休糧提升脫氫表雄酮硫酸酯水平與抗衰老的關(guān)系探討*

★ 查青林 印健銘 林色奇 孔宏偉 許志良 曹靈勇（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院治未病科 南昌 001; .江西中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 南昌 000；.江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)基礎(chǔ)理論分化發(fā)展研究中心 南昌 000；.杭州漢庫醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司 杭州 10000；.浙江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 杭州 100）

1 前言

“休糧”即停食谷物，與辟谷、絕谷、斷食、禁食等詞語意思相近，都有不食谷物的意思。最早出至于晉代葛洪《抱樸子·仙藥》：“朮餌，令人肥健，可以負(fù)重涉險，但不及黃精甘美易食，兇年可以與老小休糧，人不能別之，謂為米脯也?！睆墓胖两穸加袑π菁Z的記載，《黃庭內(nèi)景經(jīng)》云：“百谷之食土地精，五味外羙邪魔腥，臭亂神明胎氣零，那從反老得還嬰？”據(jù)《大戴禮記·易本命》載：“食肉者勇敢而悍，食谷者智慧而巧，食氣者神明而壽，不食者不死而神?！薄侗阕觾?nèi)篇·雜應(yīng)》中曰：“余數(shù)見斷谷人三年二年者多，皆身輕色好?！睔v代文獻(xiàn)提示休糧是古人養(yǎng)生保健、延年益壽的方法。

《素問·至真要大論》云：“女子七歲，腎氣盛齒更發(fā)長……七七，任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭……丈夫八歲，腎氣實……七八，肝氣衰，筋不能動，天癸竭，精少，腎臟衰，形體皆極?！比诉M(jìn)入衰老期，天癸衰竭，生殖能力衰退。脫氫表雄酮硫酸酯（DHEAS）是人體內(nèi)含量最豐富的血漿類固醇激素，其含量比較穩(wěn)定，由腎上腺皮質(zhì)分泌，在肝臟和腎臟硫酸酶作用下轉(zhuǎn)化為脫氫表雄酮（DHEA），DHEA是雄烯二酮、睪酮（T）、5α-雙氫睪酮（DHT）、5α-雄甾烷二酮、雌二醇（E2）、雌酮等甾體類激素的前體物質(zhì)。DHEA半衰期＜30min，并且呈現(xiàn)明顯24h節(jié)律性，而DHEAS生物半衰期為710h，且無晝夜節(jié)律［1］。研究證實，育齡期婦女DHEAS隨著年齡的增加呈下降趨勢［2］，從杭州漢庫醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司的數(shù)據(jù)來看，DHEAS水平19～26歲達(dá)到高峰，隨后成下降趨勢，年齡越大DHEAS水平越低。DHEAS亦常用于老年人記憶力減退、阿爾茲海默病、老年癡呆［3-6］、卵巢早衰［7-8］等衰老性疾病的輔助治療。從上述文獻(xiàn)報道分析，推測DHEAS是人體內(nèi)重要的性激素儲備激素，類似于中醫(yī)的天癸。該激素水平的降低與衰老密切相關(guān)。

我們在給杭州漢庫醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司職工做休糧實踐的時候，偶然發(fā)現(xiàn)休糧對DHEAS具有很強(qiáng)地快速提升作用，部分受試者DHEAS的水平在半年時間內(nèi)仍然有提升。推測休糧抗衰老作用可能與其提升DHEAS水平有關(guān)。茲將數(shù)據(jù)分析結(jié)果報告如下：

2 對象與方法

2.1 研究對象 參加休糧的受試者都來源于杭州漢庫醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司職工，共計6人。其基本資料見表1。

表1 基線資料

2.2 方法

2.2.1 休糧方法 本次參加休糧的6人休糧時間為2020年3月3日—6日，共計4 d。休糧期間只吃中醫(yī)休糧壓片糖果和飲用礦泉水或溫開水，飲水量1 800 mL左右，晚上6:30以后不渴盡量不喝水。休糧壓片糖果的服法，上午9點服用5～10片，下午6 h前服用5～10片，中午服用5～10片，時間不限。休糧壓片糖果由南昌市焙荒科技合伙人企業(yè)提供，每片1 g，主要成分為：茯苓、枸杞、甜杏仁、薏苡仁、山藥、葛根、黃精、烏梅、桑葚、甘草、大棗、肉桂、人參、干姜、花椒、丁香、小茴香、代代花、當(dāng)歸、白芷、陳皮、砂仁、菊苣、薄荷、八角茴香、菖蒲、菊花、草果、黑芝麻、黑豆、黑米、木糖醇。

2.2.2 血清樣本采集

2.2.2.1 采血前準(zhǔn)備 前一晚餐不喝酒，咖啡，果汁和茶，不吃特別的食品（包括油膩的食物）、補(bǔ)品（例如維生素片、魚油）和藥物。采樣前不做激烈運(yùn)動，保持平穩(wěn)的狀態(tài)。至少保持 12 h空腹，禁水4h以上，早晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集樣品。

