腫瘤標(biāo)志物SP70在宣威肺癌中的臨床應(yīng)用研究

洪源，段勇

（1.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科；2.云南省實驗診斷研究所；3.云南省檢驗醫(yī)學(xué)重點實驗室，云南 昆明 650032）

近年來,肺癌已經(jīng)成為了全世界發(fā)病率以及死亡率最高的惡性腫瘤性疾病之一,其中非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC））占比高達(dá)全部肺癌中的80%及以上,非小細(xì)胞肺癌的類型主要有鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、大細(xì)胞癌等。絕大多數(shù)非小細(xì)胞肺癌患者在疾病發(fā)生發(fā)展的晚期才得到確診，此時可能是局部晚期或者是已經(jīng)發(fā)生了遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移的狀態(tài)，致使患者預(yù)后較差[1,2]。盡管目前關(guān)于NSCLC已進(jìn)行了很多研究,但疾病早期仍然缺乏快速、簡便、可靠的診斷方法。因此，尋找出一種早期診斷非小細(xì)胞肺癌的有效方法至關(guān)重要，也已經(jīng)成為了目前臨床工作中的重點內(nèi)容[3]。

有研究報道發(fā)現(xiàn)了一株能夠特異性識別非小細(xì)胞肺癌的抗體McAbNJ001,該抗體所具備的免疫性診斷特點具有較大的臨床意義,其所針對的靶抗原為相對分子質(zhì)量為70000的胞漿新抗原SP70，并發(fā)現(xiàn)SP70與非小細(xì)胞肺癌之間具有著密切的相關(guān)性[4]。

我們圍繞腫瘤標(biāo)志物SP70與宣威非小細(xì)胞肺癌之間的相關(guān)關(guān)系進(jìn)行分析,旨在為宣威非小細(xì)胞肺癌的診斷與治療提供合理參考依據(jù),報告如下。

1 宣威肺癌的疾病背景介紹

根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,肺癌是發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤之一[5]。世界上每年有150多萬例肺癌病例，大約80%的肺癌是非小細(xì)胞肺癌。盡管非小細(xì)胞肺癌的臨床診斷和治療技術(shù)發(fā)展迅速，但非小細(xì)胞肺癌的5年生存率仍低于15%。以下問題對臨床工作者來說仍是一個難題,位于云南省東北部的宣威地區(qū)的肺癌發(fā)病率和死亡率居全國乃至全世界首位[6]，宣威地區(qū)的肺癌發(fā)病率高，并且具有明顯的區(qū)域特異性,農(nóng)村地區(qū)肺癌發(fā)病率高于城市地區(qū),男性吸煙者和不吸煙女性之間發(fā)病率無明顯差異，死亡率明顯高于全國平均水平，患病及死亡逐漸趨向年輕化，此外，該地區(qū)肺癌多為惡性程度較高的腺癌，轉(zhuǎn)移早，病死率高，預(yù)后極差[7,8],以上種種特殊情況使得宣威成為了肺癌研究的一個特殊區(qū)域。目前大量流行病學(xué)分析認(rèn)為當(dāng)?shù)厥覂?nèi)煙煤燃燒產(chǎn)生的空氣污染可能是導(dǎo)致當(dāng)?shù)胤伟└甙l(fā)的主要原因[9,10]。由于其高發(fā)病率、高死亡率、以及明顯的家族聚集性,近年來一直是科研工作者的研究熱點,但其研究重點更多地集中在宣威肺癌的分子機(jī)制方面[11,12]。目前針對宣威肺癌患者血液

中是否存在敏感性、特異性較高的腫瘤標(biāo)志物的研究甚少，其實，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期，在血清中就可開始測得到了一些腫瘤標(biāo)志物，且隨著對肺癌腫瘤標(biāo)志物的認(rèn)知不斷完善,開始有越來越多的具有較高診斷價值的腫瘤標(biāo)志物也隨之被發(fā)現(xiàn)，引起了諸多臨床工作者的重視，顯然宣威肺癌的發(fā)病機(jī)制和流行病學(xué)均存在的明顯的特異性，但關(guān)于宣威肺癌的特異性腫瘤標(biāo)志物及其臨床應(yīng)用價值方面研究值得我們深入研究[13,14]。

