(shí)即可完成。除此之外，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)不會(huì)和副溶血性弧菌發(fā)生交叉反應(yīng)，不僅更有利于提高霍亂檢驗(yàn)效果，而且還可以進(jìn)一步縮短檢驗(yàn)時(shí)間。在霍亂檢驗(yàn)中，膠體金免疫技術(shù)也有一定應(yīng)用，有學(xué)者[11]在對(duì)霍亂患者的肛拭子標(biāo)本中，通過(guò)為期6小時(shí)的堿性胨水增菌培養(yǎng)后，再選擇膠體金免疫技術(shù)開(kāi)展檢測(cè)，結(jié)果顯示其檢測(cè)敏感度為105CFU/mL。此外，也有一些研究報(bào)道表明，基因芯片技術(shù)在本病中應(yīng)用日趨成熟。

2.4 病毒性肝炎 甲型病毒性肝炎以及戊型病毒性肝炎均為臨床常見(jiàn)的兩種病毒性肝炎類(lèi)型，以口鼻和糞便為主要傳播途徑，是一種嚴(yán)重的傳染性疾病，發(fā)病后患者病情發(fā)展相對(duì)較快，可在短時(shí)間內(nèi)廣泛傳播，容易流行暴發(fā)。如何進(jìn)一步提高病毒性肝炎的防控效果一直以來(lái)都是我國(guó)公共衛(wèi)生研究中的一個(gè)重要研究課題，目前有學(xué)者[12]針對(duì)病毒性肝炎建立了一個(gè)能夠同時(shí)檢測(cè)甲型病毒性肝炎以及戊型病毒性肝炎的模型，根據(jù)此模型的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以及要求進(jìn)行檢測(cè)，其對(duì)甲型病毒性肝炎和戊型病毒性肝炎檢測(cè)的準(zhǔn)確率分別為96%和98%，在病毒性肝炎檢測(cè)中具有良好的檢測(cè)應(yīng)用價(jià)值。另外也有相關(guān)研究報(bào)道指出，對(duì)于病毒性肝炎患者，通過(guò)酶免疫測(cè)試技術(shù)對(duì)其血清進(jìn)行檢驗(yàn)，無(wú)論檢驗(yàn)特異度還是檢驗(yàn)靈敏度，均可以達(dá)到90%以上。

2.5 傷寒以及副傷寒 傷寒以及副傷寒均為腸道傳染病，前者是由腸沙門(mén)菌腸亞種傷寒血清型引起的腸道傳染病，后者是由腸沙門(mén)菌腸亞種副傷寒甲或乙或丙血清型引起的急性傳染病，和前者比較相似。沙門(mén)菌種類(lèi)多達(dá)兩千多種，在我國(guó)已被發(fā)現(xiàn)的種類(lèi)就已經(jīng)超過(guò)兩百多種，不僅會(huì)嚴(yán)重傷害患者腸道，影響其身體健康，而且還具有較高的傳染性。在對(duì)傷寒以及副傷寒的檢查中，傳統(tǒng)常規(guī)培養(yǎng)方法檢查需要（4±1）天才可以得出檢查結(jié)果，容易延誤患者的最佳治療時(shí)機(jī)[13]。隨著近年來(lái)臨床對(duì)傷寒以及副傷寒檢查的不斷深入研究，近年來(lái)也有學(xué)者[14]指出，金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法在傷寒以及副傷寒檢查中具有良好的檢查效果，通過(guò)對(duì)其開(kāi)展血清抗傷寒抗體檢驗(yàn)，傷寒患者的陽(yáng)性檢出率為82%；對(duì)于非傷寒患者，金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)的假陽(yáng)性率為4%，提示金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法在傷寒中的良好檢測(cè)效果。另外也有研究報(bào)道指出，傷寒抗體檢驗(yàn)傷寒初期患者的陽(yáng)性率為93%，非傷寒患者陽(yáng)性率為9%。有學(xué)者指出，在副傷寒檢驗(yàn)中，PHA檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)效果好以及檢驗(yàn)速度快等優(yōu)點(diǎn)。

