聯(lián)合檢測人乳頭病毒與單純皰疹病毒在宮頸病變篩查中的價(jià)值

霍中華，李明成

(1.北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011；2.北華大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 吉林 132013)

宮頸病變主要包括宮頸炎、宮頸肥大、宮頸囊腫以及宮頸柱狀上皮異位.調(diào)查[1]表明：在已婚婦女或有性生活的女性中，宮頸柱狀上皮異位的發(fā)病率在50%以上.若不及時(shí)發(fā)現(xiàn)、治療，可能進(jìn)展為宮頸癌，因此，發(fā)現(xiàn)病因與病機(jī)，尋找科學(xué)有效的治療方法，對防治宮頸癌具有重要意義.宮頸柱狀上皮異位發(fā)病有多種因素參與，除物理和化學(xué)因素、機(jī)械創(chuàng)傷刺激、病原體感染(如沙眼衣原體、解脲脲原體等)有關(guān)以外，越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道[2]證實(shí)，病毒感染是慢性宮頸炎及宮頸柱狀上皮異位的重要原因，常見的病毒包括人乳頭瘤病毒(HPV)、單純皰疹病毒(HSV-Ⅱ)和人巨細(xì)胞病毒(HCMV)等[3].現(xiàn)對就診的1 269例宮頸病變患者進(jìn)行HPV和HSV-Ⅱ聯(lián)合檢測，并探討聯(lián)合檢測HPV與HSV-Ⅱ在宮頸病變篩查中的價(jià)值.

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月—2019年6月于北華大學(xué)附屬醫(yī)院就診的1 269例已婚女性，患者因陰道分泌物異常或小腹疼痛就診，依據(jù)宮頸病變修訂標(biāo)準(zhǔn)[4]對患者進(jìn)行診斷，排除既往已有宮頸病變或子宮切除患者.根據(jù)液基波層細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果將其分為輕微炎癥組、低級別病變組(宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepi-thelialneoplasia，CIN)Ⅰ)、高級別病變組(CINⅡ～Ⅲ)及癌變組(浸潤性宮頸癌(invasivecervicalcancers，ICC)).患者年齡21～50歲，平均(32.33±9.98)歲.正常對照組為同期健康體檢中心婦科體檢女性128例，年齡21～51歲，平均(33.23±9.87)歲，排除宮頸及陰道炎癥.兩組入選對象年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，所有研究對象均為吉林地區(qū)常住人口，對此檢測項(xiàng)目知情同意并且自愿無償提供標(biāo)本用于研究.

1.2 儀器與材料

Thermo Fisher 熒光定量PCR儀(賽默飛世爾科技公司，美國)；人乳頭瘤病毒核酸檢測及基因分型試劑盒、單純皰疹病毒Ⅱ型核酸測定試劑盒(深圳達(dá)安基因股份有限公司)；病毒DNA基因組提取試劑盒(PureLink?Pro 96 Viral RNA/DNA Purification Kit)(賽默飛世爾科技公司，美國).

1.3 標(biāo)本采集與處理

患者取截石位，常規(guī)消毒外陰，用陰道窺器暴露宮頸，用無菌棉拭子(生理鹽水浸潤)插入宮頸，旋轉(zhuǎn)2～3圈，停留30 s，之后將棉拭子置于2 mL病毒保存管中，置-70 ℃冰柜保存.

1.4 標(biāo)本HPV-DNA及HSV-Ⅱ-DNA提取

應(yīng)用Thermo Fisher 病毒基因組試劑盒提取標(biāo)本中的病毒DNA，參照試劑盒說明書進(jìn)行操作.

1.5 標(biāo)本中HPV-DNA及HSV-DNA 檢測

應(yīng)用PCR-反向斑點(diǎn)雜交法進(jìn)行HPV核酸檢測及基因分型，應(yīng)用HSV-DNA PCR-熒光探針法進(jìn)行HSV Ⅱ型核酸檢測，反應(yīng)體系及條件參考試劑盒說明書進(jìn)行操作.

