不同廠家羥苯磺酸鈣膠囊溶出曲線相似性研究

蘇 峰，汪 萍，魯勝男，劉為中，何廣衛(wèi)

(1 合肥醫(yī)工醫(yī)藥股份有限公司，安徽 合肥 230088；2 藥物一致性評價及高端制劑安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230088；3 中國藥科大學，江蘇 南京 211198)

羥苯磺酸鈣是一種新型的血管保護藥，自問世以來，已在臨床上獲得了廣泛的應(yīng)用，于1997年載入《歐洲藥典》，1998年載入《英國藥典》，國內(nèi)于2001年投入市場。羥苯磺酸鈣臨床最早用于糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療，現(xiàn)已可用于糖尿病腎病、各種病因所致的慢性腎功能不全、冠心病等疾病的治療[1-2]。目前，進口和國內(nèi)生產(chǎn)的羥苯磺酸鈣制劑分別為膠囊劑和片劑，根據(jù)CDE公布的仿制藥參比制劑目錄公布，其膠囊劑和片劑的參比制劑均已明確(膠囊劑參比制劑序號為8-110，片劑參比制劑序號為23-76)，羥苯磺酸鈣膠囊參比制劑是由奧地利依比威大藥廠(Ebewe Pharma)進口，進口注冊證號為H20140641，商品名為導升明(DOXIUM?)，為《中國藥典》2015版二部收載品種[3-4]。國內(nèi)文獻已有羥苯磺酸鈣制劑的耐受性、藥動學研究報道，但尚未有市售羥苯磺酸鈣膠囊溶出曲線相似性研究的報道。

本研究的主要目的是對參比制劑和國內(nèi)不同廠家羥苯磺酸鈣膠囊在多種不同pH溶出介質(zhì)中的體外溶出特性進行評價，采用f2相似因子法和溶出效率(DE)對試驗藥品與參比制劑的體外溶出度進行比較，為仿制藥一致性評價體外溶出分析提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與材料

AL104電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；XS105電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；FE-20型pH計，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；FAVD-25真空脫氣機，上海富科思分析儀器有限公司；708-DS自動取樣溶出儀，安捷倫科技有限公司；UV-2700紫外可見分光光度計，島津儀器(蘇州)有限公司；0.45 μm微孔濾膜，上海半島實業(yè)有限公司凈化器材廠。

1.2 藥品與試劑

羥苯磺酸鈣對照品，中國藥品生物制品檢定所；羥苯磺酸鈣膠囊參比制劑(500 mg)，依比威大藥廠；國產(chǎn)羥苯磺酸鈣制劑(250 mg，A制劑)；國產(chǎn)羥苯磺酸鈣制劑(250 mg，B制劑)；國產(chǎn)羥苯磺酸鈣制劑(500 mg，C制劑)；乙酸(分析純)，西隴科學股份有限公司；三水合乙酸鈉(分析純)，西隴科學股份有限公司；鹽酸(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；磷酸二氫鉀(分析純)，上海潤捷化學試劑有限公司；氫氧化鈉(分析純)，西隴科學股份有限公司；純化水，合肥醫(yī)工醫(yī)藥股份有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的配制

①水：直接取純化水。②0.1 mol/L鹽酸：按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術(shù)指導原則》[5]方法配制，取濃鹽酸9 mL，加水稀釋至1000 mL，搖勻，即得。③pH 3.8醋酸鹽緩沖液：按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術(shù)指導原則》方法配制，稱取0.67 g三水合乙酸鈉及22.6 mL 2 mol/L醋酸溶液(取120.0 g (114 mL)冰醋酸用水稀釋至1000 mL，即得)，加水溶解并稀釋至1000 mL，搖勻，即得。④pH5.5磷酸鹽緩沖液：按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術(shù)指導原則》方法配制，取250 mL 0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液(取27.22 g磷酸二氫鉀，用水溶解并稀釋至1000 mL)與9.0 mL 0.2 mol/L氫氧化鈉溶液(取8.00 g氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至1000 mL)混合后，加水稀釋至1000 mL，搖勻，即得。

