牛副結(jié)核病的發(fā)病過程及診斷方法

王榮芳，王洪華，毛景東

（內(nèi)蒙古通遼市開魯縣種畜場動物防疫監(jiān)督管理站，內(nèi)蒙古 通遼 028400）

1 牛副結(jié)核病概述

牛副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性消耗性腸炎，對牛養(yǎng)殖業(yè)危害較大。本病在我國也一直存在，而且在規(guī)模化養(yǎng)殖逐步替代傳統(tǒng)散養(yǎng)模式的過程中其對養(yǎng)牛業(yè)的潛在威脅逐漸凸顯。因此，了解副結(jié)核病的發(fā)病過程并及時診斷對控制該病的發(fā)生至關(guān)重要。

牛副結(jié)核菌感染的臨床表現(xiàn)包括腹瀉、消瘦以及產(chǎn)奶量減少等。這些臨床癥狀通常會在初次感染后兩到五年出現(xiàn)，發(fā)病牛腸壁會明顯增厚，抑制營養(yǎng)吸收，隨著病程的發(fā)展最終消瘦脫水致死。多數(shù)牛副結(jié)核菌感染發(fā)生在犢牛期，被糞便污染的水、牛奶等均為感染途徑，同時也可能垂直傳播。牛對副結(jié)核菌感染的敏感性具有年齡依賴性，犢牛在前3 個月最易感，在4～12 月齡易感性逐漸減弱，這時感染副結(jié)核菌需要更高的感染劑量和時間。

2 牛副結(jié)核病發(fā)病過程

2.1 副結(jié)核菌入侵腸道

病原菌最早可經(jīng)扁桃體黏膜侵入宿主，而扁桃體隱窩可能是副結(jié)核菌的感染部位，細(xì)菌經(jīng)扁桃體進入后可隨血液擴散到腸系膜淋巴結(jié)和回腸，但多數(shù)研究表明其入侵部位主要在回腸。副結(jié)核菌侵入腸道后，小腸淋巴結(jié)中M 細(xì)胞攜帶其穿過上皮細(xì)胞，并將細(xì)菌釋放于黏膜下層，位于黏膜下層的細(xì)菌可被巨噬細(xì)胞吞噬。有報道稱，將副結(jié)核菌接種于回腸后，5 h內(nèi)感染部位巨噬細(xì)胞中即可檢測到副結(jié)核菌的存在，而一旦副結(jié)核菌成功在巨噬細(xì)胞內(nèi)寄生，感染將進入下一階段。

2.2 副結(jié)核菌入侵巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞吞噬副結(jié)核菌后，首先將試圖消滅副結(jié)核菌。由Th-1型淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子，如干擾素-γ等可以活化巨噬細(xì)胞，并對吞噬的副結(jié)核菌產(chǎn)生殺滅作用，部分免疫力強的?？梢猿晒ο麥缜秩氲母苯Y(jié)核菌，不會發(fā)展為副結(jié)核病。但許多受感染牛不能清除副結(jié)核菌則會導(dǎo)致其在宿主巨噬細(xì)胞內(nèi)持續(xù)生存并繼續(xù)擴增。目前，副結(jié)核菌胞內(nèi)存活機制還未完全闡述清楚，但有觀點認(rèn)為副結(jié)核菌可以阻止巨噬細(xì)胞的成熟和酸化。一般情況下，早期感染中，宿主的天然防御機制可將副結(jié)核菌限制在腸道組織內(nèi)，感染擴散的時間會非常緩慢，這種緩慢的病程進展通常可以維持兩年以上，期間患病牛通常不會表現(xiàn)出臨床癥狀，減重和對產(chǎn)奶量下降也不明顯，檢測病原菌和抗體通常會呈陰性，而干擾素檢測結(jié)果可能為陽性。隨著病程的發(fā)展，腸黏膜和腸系膜淋巴結(jié)中的副結(jié)核菌會引發(fā)宿主的炎癥反應(yīng)，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等向該區(qū)域大量轉(zhuǎn)移，隨著炎性細(xì)胞浸潤的增強在腸內(nèi)形成肉芽腫，并隨著副結(jié)核菌的持續(xù)增殖病情逐漸加重，最終出現(xiàn)臨床癥狀。肉芽腫的形成雖會破壞黏膜層，但同時也可以將吞噬副結(jié)核菌的巨噬細(xì)胞限制在其中，使病牛呈隱型感染多年也沒有明顯的臨床癥狀。到病程后期，機體細(xì)胞免疫逐漸減弱，由Th1型免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)向Th2型免疫反應(yīng)，而一旦進入這一過程，病程將會快速發(fā)展，此時可在病牛糞便中檢測到副結(jié)核菌，同時血清抗體檢測呈陽性，臨床癥狀也會更加明顯。