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以百分率(%)和例數(shù)表示，行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman 等級相關(guān)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié) 果

2.1 宮頸標(biāo)本HPV分型及HSV-Ⅱ檢測

1 269例宮頸病變患者中HPV總檢出率為63.1%(807/1269)，包括高危型(16種)和低危型(3種)，均高于正常對照組(12.5%，16/128，P<0.05).HSV-Ⅱ檢出率為28.9%(367/1269)，高于正常對照組(6.3%，8/128，P<0.05).見表1.

表1 HPV與HSV-Ⅱ在病例組與對照組中的檢出率Tab.1 Detection rates of HPV and HSV-Ⅱ between cases and control groups

2.2 宮頸標(biāo)本HPV與HSV-Ⅱ在不同年齡段中的檢出分布

宮頸病變患者中HPV高危型在25歲(包括25歲)以下和46～55年齡組中的感染率高；而HPV低危型只是46～55年齡組的感染率高，與其他各年齡段比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).HSV-Ⅱ感染率與HPV高危型年齡段相似，在25歲(包括25歲)以下和46～55年齡組中的感染率高，與其他各年齡段比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).HPV與HSV-Ⅱ混合在46～55年齡組中的感染率高，HPV與HSV-Ⅱ混合感染檢出率為14.9%(190/1 269)，與其他各年齡段比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).見表2.

表2 HPV與HSV-Ⅱ感染在不同年齡段中的分布Tab.2 Distribution of infections of HPV and HSV-Ⅱ in different ages

2.3 宮頸病變HPV與HSV-Ⅱ感染的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果表明：宮頸病變嚴(yán)重程度與患者HVP及HSV-Ⅱ感染呈正相關(guān)(r=0.536，P<0.05)，而且隨著宮頸病變程度的加重，HPV、HSV-Ⅱ及 HPV與HSV-Ⅱ混合感染率都明顯增加，各組間HPV、HSV-Ⅱ的感染率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).見表3.

表3 HPV與HSV-Ⅱ感染在宮頸不同病變中的分布Tab.3 Distribution of HPV and HSV-Ⅱ infections in different patients with cervical erosion

3 討 論

宮頸病變可由多種因素誘發(fā)，一般認(rèn)為是由于分娩、流產(chǎn)、陰道手術(shù)導(dǎo)致宮頸損傷，或者在月經(jīng)期、產(chǎn)褥期性生活不潔致病原體侵入宮頸，導(dǎo)致宮頸表面鱗狀上皮細(xì)胞脫落，常為柱狀上皮細(xì)胞所替代，并且上皮下血管顯露而呈紅色病損[5].宮頸與陰道連接部分的組織為鱗狀上皮細(xì)胞層，對病原體及炎癥有較強(qiáng)的抵抗力，而宮頸管柱狀上皮細(xì)胞層薄，對病原體及炎癥抵抗力弱.因此，病原體常常侵入由柱狀上皮細(xì)胞覆蓋的宮頸黏膜部分.此外，宮頸黏膜皺襞多，病原體定植潛藏宮頸黏膜皺襞處，不易被徹底清除出去，從而導(dǎo)致宮頸病變反復(fù)發(fā)作，遷延不愈.

