強(qiáng)直性脊柱炎患者血清IL-35、IL-17水平變化及其臨床意義

張宇，沈雪，吳青青，方宗宇，馬莉

1 貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴陽550004；2 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院

強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是以中軸脊柱和骶髂關(guān)節(jié)受累為主的一種慢性炎癥性自身免疫性疾病，可伴發(fā)關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴(yán)重者可發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直，其確切的病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未清楚[1]。大量研究[2，3]表明，免疫功能異常與AS發(fā)病密切相關(guān)，尤其以CD4+T細(xì)胞亞群紊亂最為顯著。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和輔助性T細(xì)胞17(Th17)是近年來研究較多的CD4+T細(xì)胞亞群，Treg/Th17細(xì)胞亞群比例或功能失衡在AS的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。白細(xì)胞介素-35(IL-35)是一種主要由Treg細(xì)胞分泌的抑制性細(xì)胞因子，屬于IL-12家族新成員，由α亞基IL-12 p35和β亞基EB病毒誘導(dǎo)基因3(EBI3)經(jīng)二硫鍵結(jié)合形成[4]。作為一種新型抑制性細(xì)胞因子，IL-35可通過促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖、抑制Th17細(xì)胞分化和IL-17分泌參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用。研究[5～7]發(fā)現(xiàn)，IL-35在多種免疫介導(dǎo)性疾病中發(fā)揮重要作用，如炎癥性腸病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、變應(yīng)性鼻炎等。IL-17是主要由Th17細(xì)胞分泌、具有促進(jìn)炎癥發(fā)展的特異性細(xì)胞因子，可以促進(jìn)白細(xì)胞的遷移和活化，在自身免疫性疾病、腫瘤等疾病中發(fā)揮著重要作用[8]。目前關(guān)于IL-35和IL-17在AS疾病發(fā)生發(fā)展中的作用鮮有報(bào)道。本研究觀察了AS患者血清IL-35、IL-17水平變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年9月～2019年3月貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院收治的AS患者77例，記為AS組，男67例、女10例，年齡14～48歲，年齡(28.61±8.26)歲，病程1個(gè)月～32年，病程(5.62±5.80)年，人類白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)均為陽性，采用Bath AS疾病活動(dòng)指數(shù)(BASDAI)評分表對AS患者進(jìn)行評分，平均(3.49±1.57)分。77例患者均符合美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ACR)1984年修訂的AS診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]且未接受過激素、抗風(fēng)濕藥物及生物制劑等治療。另選取同期體檢健康者59例作為正常對照組，男44例、女15例，年齡19～42歲，年齡(27.40±5.01)歲，所有健康體檢者均無自身免疫疾病史、近期感染史，心肝腎功能均正常。兩組研究對象在年齡、性別等一般資料方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他免疫相關(guān)性疾病、血液系統(tǒng)疾病、心肝腎功能嚴(yán)重?fù)p害、急慢性感染、妊娠期及哺乳期女性。本研究經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審核批準(zhǔn)。研究對象均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 試劑和儀器 HLA-B27試劑盒購自BD公司，ELISA試劑盒購自eBioscience公司，Hs-CRP試劑盒購自德國羅氏公司，流式細(xì)胞儀FACSCantoTMⅡ購自美國BD公司，SYM-BIO EGATA2310全自動(dòng)洗板機(jī)、SYM-BIO2510酶標(biāo)板振蕩器購自上海新波生物技術(shù)有限公司，Well Scan K3酶標(biāo)儀購自芬蘭雷勃公司，羅氏702全自動(dòng)生化儀購自德國羅氏公司。

1.3 兩組血清IL-35、IL-17檢測 清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集肘靜脈血5 mL，置于未添加抗凝劑的真空采血管中，3 800 r/min離心15 min，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IL-35、IL-17水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 兩組血清炎性活動(dòng)指標(biāo)紅細(xì)胞沉降率(ESR)、超敏C反應(yīng)蛋白(Hs-CRP)檢測 清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集肘靜脈血2 mL，枸櫞酸鈉抗凝，采用魏氏法檢測ESR。清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集肘靜脈血5 mL，置于未添加抗凝劑的真空采血管中，3 800 r/min離心15 min，分離血清，采用散射比濁法檢測Hs-CRP。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IL-35、IL-17水平比較 AS組血清IL-35、IL-17水平分別為(20.79±11.26)、(24.19±14.56)pg/mL，正常對照組血清IL-35、IL-17水平分別為(41.09±18.56)、(7.21±4.67)pg/mL，兩組相比，P均<0.05。

2.2 兩組血清炎性活動(dòng)指標(biāo)ESR、Hs-CRP水平比較 AS組血清ESR、Hs-CRP水平分別為(22.23±13.59)mm/h、(11.03±11.61)mg/L，正常對照組血清ESR、Hs-CRP水平分別為(7.72±3.28)mm/h、(2.22±1.58)mg/L，兩組相比，P均<0.05。