2.3 病程后期

隨著病程發(fā)展，腸道內(nèi)病變將逐漸嚴(yán)重，肉芽腫浸潤的范圍將逐步擴散并影響到空腸、回腸和盲腸，腸道內(nèi)大量細(xì)胞浸潤將影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進而產(chǎn)生腹瀉等癥狀，并出現(xiàn)低蛋白血癥。腹瀉癥狀可反復(fù)出現(xiàn)數(shù)次且藥物治療無效，產(chǎn)奶量隨之逐漸減少甚至停止泌乳。臨床后期，病牛將向環(huán)境中排放大量病原菌，污染畜舍環(huán)境、土壤和水源等。此時多數(shù)患病牛將被淘汰，如未淘汰病牛將因虛弱脫水而死亡。

3 副結(jié)核病的診斷方法

3.1 糞便細(xì)菌診斷

采集疑似患病牛糞便或直腸刮取物，用適量蒸餾水沖洗并過濾，制成細(xì)菌涂片后抗酸染色觀察，如存在紅色抗酸短桿菌則可初步懷疑感染，后續(xù)也可對沖洗物進行PCR診斷，擴增副結(jié)核菌特異性序列IS900，如獲得目的條帶則可確認(rèn)感染；同時也可對糞便中副結(jié)核菌進行分離培養(yǎng)，但副結(jié)核菌生長緩慢，初次分離需6 周以上時間才可獲得菌落，如實驗條件不夠嚴(yán)格很難獲得。此外，在感染前期，病牛糞便中不會一直帶菌，如有其他抗酸菌存在可能干擾檢測結(jié)果。

3.2 變態(tài)反應(yīng)

在副結(jié)核感染的診斷中，變態(tài)反應(yīng)診斷是最早應(yīng)用的方法。將副結(jié)核菌素皮內(nèi)注射待檢牛，72 h 觀察變態(tài)反應(yīng)情況，測量反應(yīng)前后皮厚差異，根據(jù)OIE 診斷標(biāo)準(zhǔn)進行判斷。此方法可在發(fā)病前期進行診斷，但在病程后期，癥狀已較明顯的病牛變態(tài)反應(yīng)可能會消失。此方法在檢測中可能會受到其他分枝桿菌的干擾，特異性不高，還應(yīng)結(jié)合其他診斷方法準(zhǔn)確診斷。

3.3 ELISA診斷

ELISA 診斷是目前發(fā)展較快也是應(yīng)用較普遍的檢測方法，目前主要是通過檢測全血中干擾素-γ的水平來診斷副結(jié)核病感染。此方法檢測敏感性較高，可用于大量牛群調(diào)查，市場上已有商品化的ELISA試劑盒銷售。

4 防控措施

目前，治療副結(jié)核病并無特效抗生素，發(fā)達國家在發(fā)現(xiàn)副結(jié)核感染的病牛后通常會立即淘汰。雖然已有商品化的疫苗，但預(yù)防效果不佳且干擾診斷，所以并未大面積推廣使用。因此，提高飼養(yǎng)管理水平仍是現(xiàn)階段控制副結(jié)核病的最有效方法，在飼養(yǎng)過程中應(yīng)及時清理糞便，加強新生犢牛護理，盡量減少與成年牛的接觸，使?fàn)倥Ｅc副結(jié)核菌的接觸率和接觸時間降低，可以有效控制該病發(fā)生。此外，規(guī)?；B(yǎng)殖場應(yīng)定期進行檢測并及時淘汰病牛。