對(duì)奶牛布魯氏桿菌病檢測(cè)相關(guān)問(wèn)題的思考

1 臨床癥狀及病因分析

布魯氏桿菌屬的牛種布魯氏桿菌是奶牛布魯氏桿菌病的病原，該病具有很強(qiáng)的傳染性，種別不同的布魯氏桿菌既可以感染牛宿主，還可以進(jìn)行惡性病菌轉(zhuǎn)移。潛伏期為2周～6個(gè)月。母牛流產(chǎn)是本病的主要癥狀，常發(fā)生于懷孕第5～8個(gè)月，產(chǎn)出死胎或軟弱犢牛。流產(chǎn)時(shí)除表現(xiàn)分娩征象外，常有生殖道發(fā)炎癥狀，陰道粘膜發(fā)生粟粒大小的紅色結(jié)節(jié)，流出灰白色粘性分泌物。胎衣往往滯留，流產(chǎn)后持續(xù)排出惡露，呈污灰色或棕紅色，可持續(xù)2～3周，常發(fā)生子宮內(nèi)膜炎、乳房炎。大多數(shù)母牛只流產(chǎn)1次。公牛常發(fā)生睪丸炎或關(guān)節(jié)炎、滑膜囊炎，有時(shí)可見(jiàn)陰莖紅腫，睪丸和附睪腫大。

2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷方法及注意事項(xiàng)

2.1.1 虎紅平板凝集試驗(yàn) 虎紅平板凝集試驗(yàn)是一種簡(jiǎn)單快捷的診斷方法，可在4min內(nèi)通過(guò)對(duì)凝集反應(yīng)結(jié)果的觀(guān)察作出患病診斷，這種診斷法通常應(yīng)用于陽(yáng)性牛的初步篩選中。

實(shí)驗(yàn)方法，取一潔凈的板，畫(huà)成20mm×20mm的方格，每一格分別滴入等量的被檢血和虎紅抗原（約0.03mL，使用時(shí)先將抗原瓶搖動(dòng)，使之均勻懸?。?，攪動(dòng)血清和抗原使其混勻觀(guān)察結(jié)果。最后，結(jié)果判定如果在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象者，判為陽(yáng)性，反之則為陰性。

2.1.2 試管凝集反應(yīng) 這是我國(guó)當(dāng)下現(xiàn)行的適用于實(shí)驗(yàn)室操作的法定診斷法。被檢血清的稀釋?zhuān)话闱闆r下奶牛血清作1:50、1:100、1:200和1:400四個(gè)稀釋度。被檢奶牛血清凝集價(jià)為1:100時(shí)，判定為陽(yáng)性反應(yīng)；血清凝集價(jià)為1:50時(shí)判定為可疑反應(yīng)。

2.1.3 奶牛布病快速診斷試紙條 該方法屬于后期研發(fā)出的新型快速診斷法，也被成為膠體金法快速診斷試紙，具有快速、簡(jiǎn)單和特異性高的特點(diǎn)，檢測(cè)準(zhǔn)確性與試管凝集試驗(yàn)的相符高達(dá)97.8%，一般情況下該種方法在初檢時(shí)應(yīng)用得較多。

2.1.4 ELISA 檢測(cè)法 相比于試管凝集反應(yīng)診斷和虎紅平板凝集試驗(yàn)，ELISA抗體檢測(cè)法在病理上陰性或陽(yáng)性的判定上更能排除其他感染因素影響，大大降低了主觀(guān)判定伴隨的隨機(jī)性和不確定性。

2.2 細(xì)菌學(xué)診斷 最具可靠性和準(zhǔn)確性的實(shí)驗(yàn)室診斷方法就是分離布魯氏桿菌。從陰道分泌物、尿液、胎衣、膿汁、血液和臟器等組織做成涂片，選用沙黃、美藍(lán)鑒別法進(jìn)行染色，通過(guò)油鏡鏡檢觀(guān)察顏色變化，被染為紅色的即是布魯氏桿菌，呈現(xiàn)為藍(lán)色的是其他細(xì)菌。

3 布氏桿菌病檢測(cè)的生物安全問(wèn)題

按照病原微生物名錄及生物安全評(píng)價(jià)， 對(duì)于布魯氏菌免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、涂片、顯微觀(guān)察需在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行操作；動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在動(dòng)物三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行；活菌分離、培養(yǎng)離心、菌種凍干需在三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。對(duì)于二級(jí)及以上生物安全實(shí)驗(yàn)室必須配備生物安全柜，用于防護(hù)可能產(chǎn)生的氣溶膠。因此在進(jìn)行奶牛布氏菌相關(guān)操作時(shí)應(yīng)在生物安全柜中規(guī)范操作，做到對(duì)實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)樣本的三重防護(hù)。

4 奶牛布魯氏桿菌病防控措施

第一，強(qiáng)化飼養(yǎng)管理。在落實(shí)定期進(jìn)行衛(wèi)生消毒的基礎(chǔ)上，提升飼喂科學(xué)性，適當(dāng)增加微生物制劑增強(qiáng)對(duì)奶牛體內(nèi)病原微生物的抑制作用，提高機(jī)體免疫力。第二，加大檢測(cè)力度。要對(duì)新購(gòu)入的奶牛進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫工作，在2月以上隔離飼養(yǎng)過(guò)程中對(duì)其進(jìn)行布魯氏桿菌病檢測(cè)，經(jīng)過(guò)重復(fù)檢驗(yàn)后結(jié)果均為陰性才能正式入場(chǎng)；要保證以正規(guī)渠道購(gòu)買(mǎi)健康公牛凍精；牛群的日常管理要做好定期全群檢測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)病牛并采取離場(chǎng)隔離等措施，通過(guò)反復(fù)的檢查和淘汰來(lái)凈化牛群。第三，以犢牛為切入口培養(yǎng)健康牛群。基于良好嚴(yán)密的隔離條件，從健康公牛處獲取精液完成人工受精，經(jīng)過(guò)5～10d母牛初乳人工喂養(yǎng)后再進(jìn)行健康牛乳或者巴氏滅菌乳喂養(yǎng)。分別在第5個(gè)月和第9個(gè)月進(jìn)行免疫生物學(xué)檢測(cè)，結(jié)果均為陰性才可送入健康牛群。第四，構(gòu)建完整的牛場(chǎng)管理制度。以避免交叉感染為目的做到一畜一針的疫苗注射、一畜一消毒的人工受精器具；一旦有陽(yáng)性奶牛被檢測(cè)出，就用濃度為2%的氫氧化鈉和濃度為15%的石灰乳對(duì)病牛污染的活動(dòng)場(chǎng)所以飼養(yǎng)道具等進(jìn)行消毒；對(duì)流產(chǎn)胎兒、羊水、產(chǎn)道分泌物以及胎衣等要給予妥善的消毒處理。

結(jié)束語(yǔ)：布魯氏桿菌的致病機(jī)理較為復(fù)雜，具有多樣性的免疫反應(yīng)，常用的診斷方法有血清凝集反應(yīng)、細(xì)菌學(xué)反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)以及ELISA等檢測(cè)技術(shù)。近年來(lái)布魯氏桿菌病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，這對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展而言可謂是一個(gè)巨大的威脅，甚至可能成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。本文通過(guò)對(duì)病因和診斷方式的分析，就防控措施提出個(gè)人意見(jiàn)，愿為飼養(yǎng)和檢驗(yàn)工作提供一些借鑒信息。