2 腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)研究

2.1 腫瘤標(biāo)志物概述 腫瘤標(biāo)志物是指特征性存在于惡性腫瘤細(xì)胞,或由惡性腫瘤細(xì)胞異常產(chǎn)生的物質(zhì)并能反映腫瘤發(fā)生、發(fā)展、檢測腫瘤對治療反應(yīng)的一類物質(zhì)。最早的相關(guān)研究可追溯到1848年，在當(dāng)時即發(fā)現(xiàn)了本周式蛋白這一物質(zhì)，被作為診斷多發(fā)性骨髓瘤的一個重要參考依據(jù),納入了相關(guān)研究[15]。隨后在1964至1965年之間，發(fā)現(xiàn)了甲胎蛋白及癌胚抗原,從而使得腫瘤標(biāo)志物在臨床工作中得到了進(jìn)一步的分析與應(yīng)用[16]。在1975年，有臨床研究工作者創(chuàng)立出來的淋巴細(xì)胞雜交技術(shù)，制備出了單克隆抗體,從而建立起來了一系列的特異性較強(qiáng)的腫瘤標(biāo)志物[17]。在1976年，有專家發(fā)現(xiàn)了原癌基因,從而使得腫瘤標(biāo)志物從分子水平上升到了基因水平，之后在1978年，有關(guān)腫瘤標(biāo)志物的概念被正式提出,并得到了世界上諸多臨床工作者的認(rèn)可[18]。結(jié)合目前的形式及實際檢驗操作方向來看,能夠應(yīng)用于臨床診斷的腫瘤標(biāo)志物包括了癌胚抗原類、酶類、激素類、糖蛋白類、癌基因類以及細(xì)胞表面腫瘤抗原類等共6大類,且各類腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物的特異性各異,能夠用于檢測及診斷的方向也各不相同。

2.2 目前肺癌診斷方面應(yīng)用較多的腫瘤標(biāo)志物CEA是一種胃腸道細(xì)胞分泌的高分子蛋白多糖復(fù)合物，具有免疫抑制作用可以促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，在肺腺癌中含量較高[19]。NSE是有兩個γ亞單位組成的烯純化酶，在小細(xì)胞肺癌中，NSE表達(dá)水平較高，CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19的可溶性片段，在鱗癌中表達(dá)水平較高[20]。SCC-Ag是一種鱗狀 上皮抗原，因此在鱗癌中此標(biāo)志物表達(dá)水平較高，且血清中SCC濃度與鱗狀上皮細(xì)胞癌的分化程度有關(guān)[21]。CA125是一種廣泛存在于間皮細(xì)胞中的糖類抗原，其水平變化與肺癌的分期和浸潤程度相關(guān)，對于預(yù)測和評價肺癌的發(fā)生發(fā)展具有一定價值，Mumford JL等[22]通過對100例非小細(xì)胞肺癌患者血清CA125的水平與臨床特征關(guān)系的研究,發(fā)現(xiàn)血清CA125水平高低與腫瘤分期相關(guān),血清CA 125的平均水平隨著疾病的進(jìn)展而升高。陳中青[23]等人的研究也表明，CEA是診斷肺腺癌的最理想的標(biāo)志物；CYFRA21-1、SCC是肺鱗癌的危險因素，其中CYFRA21-1是診斷肺鱗癌的最理想的標(biāo)志物。幾種標(biāo)志物中,僅有 CA125和 CYFRA21-1兩種標(biāo)志物不但與肺腺癌 T分期、N分期、M分期顯著性正相關(guān),而且與肺磷癌 T分期、N分期、M分期也具有顯著性正相關(guān),因此,CA125和CYFR A21-1升高對于判斷非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后有重要意義[24]。腫瘤標(biāo)志物單獨檢測敏感性均較低，需通過聯(lián)合檢測來提高敏感性，提高肺癌檢出率，隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)以及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，新的腫瘤標(biāo)志物不斷出現(xiàn),以期為腫瘤的早期診斷提供了較好的科學(xué)支持[25]。