2.2.2.2 血清制備 按血清采集管常規(guī)造作采集血清，采血量不少于3 mL，采血后立即混勻，室溫直立靜置30～40 min后至血細(xì)胞凝集，離心（2 500～3 000 g，10℃）7 min，有溶血現(xiàn)象不能用于分析。

2.2.3 DHEAS及相關(guān)激素檢測方法

2.2.3.1 設(shè)備 AB SCIEX TRIPLE QUAD 5500超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源及Analyst1.4數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國AB公司；Legend micro 17R低溫高速離心機(jī)，Thermo Scientific；VORTEX3 S025渦旋混合器，IKA；Cool Safe 110-4真空冷凍干燥機(jī)，LABOGENE；電熱恒溫水槽，KD-8AXX。

2.2.3.2 試劑 標(biāo)準(zhǔn)品：睪酮、孕酮、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、雄烯二酮、脫氧皮質(zhì)酮、二氫睪酮、雌酮、購自Dr.Ehrenstorfer，17α-羥孕酮、脫氫表雄酮購自TRC，11-脫氧皮質(zhì)醇、孕烯醇酮購自ANPEL，脫氫表雄酮硫酸酯購自甄準(zhǔn)生物。

同位素內(nèi)標(biāo)：睪酮-d3、二氫睪酮-d3、脫氫表雄酮-d6購自Cerilliant，孕酮-d9、17α-羥孕酮-d8購自CDN，皮質(zhì)醇-d4、脫氫表雄酮硫酸酯-d6購自Sigma-Aldrich，孕烯醇酮-d4、雌酮-d4購自TRC。

乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）購自Merk Group；分析純甲酸購自CNW Technologies GmbH；鹽酸羥胺（分析純）購自Alfa Aesar。

2.2.3.3 樣本前處理 移取600 μL含內(nèi)標(biāo)的沉淀劑于1.5 mL離心管內(nèi)，移取150 μL血清樣本加入該離心管，渦旋1 min混勻，后置于臺式高速冷凍離心機(jī)內(nèi)，在4 ℃條件下以13 000rpm離心15 min。冷凍離心結(jié)束后，轉(zhuǎn)移650 μL上清液至1.5 mL離心管，于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)凍干。凍干結(jié)束后，于離心管內(nèi)加入50 μL鹽酸羥胺溶液復(fù)溶，渦旋30 s，于電熱恒溫水槽中60 ℃水浴20 min。水浴結(jié)束，取出離心管冷卻至室溫，打開離心管蓋，于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)凍干。凍干結(jié)束后，于離心管內(nèi)加入65 μL 30%甲醇/水溶液復(fù)溶，蓋緊蓋子，渦旋30 s，將離心管置于臺式高速離心機(jī)以13 000 rpm離心6 min。離心結(jié)束后，移取上清液，進(jìn)樣分析。

2.2.3.4 色質(zhì)譜條件 色譜條件：色譜柱選用Agilent Proshell 120 EC-C18 3.0×50mm 2.7μm；流動相A為0.1%甲酸/水溶液，流動相B為含0.1%甲酸/乙腈溶液；梯度洗脫；進(jìn)樣量；7.5 μL，流速：0.4 mL/min；柱溫：40 ℃。

質(zhì)譜條件：ESI正離子模式，MRM檢測模式。

2.3 統(tǒng)計分析方法 數(shù)值型變量采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差描述，休糧前后體重、BMI及相關(guān)激素指標(biāo)比較，采用配對t檢驗，以P＜0.05為有顯著性意義。數(shù)據(jù)分析在SAS9.4軟件上進(jìn)行。

3 結(jié)果

3.1 休糧前后DHEAS及相關(guān)激素指標(biāo)的變化 詳見表2。

表2 各項指標(biāo)分析結(jié)果（n=6）

從表2可知，DHEAS休糧后呈倍數(shù)增加，休糧前后比較，有顯著性差異；DHEAS的下游激素，如睪酮、雄烯二酮、二氫睪酮、孕酮、孕烯醇酮、雌酮和DHEA則較休糧前略低，但無顯著性差異。皮質(zhì)酮與脫氧皮質(zhì)酮也有顯著性上升，可能與休糧期間腎臟重吸收鹽的功能增強(qiáng)有關(guān)。

3.2 典型案例介紹 案例1：陳某，女，32歲，身高164 cm，體重75 kg，BMI 27.51 kg·m-2，4年前被診斷為多囊卵巢綜合征，2017年通過促排懷孕，2018年1月生下小孩，后一直停經(jīng)。該患者于3月3日開始休糧，3月6號結(jié)束休糧，3月9日來月經(jīng)，月經(jīng)量較多，其后于4月9日再來月經(jīng)，量少，5月10日來月經(jīng)，量較多，6月沒來月經(jīng)，7月29日來月經(jīng)，量少。至9月6日仍未來月經(jīng)。期間DHEAS的變化如下：休糧前（3月3日）2 901.06 ng/mL，休糧后（3月6日）7 238.86 ng/mL，復(fù)食5天后（3月11日）DHEAS為3 553.05 ng/mL，隨訪5個月（8月25日）DHEAS水平為2210.53 ng/ml。休糧后體重71.5 kg，體重下降3.5 kg，8月25日體重76 kg，較休糧前還略有增加。陳某提供了2019年11月1日體檢報告，其DHEAS水平為3 029.81 ng/mL。其變化見圖1。

