東北雷公藤正丁醇層化學(xué)成分研究

陳昌盛，劉艷，潘娟，管偉，劉國(guó)貞，匡海學(xué)，楊炳友

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

東北雷公藤為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物東北雷公藤（Tripterygium regeliiSprague et Takeda）的干燥根及根莖［1］。其同屬植物雷公藤（Tripterygium wilfordiiHook.f.）在臨床上廣泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、蕁麻疹等免疫性疾?。?－5］。但由于雷公藤化學(xué)成分復(fù)雜，毒性也不容忽略，毒理學(xué)研究表明其對(duì)肝、腎、血液和生殖系統(tǒng)易造成嚴(yán)重?fù)p傷［6－7］。這一特點(diǎn)極大限制了該藥在臨床上的使用。而它的同屬植物東北雷公藤相較于雷公藤具有毒性小的優(yōu)勢(shì)，本文對(duì)東北雷公藤正丁醇層化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，通過(guò)多種色譜及波譜學(xué)方法從中分離并鑒定其化學(xué)成分。

1 儀器與材料

Bruker－400 超導(dǎo)核磁共振光譜儀（Bruker 公司）；Q－TOF（ESI）高分辨質(zhì)譜儀（Waters 公司）；制備型高效液相色譜（島津公司）；分析型高效液相色譜（Waters公司）；Sephadex LH－20（GE Healthcare 公司）；反相ODS（YMC 公司）；硅膠柱色譜（200～300 目，青島海洋化工廠）；薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）。

東北雷公藤藥材于2019年4月采收于吉林省長(zhǎng)白山，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院樊銳鋒副教授鑒定為雷公藤屬植物東北雷公藤（Tripterygium regeliiSprague et Takeda）的根。原植物標(biāo)本（No.20190712）保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

干燥的東北雷公藤根25 kg，以70%的乙醇加熱回流提取3 次，每次2 h，過(guò)濾，減壓回收溶劑，得乙醇提取物3.5 kg，取純水將乙醇提取物均勻混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取，并將各個(gè)部位的萃取液分別減壓濃縮至浸膏狀，得石油醚部位浸膏191.7 g，乙酸乙酯部位浸膏453.3 g，水飽和正丁醇部位浸膏186 g。取180 g 的正丁醇萃取部位經(jīng)硅膠柱色譜分離，采用二氯甲烷－甲醇（100∶0→0∶1）系統(tǒng)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)反復(fù)的薄層色譜結(jié)合高效液相色譜檢識(shí)，合并相同組分，最終共得到6 個(gè)組分，即Fr. A～Fr. F。Fr. A 經(jīng)ODS 柱色譜，結(jié)合制備型HPLC分離得到化合物1（3.2 mg）、3（4.3 mg）、4（2.8 mg）、6（6.5 mg）。Fr. C 經(jīng)ODS 柱色譜，凝膠柱色譜以及制備型HPLC 分離得到化合物2（2.5 mg）、5（4.7 mg）、7（3.5 mg）、8（4.2 mg）、11（5.4 mg）、14（6.8 mg）。Fr.D 經(jīng)ODS 柱色譜，結(jié)合制備型HPLC 分離得到化合物9（2.5 mg）、10（6.3 mg）、12（3.9 mg）、13（5.1 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：473.360 2［M + H］+，分子式 為C30H48O4。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：1.89～1.92（1H，m，H－1α），1.62（1H，m，H－1β），1.72～1.74（1H，m，H－2α），1.06～1.08（1H，m，H－2β），2.05（1H，dd，J = 13.7，4.0 Hz，H－5），1.56～1.57（1H，m，H－6α），1.43～1.45（1H，m，H－6β），1.58（1H，m，H－7α），1.36（1H，m，H－7β），1.63～1.64（1H，m，H－9），1.27～1.28（1H，m，H－11α），1.21～1.23（1H，m，H－11β），5.26（1H，t，J =3.5 Hz，H－12），1.85～1.89（2H，m，H－15），1.62（1H，m，H－16α），1.56～1.57（1H，m，H－16β），0.85（1H，s，H－18），1.65～1.66（1H，m，H－19α），1.00（1H，m，H－19β），3.52（1H，dd，J = 12.5，4.5 Hz，H－21），2.23（1H，t，J = 13.7 Hz，H－22α），2.05（1H，dd，J = 13.7，4.5 Hz，H－22β），0.99（3H，s，H－23），0.98（3H，s，H－24），0.79（3H，s，H－25），1.01（3H，s，H－26），1.18（3H，s，H－27），0.99（3H，s，H－28），1.25（3H，s，H－30）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：38.0（C－1），26.6（C－2），79.7（C－3），37.9（C－4），47.8（C－5），19.5（C－6），33.7（C－7），39.5（C－8），49.4（C－9），39.9（C－10），20.2（C－11），124.5（C－12），144.5（C－13），43.2（C－14），24.7（C－15），27.9（C－16），41.2（C－17），56.7（C－18），40.0（C－19），44.1（C－20），75.7（C－21），41.2（C－22），28.7（C－23），17.4（C－24），16.0（C－25），16.3（C－26），26.7（C－27），20.8（C－28），180.0（C－29），25.2（C－30）。經(jīng)與文獻(xiàn)［8］對(duì)照，鑒定化合物1 為3，21－dihydroxyolean－12－en－29－oic acid。