2.6 出血性腸炎 出血性腸炎是一種好發(fā)于小腸的局限性急性出血壞死性炎癥，在春秋季節(jié)具有較高發(fā)病率，具體病因還不清楚，但是多數(shù)學(xué)者均認(rèn)為其和腸道缺血感染等因素存在密切關(guān)系。在各種細(xì)菌類(lèi)型中，H7大腸桿菌是出血性腸炎常見(jiàn)的主要致病菌，由于其具有相對(duì)較強(qiáng)的爆發(fā)性，因此也是導(dǎo)致多次暴發(fā)公共衛(wèi)生事件的主要原因之一。對(duì)于H7大腸桿菌，從其分離出來(lái)至今已經(jīng)帶來(lái)了較大的負(fù)面影響，飽受社會(huì)爭(zhēng)議。有相關(guān)研究[15]指出，在出血性腸炎檢測(cè)中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢出率較高，且不必耗費(fèi)較長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間，具有較高的檢測(cè)準(zhǔn)確性，基本上可以排除沒(méi)有感染H7大腸桿菌的患者。

2.7 人感染高致病性禽流感 人感染高致病性禽流感是由禽流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，其中H9N2、H5N1以及H7N7為目前常見(jiàn)的幾種感染類(lèi)型。目前聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)為人感染高致病性禽流感常見(jiàn)的檢驗(yàn)方法之一，其在實(shí)際應(yīng)用中，不僅不會(huì)和H1以及H3發(fā)生交叉反應(yīng)，而且還具有較高的檢驗(yàn)準(zhǔn)確性以及檢驗(yàn)特異度。

2.8 登革熱 登革熱屬于急性蟲(chóng)媒傳染病之一，主要是由登革病毒引起的，以突起高熱、淋巴結(jié)腫大以及頭痛等為主要常見(jiàn)臨床表現(xiàn)。登革病毒感染后，可以導(dǎo)致登革出血熱，但是我國(guó)比較少見(jiàn)。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道指出，登革熱患者最早可以在發(fā)病1d后出現(xiàn)抗體。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)登革熱患者的免疫球蛋白M，其陽(yáng)性檢出率會(huì)隨著其發(fā)病后的時(shí)間長(zhǎng)短發(fā)生顯著差異，發(fā)病時(shí)間低于3天者，其陽(yáng)性檢出率相對(duì)較低，僅為35%，而在發(fā)病4天后以及5天以上，其陽(yáng)性檢出率分別為80%和91%，因此登革熱患者發(fā)病時(shí)間越長(zhǎng)，其酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率會(huì)越高。除此之外，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)也具有良好的檢測(cè)應(yīng)用價(jià)值，登革熱病毒檢驗(yàn)效果理想。

3 結(jié)語(yǔ)

由于我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們生活方式以及飲食習(xí)慣發(fā)生了巨大變化，同時(shí)環(huán)境也日益惡化，各種微生物突發(fā)公共衛(wèi)生事件不斷頻發(fā)，無(wú)論是對(duì)我們正常的生產(chǎn)生活還是對(duì)我們的身心健康以及生命安全，均會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重影響。面對(duì)各類(lèi)突發(fā)公共衛(wèi)生事件，其檢驗(yàn)方法也各不相同，需要廣大醫(yī)務(wù)工作者不斷進(jìn)行大量研究實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步完善各種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)，尋求最佳檢驗(yàn)方法技術(shù)，以使其可以更好地應(yīng)用于各類(lèi)突發(fā)公共衛(wèi)生事件中，從而在最大程度上降低其發(fā)展速度及其所致的經(jīng)濟(jì)損失，減少其對(duì)民眾造成的傷害。目前聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)技術(shù)以及膠體金免疫技術(shù)均為近年來(lái)應(yīng)用相對(duì)廣泛的兩種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)，均具有其各自的優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)。雖然基因芯片檢測(cè)技術(shù)還處于研究階段，但是相信未來(lái)的不斷深入研究，其一定可以在突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)用中發(fā)揮更大價(jià)值。