2.3 AS患者血清IL-35水平、IL-17水平與ESR水平、Hs-CRP水平、BASDAI評分的相關(guān)性分析結(jié)果 AS患者血清IL-35水平與IL-17水平、ESR水平、Hs-CRP水平和BASDAI評分呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.327、-0.349、-0.287、-0.353，P均<0.05)，血清IL-17水平與ESR水平、Hs-CRP水平和BASDAI評分呈正相關(guān)(r分別為0.389、0.358、0.479，P均<0.05)。

3 討論

AS是一種常見于青年男性的慢性炎癥性自身免疫性疾病，其確切的病因和發(fā)病機(jī)制尚未明確。既往研究[10，11]表明，AS的發(fā)生與CD4+T細(xì)胞亞群比例或功能紊亂密切相關(guān)，主要表現(xiàn)為Th1/Th2和Treg/Th17細(xì)胞免疫失衡以及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平失調(diào)，而引起其免疫失衡的機(jī)制尚未闡明。

IL-35是最新發(fā)現(xiàn)調(diào)控Treg/Th17細(xì)胞分化的重要細(xì)胞因子，可促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖，同時(shí)抑制Th17細(xì)胞分化及其相關(guān)炎性因子IL-17的分泌[12]。有研究[13]發(fā)現(xiàn)，在CD4+T細(xì)胞亞群與胰島細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入重組IL-35(rIL-35)，能夠促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖，抑制Th17細(xì)胞分化，調(diào)控Treg/Th17比率，提高胰島細(xì)胞活性。此外，在膠原誘導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)模型中過繼轉(zhuǎn)移IL-35能促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖，抑制CD4+CD25-細(xì)胞增殖、分化，抑制IL-17分泌，并增強(qiáng)干擾素 (IFN- γ)的產(chǎn)生，有效減輕炎癥反應(yīng)從而改善膠原性關(guān)節(jié)炎癥狀[14]。同樣有研究[15]發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞在刺激后可分泌大量的IL-35，通過對CD4+T細(xì)胞的負(fù)向調(diào)控參與多種自身免疫性疾病和炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、原發(fā)性干燥綜合征、炎癥性腸病等。因此，我們推測IL-35在AS的發(fā)病過程中可能也發(fā)揮著重要的作用。

IL-17是一種由Th17細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥性細(xì)胞因子，可招募、活化中性粒細(xì)胞，誘導(dǎo)T細(xì)胞激活和刺激上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子，如腫瘤壞死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-8、IL-1等，進(jìn)而誘導(dǎo)炎癥產(chǎn)生[16]。已有研究[17，18]表明，IL-17升高與多種慢性炎癥性疾病有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，AS組患者血清IL-35水平較正常體檢者顯著降低，并且與疾病活動(dòng)度評分BASDAI呈負(fù)相關(guān)；而AS組患者血清IL-17水平較正常體檢者顯著升高，與BASDAI評分呈正相關(guān)。以上結(jié)果提示，血清IL-35變化趨勢與IL-17相反，隨著病情嚴(yán)重程度增加，AS患者血清IL-35水平進(jìn)一步降低，而IL-17水平進(jìn)一步升高。IL-35水平降低可能誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖和分化的能力減弱，導(dǎo)致AS患者的免疫系統(tǒng)異?；罨?，自身免疫耐受喪失；同時(shí)Th17細(xì)胞過度活化，釋放大量IL-17等炎性介質(zhì)，IL-17可能通過增強(qiáng)炎癥反應(yīng)而加重疾病進(jìn)展，從而介導(dǎo)AS疾病的發(fā)生發(fā)展。另外，在相關(guān)性分析中也發(fā)現(xiàn)，AS患者血清IL-35水平與IL-17水平呈負(fù)相關(guān)，也印證了IL-35對Th17細(xì)胞增殖和IL-17分泌的抑制作用減弱。血清IL-35、IL-17水平檢測有可能成為監(jiān)測AS疾病活動(dòng)度的新指標(biāo)。

本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，AS患者血清IL-35水平與臨床炎性活動(dòng)指標(biāo)ESR和Hs-CRP水平呈負(fù)相關(guān)，IL-17水平與ESR、Hs-CRP水平呈正相關(guān)，我們推測在AS患者中血清IL-35水平降低、IL-17水平升高可能間接通過體內(nèi)復(fù)雜的體液免疫或細(xì)胞免疫網(wǎng)絡(luò)促進(jìn)炎性活動(dòng)指標(biāo)ESR、Hs-CRP表達(dá)水平上調(diào)，促進(jìn)AS炎癥的發(fā)生發(fā)展。但其確切調(diào)控機(jī)制目前尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，AS患者血清IL-35水平降低、IL-17水平升高，血清IL-35水平與IL-17水平、ESR水平、hs-CRP水平和BASDAI評分呈負(fù)相關(guān)，IL-17水平與ESR水平、Hs-CRP水平和BASDAI評分呈正相關(guān)。IL-35水平下降可能會(huì)導(dǎo)致Treg/Th17細(xì)胞免疫平衡紊亂，促進(jìn)炎性因子IL-17的產(chǎn)生，進(jìn)而在AS疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，血清IL-35、IL-17水平檢測有可能成為監(jiān)測AS疾病活動(dòng)度的新指標(biāo)，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)行相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步深入研究。