2.2 測定方法

取不同廠家羥苯磺酸鈣制劑，照溶出度測定法[6]，取羥苯磺酸鈣膠囊12粒，分別以“2.1”項下的溶出介質(zhì)各900 mL，采用《中國藥典》2015年版四部0931 溶出度與釋放度測定法第一法(籃法)，設(shè)定轉(zhuǎn)速為100 rpm，分別于15，30，60，90，120，180 min取樣10 mL，并同時補充相同溫度、相同體積的溶出介質(zhì)，濾過，濾液用相應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋成每1 mL中約含31 μg的溶液，另取羥苯磺酸鈣對照品適量，加相應(yīng)介質(zhì)溶解并稀釋成每1 mL中約含31 μg的溶液，取上述兩種溶液按照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2015年版四部0401紫外-可見分光光度法)，在301 nm波長處分別測定各時間點吸光度，計算累積溶出度。另取羥苯磺酸鈣膠囊參比制劑，平行操作，測定其在不同溶出介質(zhì)中各對應(yīng)時間點的累積溶出度，繪制溶出曲線。

2.3 標準曲線的繪制

取羥苯磺酸鈣對照品31 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別移取5 mL、3 mL、2 mL、5 mL、3 mL至100 mL、50 mL、25 mL、50 mL、25 mL，配成濃度分別為15.5 μg/mL、18.6 μg/mL、24.8 μg/mL、31 μg/mL、37.2 μg/mL的溶液，測定其在301 nm處的吸光度，以樣品的濃度(C，mg/mL)為橫坐標，吸光度值(A)為縱坐標，作二次回歸得到回歸方程及相關(guān)系數(shù)，回歸方程為A=1.765×10-2C，r=0.9997，表明線性關(guān)系良好，線性范圍為15.5～37.2 μg/mL。

2.4 準確度試驗

按照羥苯磺酸鈣標示量的80%、100%、120%，分別精密稱取羥苯磺酸鈣約260 mg、417 mg、521 mg及處方配比量的相應(yīng)輔料，各平行3份，混勻，分別置200 mL量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液3 mL至200 mL量瓶中，介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取羥苯磺酸鈣對照品適量，置容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液超聲溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取溶液適量，并用介質(zhì)稀釋制成每1 mL中約含31 μg的溶液，作為對照溶液；按上述方法測定吸光度，計算平均回收率及RSD值，結(jié)果見表1。在高、中、低三個不同濃度下，本品羥苯磺酸鈣的回收率均在98%～102%之間，且各次測得結(jié)果間相對標準偏差均小于2%，表明本方法回收率良好。

表1 回收率試驗測定結(jié)果(n=9)

2.5 重復性試驗

精密稱取羥苯磺酸鈣膠囊內(nèi)容物研粉末適量，0.1 mol/L鹽酸溶液超聲溶解，濾過，配制成含羥苯磺酸鈣約低、中、高三種濃度的溶液，精密量取1 mL(各6份)，分別置25 mL量瓶中，0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，在最大吸收波長處分別測定吸光度，考察重復性，結(jié)果見表2。在高、中、低三個不同濃度下，6份樣品測定結(jié)果相對標準偏差均不大于2%，表明本方法重復性良好。

表2 重復性試驗結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗

取重復性試驗高、中、低三個不同濃度項下各一份樣品溶液，于室溫放置0、2、4、8、12、24 h，在最大吸收波長處分別測定吸光度值，計算羥苯磺酸鈣的A的相對標準偏差，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果見表3。室溫放置24 h，各濃度項下主成分含量的相對標準偏差均不大于2%，可認為室溫放置24 h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.7 溶出曲線測定與比較

2.7.1 溶出曲線測定結(jié)果

圖1 不同廠家制劑于0.1 mol/L鹽酸溶液中溶出曲線(n=12)