3.2 化合物2

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：471［MH］－，分子式為C30H48O4。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：3.15～3.17（1H，m，H－3），3.39（1H，m，H－22），5.22（1H，t，J = 3.6 Hz，H－12），1.16（3H，s，H－23），1.06（3H，s，H－24），0.99（3H，s，H－25），0.99（3H，s，H－26），0.91（3H，s，H－27），0.79（3H，s，H－28），0.78（3H，d，J = 6.4 Hz，H－29）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：39.1（C－1），27.9（C－2），79.7（C－3），40.1（C－4），56.6（C－5），18.9（C－6），33.6（C－7），41.4（C－8），46.5（C－9），39.9（C－10），24.3（C－11），126.8（C－12），139.5（C－13），43.5（C－14），28.7（C－15），22.4（C－16），38.0（C－17），54.0（C－18），33.9（C－19），35.4（C－20），75.3（C－22），28.8（C－23），17.4（C－24），16.2（C－25），16.3（C－26），24.5（C－27），27.5（C－28），19.5（C－29），179.2（C－30）。經(jīng)與文獻(xiàn)［9］對(duì)照，鑒定化合物2 為3β，22βdihydroxy－urs－12－en－30－oic acid。

3.3 化合物3

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：470.340 6［M + H］+，分子式為C30H46O4。1H－NMR（C5D5N，600 MHz），δ：5.26（1H，br. t，H－12），1.06（3H，s，H－23），1.05（3H，s，H－24），0.98（3H，s，H－25），0.99（3H，s，H－26），1.19（3H，s，H－27），1.28（3H，s，H－28），1.15（3H，s，H－29）。13C－NMR（C5D5N，150 MHz），δ：39.3（C－1），34.3（C－2），216.1（C-3），47.3（C-4），55.1（C－5），19.7（C－6），32.4（C－7），40.2（C－8），47.0（C－9），36.6（C－10），23.4（C－11），125.4（C－12），138.9（C－13），42.9（C－14），26.3（C－15）），21.2（C－16），39.5（C－17），58.0（C－18），34.8（C－19），51.3（C－20），34.3（C－21），77.1（C－22），26.5（C－23），21.5（C－24），15.3（C－25），16.7（C－26），23.7（C－27），25.1（C－28），18.6（C－29），176.0（C－30）。經(jīng)與文獻(xiàn)［10］對(duì)照，鑒定化合物3為demethylregelin。

3.4 化合物4

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：484.357 2［M + H］+，分子式為C31H48O4。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：5.29（1H，t，J = 3.1 Hz，H－12），3.53（1H，dd，J = 12.5，4.4 Hz，H－22），1.13（3H，s，H－23），1.11（3H，s，H－24），1.09（3H，s，H－25），1.08（3H，s，H－26），1.22（3H，s，H－27），1.02（3H，s，H－28），1.27（3H，s，H－30），3.68（3H，s，31－OCH3）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：39.5（C－1），35.1（C－2），220.2（C－3），47.8（C－4），56.5（C－5），20.7（C－6），33.2（C－7），41.1（C－8），48.5（C－9），37.8（C－10），23.9（C－11），124.3（C－12），144.6（C－13），43.3（C－14），26.6（C－15），20.2（C－16），37.9（C－17），48.1（C－18），41.2（C－19），40.4（C－20），37.3（C－21），75.6（C－22），26.6（C－23），21.9（C－24），15.7（C－25），17.3（C－26），25.2（C－27），24.7（C－28），179.8（C－29），20.8（C－30），52.5（C－31）。經(jīng)與文獻(xiàn)［11］對(duì)照，鑒定化合物4 為methyl3－oxo－22a－h(huán)ydroxy－olean－12－ene－29－oate。