3 腫瘤標(biāo)志物SP70及檢測方法

單克隆抗體具有著非常高的特異性,在腫瘤診斷以及治療過程中均被當(dāng)做是目前研究中的一個重點觀察對象。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)[26]，采用人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A1作為免疫原,并借此成功制備、制定并篩選出來了一株能夠特異性識別出非小細(xì)胞肺癌的McAb N001(又被稱為NJ488-1)，此抗體所針對的靶抗原為相對分子量為70000的胞漿新抗原SP70，因此被命名為SP70，該抗原在胞漿中以及包膜上均具有著一定的表達(dá)水平，且在胞漿中具有著非常豐富的表達(dá)量。曾經(jīng)也有免疫組化對非小細(xì)胞肺癌中的NJ001與非小細(xì)胞肺癌組織之間的相關(guān)性進(jìn)行分析時發(fā)現(xiàn)，NJ001能夠在非小細(xì)胞肺癌組織中表現(xiàn)出呈現(xiàn)出較強(qiáng)的陽性反應(yīng)，呈現(xiàn)出了明顯的差異性[27]。隨后為了進(jìn)一步的判斷血清中腫瘤標(biāo)志物SP70是否能夠成為檢測非小細(xì)胞肺癌的一種新型的腫瘤標(biāo)志物,大量臨床研究人員聯(lián)合制備了抗SPC-A1多克隆抗體及NJ001單抗,成功建立起了能夠針對SP70所開展的SP70雙抗體夾心ELISA法，取得了較好的檢測效果，證實了腫瘤標(biāo)志物SP70在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用檢測價值及臨床意義。目前潘世揚專家課題組已建立了一系列針對SP70的臨床檢測診斷技術(shù)[28]，包括ELISA、免疫組化、免疫熒光、流式細(xì)胞分析和免疫磁珠液體活檢等方法,目前已開發(fā)出4款體外診斷試劑盒，實現(xiàn)快速、便捷、準(zhǔn)確的檢測。

4 腫瘤標(biāo)志物SP70與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性

曾有研究報道指出，腫瘤標(biāo)志物SP70為一種針對非小細(xì)胞肺癌的特異性蛋白靶標(biāo),主要存在于癌細(xì)胞的包膜和細(xì)胞質(zhì)中，具有抗凋亡、促進(jìn)增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的作用,研究表明,SP70抗原在肺腺癌、肺鱗癌、良性肺腫瘤和癌旁組織的陽性率分別是84.1%，79.2%,8.7%和8.2%,且SP70高表達(dá)患者預(yù)后更差，因此SP70可作為非小細(xì)胞肺癌檢測和診斷的重要分子靶標(biāo)[29]。另外，SP70抗原作為一種分泌蛋白,可以從非小細(xì)胞肺癌的胞質(zhì)中分泌到細(xì)胞之外或是從包膜上脫落下來進(jìn)入到血液當(dāng)中。有研究證實了,通過采用RT-PCR法對肺癌組織中的腫瘤標(biāo)志物SP70的mRNA水平進(jìn)行測量，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了該物質(zhì)表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生之間的明顯的相關(guān)關(guān)系。另外,潘世揚等專家[30]在采用ELISA法檢測非小細(xì)胞肺癌患者外周血的腫瘤標(biāo)志物SP70的表達(dá)水平時發(fā)現(xiàn)，腫瘤標(biāo)志物SP70的表達(dá)陽性率要明顯高于良性的肺部病變組織，同時聯(lián)合電化學(xué)發(fā)光技術(shù)對CEA、NSE、CYFRA21-1進(jìn)行同步檢測對比分析，發(fā)現(xiàn)ELISA法雖靈敏度遠(yuǎn)低于電化學(xué)發(fā)光法，但ELISA法檢測SP70在NSCLC患者血清中的陽性率要明顯高于電化學(xué)發(fā)光技術(shù)對CEA、NSE、CYFRA21-1的檢測,且聯(lián)合ELISA后三項檢測陽性率顯著提高。該研究還發(fā)現(xiàn)SP70在疾病早期階段就具有很高的陽性率,通過長期隨訪發(fā)現(xiàn)，部分SP70陽性的健康體檢患者之后出現(xiàn)胸片異常改變[31]。上述研究均顯示SP70有望成為全新的NSCLC早期輔助診斷腫瘤標(biāo)志物。此外，一些研究還發(fā)現(xiàn)，腫瘤標(biāo)志物SP70在惡性胸腔積液中也能夠呈現(xiàn)出較高的表達(dá)水平[32,33]。