圖2 不同廠家制劑于pH 3.8醋酸鹽緩沖液中溶出曲線(n=12)

圖3 不同廠家制劑于pH 5.5磷酸鹽緩沖液中溶出曲線 (n=12)

圖4 不同廠家制劑于水中溶出曲線 (n=12)

分別在4種介質(zhì)中，按“2.2”項下方法測定，得不同廠家羥苯磺酸鈣制劑與參比制劑在4種介質(zhì)中累積溶出度曲線。研究結(jié)果見圖1～圖4。

2.7.2 制劑曲線相似性比較

本研究采用f2相似因子法和溶出效率(DE)法對試驗藥品與參比制劑的溶出行為進行比較。比較結(jié)果見表4。相似因子f2的數(shù)學表達式為：

式中，Rt為t時間對照藥品平均累積溶出百分數(shù)；Tt為t時間試驗藥品平均累積溶出百分數(shù)；n為取樣點的個數(shù)。如果50≤f2≤100，可認為2種制劑的溶出曲線相似。

溶出效率(DE)定義為時間點t1和t2間溶出曲線下的面積在相同時間100%溶出度的長方形面積中所占的百分比[6]。公式表達如下：時間點t1和t2間溶出曲線下的面積在相同時間100%溶出度的長方形面積中所占的百分比。公式表達如下：

式中y為溶出的百分率。曲線下面積計算方法有梯形法和Simpson法[7]。

從表4可知，A、B、C制劑相似因子f2值遠小于50，進口Doxium膠囊在4種溶出介質(zhì)中溶出效率DE均低于A、B、C三種不同國產(chǎn)制劑。

從圖1～圖4看出，A、B和C制劑較參比制劑Doxium于4種溶出介質(zhì)中的溶出快速，對照藥品于0.1 mol/L鹽酸溶液和pH 3.8醋酸鹽溶液中60 min累積溶出量達85%，pH 5.5磷酸鹽溶液和水中180 min累積溶出量達85%。A制劑和B制劑在4種溶出介質(zhì)中15 min累積溶出量均達85%，C制劑在0.1 mol/L鹽酸和pH 3.8醋酸鹽緩沖液中15 min累積溶出量均達85%，在pH 5.5磷酸鹽緩沖液中60 min累積溶出量達85%，在水中30 min累積溶出量達85%。由此可見，A、B和C制劑與參比制劑Doxium在4種不同溶出介質(zhì)中溶出曲線有明顯差異。

表4 不同廠家制劑在4種溶出介質(zhì)中溶出效率(DE)和相似因子(f2)的變化

3 結(jié) 論

溶出度試驗技術(shù)是評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段，溶出度測定作為一種簡便可行的方法，在一定條件下與制劑的生物利用度有一定的相關(guān)性，溶出度已作為一種控制藥品內(nèi)在質(zhì)量的重要指標，廣泛應(yīng)用于藥品的研發(fā)、生產(chǎn)和監(jiān)督檢驗中，而f2相似因子法是美國FDA推薦的采用溶出曲線評價產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的首選方法，可用來推測仿制制劑與原研制劑是否生物等效[8-9]。故在本次研究中采用模擬人體胃腸道的不同pH環(huán)境下的溶出介質(zhì)，以f2相似因子法考察不同市售羥苯磺酸鈣產(chǎn)品體外溶出曲線的相似性。

研究結(jié)果表明，4個不同廠家的羥苯磺酸鈣膠囊在不同pH溶出介質(zhì)中溶出行為均有顯著差異，這種溶出性能的差異除了和藥物粒度、晶型有關(guān)外，與不同廠家間輔料種類、處方配比、生產(chǎn)設(shè)備和工藝等差異密切相關(guān)[10]。各生產(chǎn)企業(yè)需深入研究原輔料及工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性，生產(chǎn)出不僅與原研制劑溶出曲線有區(qū)分力且質(zhì)量相當?shù)漠a(chǎn)品，以期為患者提供更好的藥物選擇。