3.5 化合物5

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：455.68［M + H］+，分子式為C30H46O3。1H－NMR（C5D5N，600 MHz），δ：3.47（1H，dd，J=11.1，4.9 Hz，H－3），5.34（1H，t，J=3.4 Hz，H－12），4.17（1H，d，J=5.4 Hz，H－22），1.07（3H，s，H－23），0.80（3H，s，H－24），1.04（3H，s，H－25），0.94（3H，s，H－26），1.22（3H，s，H－27），0.90（3H，s，H－28），1.22（3H，s，H－30）。13CNMR（C5D5N，150 MHz），δ：39.3（C－1），27.9（C－2），78.0（C－3），39.0（C－4），55.7（C－5），18.7（C－6），33.4（C－7），39.7（C－8），47.8（C－9），37.2（C－10），23.7（C－11），124.9（C－12），136.1（C－13），43.5（C－14），24.6（C－15），24.0（C－16），35.4（C－17），43.2（C－18），40.2（C－19），39.5（C－20），33.8（C－21），83.2（C－22），28.7（C－23），15.8（C－24），16.6（C－25），17.1（C－26），25.6（C－27），24.8（C－28），182.6（C－29），21.1（C－30）。經(jīng)與文獻(xiàn)［12］對(duì)照，鑒定化合物5為Wilfor－lide A。

3.6 化合物6

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：346.213 9［M + H］+，分子式為C21H30O4。1H－NMR（CDCl3，600 MHz），δ：2.05（1H，ddd，J=13.3，8.6，8.2 Hz，H－1α），2.43（1H，ddd，J = 13.3，8.6，3.7 Hz，H－1β），2.61（1H，dt，J=16.3，8.2 Hz，H－2α），2.70（1H，ddd，J=16.3，8.6，3.7 Hz，H－2β），1.67（1H，dd，J=12.2，5.9 Hz，H－6β），1.94～1.97（1H，m，H－6α），2.49（1H，ddd，J = 18.8，12.2，6.7 Hz，H－7α），2.79（1H，ddd，J = 18.8，5.9，4.6 Hz，H－7β），6.36（1H，s，H－11），3.46（1H，sep，J = 7.2 Hz，H－15），1.31（6H，d，J = 7.2 Hz，H－16，17），1.34（3H，s，H－18），4.07（3H，d，J = 11.3 Hz，H－19），1.29（3H，s，H－20），3.76（3H，s，12－OMe）。13C－NMR（CDCl3，150 MHz），δ：37.4（C－1），35.0（C－2），51.1（C－4），51.0（C－5），19.3（C－6），24.5（C－7），114.0（C－8），145.4（C－9），37.2（C－10），101.0（C－11），157.1（C－12），119.5（C－13），151.7（C－14），24.5（C－15），21.1（C－16），21.0（C－17），22.3（C－18），65.8（C－19），25.5（C－20），55.9（OMe）。經(jīng)與文獻(xiàn)［13］對(duì)照，鑒定化合物6為wilforol F。

3.7 化合物7

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：337［M +Cl］-，分子式為C20H27O2。1H－NMR（CDCl3，600 MHz），δ：2.03（1H，dd，J = 13.4，7.7 Hz，H－1α），1.80（1H，m，H－1β）1.56（1H，m，H－2α），1.65（1H，m，H－2β），1.88（1H，m，H－3α），0.96（1H，m，H－3β），1.43（1H，dd，J = 13.0，1.7 Hz，H－5），1.22～1.31（1H，m，H－6α），2.24～2.29（1H，m，H－6β），2.75（1H，dd，J =16.3，6.0 Hz，H－7α），2.50～2.56（1H，m，H－7β），6.79（1H，d，J = 8.2 Hz，H－11），6.95（1H，d，8.2 Hz，H－12），3.05～3.09（1H，m，H－15），1.36（3H，d，J =4.0 Hz，H－16），1.34（3H，d，J=4.0 Hz，H－17），1.00（3H，s，H－18），3.80（1H，d，J = 11.0 Hz，H－19），3.50（1H，d，J = 11.0 Hz，H－19），1.13（3H，s，H－20）。13C－NMR（CDCl3，150 MHz），δ：39.2（C－1），19.2（C－2），35.3（C－3），37.6（C－4），50.7（C－5），18.7（C－6），25.0（C－7），148.8（C－8），120.6（C－9），38.8（C－10），116.7（C－11），123.5（C－12），130.2（C－13），150.3（C－14），27.0（C－15），22.6（C－16），22.9（C－17），26.9（C－18），65.5（C－19），25.8（C－20）。經(jīng)與文獻(xiàn)［14］對(duì)照，鑒定化合物7 為abieta－8，11，13－triene－14，19－diol。