本研究的1 269例宮頸病變患者中HPV檢出率為63.1%，高于正常對照組(12.5%)；HSV-Ⅱ檢出率為28.9%，高于正常對照組(6.3%).HPV有多種亞型，感染人類生殖系統(tǒng)引起不同程度的病理改變.HPV-6、HPV-11、HPV-42、HPV-43和HPV-44型為低危型，主要引起尖銳濕疣病變；HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-5l、HPV-52和HPV-56等與宮頸良性腫瘤、不典型增生及宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，為高危型.宮頸濕疣發(fā)生在宮頸局部或?qū)m頸移行區(qū)，單發(fā)或多發(fā)，局部呈現(xiàn)丘疹性或斑疹性改變，多為扁平狀，或呈乳頭狀上皮增生[6].近年來，各地報(bào)道尖銳濕疣發(fā)病率有增加的趨勢，以年輕婦女發(fā)病率最高.宮頸炎的臨床表現(xiàn)與早期宮頸癌極其相似，不易鑒別，要注意定期做婦科檢查，早期發(fā)現(xiàn)，及時(shí)治療.HSV-Ⅱ型宮頸感染發(fā)作時(shí)可持續(xù)1～2周.在慢性宮頸炎患者中，隨著宮頸病變程度的增加，HSV感染率呈上升趨勢，提示HSV-Ⅱ感染與慢性宮頸炎的發(fā)生和發(fā)展相關(guān).有研究[7]報(bào)道，當(dāng)HPV合并HSV-Ⅱ或與人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染時(shí)，患宮頸癌相對危險(xiǎn)性增高，提示HSV-Ⅱ及HCMV可能和HPV有協(xié)同致癌的作用.提示在診斷和治療宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌時(shí)，不應(yīng)忽視其他類型的病毒感染，早發(fā)現(xiàn)、早治療是阻斷其癌變的關(guān)鍵[8].

本研究中，應(yīng)用PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行HPV核酸檢測及基因分型，應(yīng)用PCR-熒光探針法進(jìn)行HSV-Ⅱ型核酸檢測，結(jié)果顯示：HPV與HSV-Ⅱ檢出率明顯高于正常對照組，說明HPV與HSV-Ⅱ感染與宮頸病變密切相關(guān)，與相關(guān)研究[9]相符.HPV16和HPV18陽性的女性后期發(fā)展成CIN或?qū)m頸癌的概率在我國高達(dá)84.5%，在世界范圍達(dá)70%[10].HPV與HSV-Ⅱ感染通過性傳播引起婦女宮頸病變，且常反復(fù)發(fā)作，導(dǎo)致了HPV與HSV-Ⅱ在人群中的傳播.本研究顯示：宮頸病變患者中出現(xiàn)HPV與HSV-Ⅱ兩種病毒混合感染，HPV與HSV-Ⅱ混合感染率在46～55年齡組中高.隨著宮頸病變程度的加重，HPV、HSV-Ⅱ及 HPV與HSV-Ⅱ混合感染率都明顯增加，與CHEN W等[11]提出的HPV與HSV-Ⅱ協(xié)同致癌的學(xué)說一致.

近年來，病毒感染與宮頸癌發(fā)病的關(guān)系引起人們的關(guān)注，宮頸癌在宮頸病變患者的發(fā)生率高于正常婦女.宮頸病變HPV與HSV-Ⅱ感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的高危因素，因此，宮頸病變患者應(yīng)行HPV與HSV感染的聯(lián)合檢測，并及時(shí)進(jìn)行抗病毒治療.同時(shí)，廣泛開展教育，重視宮頸病變的預(yù)防與治療，加強(qiáng)接種HPV宣傳教育工作，有效并及時(shí)治療各種宮頸病變[12-13].

在HPV和HSV感染的宮頸炎臨床診斷中，基于PCR技術(shù)有多種方法可選用[14-15].本實(shí)驗(yàn)采用PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行HPV核酸檢測，同時(shí)還能進(jìn)行HPV基因分型；HSV-Ⅱ型核酸采用PCR-熒光探針法檢測，這些方法可以對前病毒或潛伏期低復(fù)制時(shí)的病毒特異性靶DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增檢測，在血清特異抗體出現(xiàn)之前就可以檢出微量的DNA，而且比DNA分子探針敏感.因此，這兩種技術(shù)是臨床檢測HPV與HSV感染的首選方法，具有簡便、敏感和特異性強(qiáng)等特點(diǎn).

綜上所述，宮頸病變嚴(yán)重程度與HPV、HSV-Ⅱ感染密切相關(guān)，臨床上應(yīng)重視HPV感染，同時(shí)也要兼顧HSV-Ⅱ感染，尤其46～50歲女性，即使陰道鏡檢查正常，也要做好跟蹤和隨訪，及時(shí)干預(yù).