藥物敏感試驗中應(yīng)注意的問題

劉明團 王敏麗 （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東 青島 266199）

隨著抗生素數(shù)量和種類的增加以及人為因素，許多細菌菌株對一種或多種抗生素產(chǎn)生了抵抗力或耐藥性，單憑臨床觀察來正確選擇治療藥物就顯得比較困難。這時，用抗菌藥物敏感性試驗(AST)就可以解決這個問題。該試驗可預(yù)測抗菌治療的效果，即AST試驗結(jié)果為“敏感”時，治療可能有效；試驗效果為“耐藥”時，使用該藥物肯定失敗。同時可以用于指導(dǎo)臨床工作者選擇使用合適的抗生素以及對細菌耐藥性的分析。藥敏試驗具有操作簡便、容易掌握等特點，成為臨床工作中必不可少的內(nèi)容。然而藥敏試驗只是一種藥物敏感性定性試驗，在試驗中容易受到諸多因素的影響，如抗菌藥物的種類、培養(yǎng)基的成分、細菌類別、試紙片質(zhì)量以及培養(yǎng)條件等因素。為提高藥敏試驗的準確性，本文介紹在實際操作過程中應(yīng)注意的問題。

1 正確配制培養(yǎng)基

（1）培養(yǎng)基是影響藥敏試驗結(jié)果的重要因素，除要維持細菌正常生長發(fā)育外，還須不拮抗抗生素的效力，對其擴散影響較小。其中最重要的是瓊脂的種類和濃度影響較大。（2）培養(yǎng)基的其他成分及pH范圍都要保持一定的標準范圍。一般細菌用肉浸液或肉膏液培養(yǎng)基；營養(yǎng)要求較高的細菌，用含0.5%羊血的測定肉浸液或肉膏液培養(yǎng)基；測定細菌對磺胺類藥物敏感性，應(yīng)用無蛋白胨肉浸液或肉膏液培養(yǎng)基。（3）藥敏試驗一般在直徑9cm或12cm的平皿內(nèi)進行，每個平皿貼6～7個紙片。瓊脂厚度約4～6mm，不可太薄，但也不要太厚，培養(yǎng)基厚度越大藥物的抑菌環(huán)越小。一般直徑9cm的平皿，傾注培養(yǎng)基18～20ml即可。

2 選用新分離的菌株

一般使用經(jīng)培養(yǎng)6～18h的肉湯培養(yǎng)物，用肉湯或生理鹽水作1:1000或1:10倍稀釋。被檢驗的藥物原液的配制要根據(jù)其藥物實際含量配成所需要濃度。對于易潮解的藥物，稱量和配制操作過程要迅速，防治藥物吸水潮解。

3 確定培養(yǎng)時間和溫度

用滅菌棉簽蘸取試菌液，在管內(nèi)壁將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去后，在瓊脂表面均勻涂片接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60度，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周即可。倒置37oC溫箱中20min，使培養(yǎng)基表面干燥。將各種藥物紙片放置在培養(yǎng)基表面，用玻棒輕壓，使其緊貼于培養(yǎng)基上。各紙片中心相距大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣大于15mm。一般采用16～18h孵育，但不要超過24h，培養(yǎng)時間過長，細菌能恢復(fù)生長，造成抑菌環(huán)縮小。

4 保證藥敏片質(zhì)量

抑菌環(huán)直徑的大小與紙片中藥物含量有關(guān)。若在儲存期間，由于藥物變質(zhì)使其效能降低，則抑菌環(huán)變小。藥敏試驗所使用的紙片一定要在表明有效期內(nèi)使用。禁止使用過期的藥敏紙片。一般藥敏紙片密封儲存在2～8℃無霜冷凍箱內(nèi)保存。使用前將儲存容器移至室溫平衡1～2h，可避免開啟儲存容器時藥敏紙片產(chǎn)生冷凝水。

5 堅持做對照試驗

為準確判斷試驗結(jié)果，試驗中必須同時進行各種對照試驗。試驗菌株對照即在無藥物情況下，應(yīng)能夠在培養(yǎng)基內(nèi)正常生長；抗菌藥物對照即藥物原液應(yīng)該具有明顯的抑菌作用；稀釋液對照即配制抗菌藥物的稀釋液應(yīng)該無抗菌作用。試驗結(jié)果判斷時，要有精確度為1mm的游標卡尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)提供的標準，對量取的抑菌直徑作出“敏感”“耐藥”和“中介”的判斷結(jié)果。