3.8 化合物8

白色無(wú)定形 粉 末。HR－ESI－MS m/z：314.46［M+］，分子式為C21H30O2。1H－NMR（CDCl3，600 MHz），δ：2.13（1H，m，H－1），1.17（1H，m，H－1），1.72（1H，dt，J = 13.7，3.4 Hz，H－2），1.58（1H，m，H－2），1.35（1H，m，H－3），1.20（1H，m，H－3），1.28（1H，dd，J =12.5，2.1 Hz，H－5），1.88（1H，dt，J = 12.5，7.8 Hz，H－6），1.61（1H，m，H－6），2.90（1H，ddd，J = 17.3，7.8，1.2 Hz，H－7），2.63（1H，ddd，J = 17.3，12.5，7.8 Hz，H－7），6.41（1H，s，H－11），3.41（1H，sept，J = 7.2 Hz，H－15），1.37（3H，d，J = 7.2 Hz，H－16），1.35（3H，d，J= 7.2 Hz，H－17），0.94（3H，s，H－18），0.91（3H，s，H－19），1.16（3H，s，H－20），3.68（3H，s，OMe）。經(jīng)與文獻(xiàn)［15］對(duì)照，鑒定化合物8 為（4bS，8aS）－2－isopropyl－1－methoxy－4b，8，8－trimethyl－4b，5，6，7，8，8a，9，10－octahydrophenanthren－3－ol。

3.9 化合物9

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：463.145 2［M + HCOO］－，分子式為C18H26O11。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：5.94（1H，brs，H－1），7.55（1H，s，H－3），4.02（1H，dd，J = 9.4，4.6 Hz，H－5），2.47（1H，dd，J = 14.3，9.4 Hz，H－6β），2.77（1H，dd，J =14.3，4.6 Hz，H－6α），3.66（1H，s，7－OCH3），6.13（1H，dq，J=7.2，1.5 Hz，H－8），1.76（3H，dd，J=7.2，1.5 Hz，H－10），3.74（1H，s，11－OCH3），4.83（1H，d，J = 7.9 Hz，H－1'），3.33～3.43（4H，m，H－2'，3'，4'，5'），3.7（1H，dd，J = 12.0，5.3 Hz，H－6'），3.90（1H，m，H－6'）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：95.1（C－1），155.1（C－3），109.4（C－4），31.8（C－5），41.0（C－6），173.6（C－7），52.2（7－OMe），124.8（C－8），130.5（C－9），13.5（C－10），168.6（C－11），51.9（11－OMe），100.9（C－1'），74.7（C－2'），78.4（C－3'），71.4（C－4'），77.9（C－5'），62.7（C－6'）。經(jīng)與文獻(xiàn)［16］對(duì)照，鑒定化合物9為木犀欖苷二甲酯。

3.10 化合物10

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：376［M］+。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：7.14（1H，d，J=2.0 Hz，H－2），6.74（1H，d，J = 8.1 Hz，H－5），6.87（1H，dd，J = 8.1，2.0 Hz，H－6），4.72（1H，d，7.3 Hz，H－7），2.29（1H，m，H－8），3.82（1H，overlap，H－9），3.74（1H，dd，J = 11.4，5.7 Hz，H－9），6.91（1H，brs，H－2'），6.72（1H，overlap，H－5'），6.72（1H，overlap，H－6'），2.99（1H，d，J = 14.0 Hz，H－7'），2.92（1H，d，J =14.0 Hz，H－7'），3.81（1H，m，H－9'），3.60（1H，d，J =9.1 Hz，H－9'），3.85（2H，s，3，3'－OMe）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：135.4（C－1），111.6（C－2），149.0（C－3），147.2（C－4），115.7（C－5），120.8（C－6），85.8（C－7），61.9（C－8），60.8（C－9），130.4（C－1'），115.2（C－2'），148.6（C－3'），146.2（C－4'），115.8（C－5'），123.9（C－6'），40.6（C－7'），82.6（C－8'），78.0（C－9'），56.4（3，3'－OMe）。經(jīng)與文獻(xiàn)［17］對(duì)照，鑒定化合物10 為（7R，8S，8'R）－4，9，4'，8'－四羥基－3，3'－二甲氧基－7，9'－單環(huán)氧木脂素。