SP70是一種可用于非小細(xì)胞肺癌等腫瘤的診斷與治療的雙功能靶標(biāo),目前最新研究顯示[34],SP70可起到化療療效判斷的預(yù)測作用。該研究通過在2個化療周期之前和之后檢測血清SP70和其它四個腫瘤標(biāo)志物,分析血清腫瘤生物標(biāo)志物水平與化療反應(yīng)之間的相關(guān)性。該研究結(jié)果顯示化療后部分緩解期血清SP70水平顯著降低且SP70優(yōu)于其它腫瘤標(biāo)志物。此外還發(fā)現(xiàn),化療后SP70水平降低的患者中位PFS長于血清SP70水平穩(wěn)定或升高的患者。血清SP70是晚期NSCLC患者化療療效的敏感和實時指標(biāo)，與PFS有關(guān)[35,36]。綜上所述，腫瘤標(biāo)志物SP70對于非小細(xì)胞肺癌的早期診斷、化療療效、預(yù)后判斷具有較高的臨床應(yīng)用價值。

腫瘤標(biāo)志物SP70在非小細(xì)胞肺癌患者的外周血中表達(dá)陽性率已被證明要明顯高于良性肺部病變,且具有較高的臨床應(yīng)用價值,由于宣威肺癌的發(fā)病機(jī)制和流行病學(xué)存在著明顯特異性,腫瘤標(biāo)志物SP70在宣威肺癌患者外周血中的表達(dá)已引起了廣泛關(guān)注,具有極大的研究價值,有待進(jìn)一步的臨床研究發(fā)掘腫瘤標(biāo)志物SP70在宣威肺癌的早期診斷、病情監(jiān)測、預(yù)后判斷方面的臨床應(yīng)用價值。

5 小結(jié)

腫瘤標(biāo)志物的檢測在臨床工作中多用于對肺癌的早期診斷及檢測，同時也能夠用于對組織學(xué)分型、臨床分期以及療效及預(yù)后的判斷，具有著非常高的臨床診斷及應(yīng)用價值。盡管在目前的臨床工作中已經(jīng)有諸多的腫瘤標(biāo)志物不斷的被發(fā)現(xiàn)并對其進(jìn)行了相應(yīng)的研究與應(yīng)用,但是由于肺癌組織病理分型之間具備著多樣性,即便是同種病理腫瘤細(xì)胞同樣具備著特異性以及腫瘤生物學(xué)行為的復(fù)雜性,在目前的研究工作中尚未發(fā)現(xiàn)出一種具有較高特異性以及敏感性均較為理想的腫瘤標(biāo)志物，這就導(dǎo)致了采用單項指標(biāo)對某種肺癌進(jìn)行檢測及診斷仍然存在著一定的局限性。且宣威肺癌獨有的地域性特點,更是環(huán)境與基因互相作用結(jié)果的典型,其特殊的高發(fā)病率及高死亡率嚴(yán)重威脅宣威地區(qū)乃至其他相似地區(qū)人口的生命健康,所以研究宣威肺癌潛在的、全新的、特異的早期輔助診斷腫瘤標(biāo)志物至關(guān)重要。非小細(xì)胞肺癌組織中腫瘤標(biāo)志物SP70的表達(dá)水平要明顯高于肺部良性組織病變，提示腫瘤標(biāo)志物SP70可能作為診斷非小細(xì)胞肺癌的潛在指標(biāo),而宣威肺癌多為惡性程度較高的腺癌,具有轉(zhuǎn)移早,預(yù)后差,病死率高,明顯的家族聚集性等特異性，探索宣威肺癌是否存在特異度、靈敏度高的腫瘤標(biāo)志物顯得尤為重要,因此,SP70在宣威肺癌中的臨床應(yīng)用價值值得深入研究。另外，SP70抗原同樣能夠在包漿以及包膜中有所表達(dá)，且在胞漿中具有著豐富的表達(dá)量,使得抗癌藥物的作用靶點也隨之更加的廣泛,具有更加潛在的臨床應(yīng)用價值，不過其抑癌的作用機(jī)制，仍然值得進(jìn)一步的研究與探討。此外，腫瘤標(biāo)志物SP70在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用價值及臨床意義已得到了廣泛驗證，而宣威肺癌種類多為惡性程度較高的腺癌，預(yù)后極差、病死率高，SP70在宣威肺癌中是否存在著不同于其它非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)情況,是否具有高于傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物的診斷價值,且有可能作為宣威肺癌較為特異的潛在早期診斷標(biāo)志物,仍需要進(jìn)一步的臨床實驗對比驗證，不斷深入研究，以期在一定程度上提高宣威肺癌的臨床診斷水平,達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，改善患者預(yù)后。