3.11 化合物11

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：289［MI］－。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：4.86（1H，s，H－2），4.17～4.19（1H，m，H－3），2.84～2.88（1H，m，H－4），2.72～2.76（1H，m，H－4），5.93（1H，d，J=2.3 Hz，H－6），5.91（1H，d，J = 2.3 Hz，H－8），6.76（1H，d，J= 8.2 Hz，H－3'），6.80（1H，dd，J= 1.6，8.2 Hz，H－4'），6.97（1H，d，J = 1.6 Hz，H－6'）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：79.9（C－2），67.5（C－3），29.3（C－4），157.4（C－5），96.4（C－6），158.0（C－7），95.9（C－8），157.7（C－9），100.1（C－10），132.3（C－1'），145.8（C－2'），119.4（C－3'），115.9（C－4'），145.8（C－5'），115.3（C－6'）。經(jīng)與文獻(xiàn)［18］對(duì)照，鑒定化合物11為3，4－二氫－2－（2，5－二羥基苯基）－2－氫－3，5，7－三羥基苯并吡喃。

3.12 化合物12

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：279［M +H］+，分子式為C18H30O2。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：0.88（3H，t，J=6.9 Hz，CH3），4.06（1H，dd，J=11.4，6.3 Hz，H－1α），4.15（1H，dd，J = 11.4，4.4 Hz，H－1β），3.81（1H，m，H－2），3.55（1H，m，H－3α），3.65（1H，s，H－3β），2.35（2H，t，J = 7.5 Hz，H－2'），1.26～1.29（8H，m，H－5'，6'，16'，17'），1.30～1.31（6H，overlap，H－4'，7'，15'），1.61（2H，m，H－3'），2.05～2.06（4H，overlap，H－8'，14'），2.78（2H，t，J =6.8 Hz，H－11'），5.34（4H，overlap，H－9'，10'，12'，13'）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：34.9（C－2'），30.2（C－3'），30.2（C－4'），30.3（C－5'），30.5（C－6'），32.7（C－7'），28.1（C－8'），28.2（C－14'），26.5（C－11'），30.7（C－15'），26.0（C－16'），23.6（C－17'），14.4（C－18'）。經(jīng)與文獻(xiàn)［19］對(duì)照，鑒定化合物12為phospholipase A2。

3.13 化合物13

白色無(wú)定形粉末。1H－NMR（C5D5N，600 MHz），δ：2.28（2H，t，J = 7.4 Hz，H－2），1.23～1.29（26H，overlap，H－3－15），0.74（3H，t，J = 6.9 Hz，CH3）。13C－NMR（C5D5N，150 MHz），δ：176.0（C－1），34.4（C－2），25.3（C－3），29.7（C－4），29.7（C－5），29.7（C－6），29.7（C－7），29.7（C－8），29.4（C－9），29.6（C－10），29.4（C－11），29.3（C－12），29.5（C－13），31.9（C－14），22.7（C－15），13.8（C－16）。經(jīng)與文獻(xiàn)［20］對(duì)照，鑒定化合物13為十六烷酸。

3.14 化合物14

白色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS m/z：325［M +HCOOH－H］－。1H－NMR（CD3OD，600 MHz），δ：2.27（2H，t，J = 7.4 Hz，H－2），1.62（2H，m，H－3），1.34（14H，m，H－4，5，6，7，15，16，17），2.09（4H，overlap，H－8，14），5.36（4H，overlap，H－9，10，12，13），2.78（2H，t，J = 6.7 Hz，H－11），0.91（3H，t，J = 6.6 Hz，H－18）。13C－NMR（CD3OD，150 MHz），δ：177.7（C－1），35.0（C－2），32.6（C－3），30.2（C－4），30.2（C－5），30.3（C－6），30.5（C－7），28.2（C－8），129.0（C－9），130.9（C－10），26.6（C－11），130.8（C－12），129.1（C－13），28.2（C－14），30.7（C－15），26.1（C－16），23.6（C－17），14.5（C－18）。經(jīng)與文獻(xiàn)［21］對(duì)照，鑒定化合物14為亞油酸。

4 結(jié)果與討論

本研究對(duì)東北雷公藤正丁醇層進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分分離，共得到14個(gè)化合物，包括5個(gè)三萜類化合物（1～5），3 個(gè)二萜類化合物（6～8），一個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物（9），一個(gè)木脂素類化合物（10），一個(gè)酚類化合物（11），3 個(gè)酚酸類化合物（12～14）。其中化合物3、4、6、7、8、9、10、12 為首次從衛(wèi)矛科植物中分離得到。本研究進(jìn)一步豐富了東北雷公藤的化學(xué)成分，為深入挖掘東北雷公藤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，合理利用其藥用資源提供了科學(xué)依據(jù)。