圖1 陳某休糧前后DHEAS變化圖

提示：該患者14個月沒來月經(jīng)，休糧后月經(jīng)自然來了，并且后續(xù)3個月月經(jīng)基本正常，休糧后該患者DHEAS水平大幅提升，推測DHEAS提升可能與恢復(fù)其月經(jīng)有關(guān)。但該患者休糧后沒有控制飲食，體重有所增加，DHEAS較休糧前還低，月經(jīng)也出現(xiàn)了推遲現(xiàn)象。

案例2：陳某某，女，27歲，身高164cm，體重83.1kg，BMI 30.9 kg·m-2，半年前前因停經(jīng)幾個月而被診斷為疑似多囊卵巢綜合征。3月3日開始休糧，休糧前每月吃地屈孕酮片才來月經(jīng)，連續(xù)吃4個月，并于1月1日停用后未再服地屈孕酮片，至休糧前月經(jīng)一直未來。休糧后體重為78.6 kg、體重下降4.5 kg，并在3月9日來月經(jīng)，量較少，4月～6月通過吃中藥來了月經(jīng)，7月29日月經(jīng)自行來。陳某某休糧結(jié)束后一直控制飲食，體重繼續(xù)下降，至8月25日，體重下降至66 kg。該患者DHEAS水平變化如下：休糧前（3月3日）DHEAS水平為1 294.6 ng/mL，休糧后（3月6日）DHEAS水平為4 609.16 ng/mL，復(fù)食5天后（3月11日）DHEAS水平為2253.94 ng/ml，隨訪5個月（8月25日）DHEAS水平為1645.09 ng/ml。其變化見圖2。

圖2 陳某某休糧前后DHEAS變化圖

提示：該受試者為疑似多囊患者，休糧前靠孕激素催經(jīng)，不用孕激素則月經(jīng)不來，休糧前月經(jīng)2個多月未來，休糧后第3天來月經(jīng)，并且DHEAS水平快速提升，推測休糧提升DHEAS水平，與其月經(jīng)恢復(fù)有關(guān)。該患者休糧后一直通過控制飲食減重，體重較休糧后還下降了12.6 kg，其DHEAS水平較休糧復(fù)食后有所下降，當(dāng)仍高于休糧前的數(shù)值。因該患者DHEAS水平一直較低，所以月經(jīng)量不多。

4 討論

最近幾年，有關(guān)休糧療法與壽命的相關(guān)性研究越來越多。經(jīng)過近一個世紀(jì)對動物熱量限制的研究，總的結(jié)論是減少食物攝入會大大延長壽命。在最早的間歇性禁食研究中，Goodrick等人［9］報道，當(dāng)老鼠在年輕時開始采用隔日喂養(yǎng)的方法時，它們的平均壽命可延長83 %。一項對1934年至2012年的數(shù)據(jù)進(jìn)行的薈萃分析顯示，限制熱量攝入可使大鼠的中位壽命延長14 %-45 %，而小鼠的中位壽命僅增加4 %～27 %［10］。威斯康星大學(xué)的一項最新研究同樣表明，限制熱量攝入對健康和生存都有積極作用［11］。然而，限制熱量攝入對健康壽命和壽命的影響程度各不相同，并受性別、飲食、年齡和遺傳因素的影響［12］。因此關(guān)于休糧是如何影響機(jī)體的壽命，其機(jī)制是比較復(fù)雜的，目前還尚未有確切的定論。

大量研究表明，DHEAS可用延緩衰老，其機(jī)制主要是表現(xiàn)在抗氧化作用、改善認(rèn)知能力和記憶功能、改善女性卵巢早衰、調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬、改善骨質(zhì)疏松等方面。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為人體衰老主要表為生殖功能衰退和記憶功能減退，因此這里主要從DHEAS改善認(rèn)知、記憶能力和女卵巢早衰兩個方面對衰老的影響進(jìn)行討論。

研究顯示，阿爾滋海默?。ˋD）患者血清及腦脊液DHEAS水平相比正常水平明顯下降，并且DHEAS對AD患者神經(jīng)具有保護(hù)作用［3］。也有研究發(fā)現(xiàn)，血清DHEAS水平降低與年齡相關(guān)的認(rèn)知功能下降相關(guān)，在外源性補(bǔ)充DHEAS以后，認(rèn)知功能得到改善［4］。李宏偉等［13］通過對330例患有高血壓老年男性進(jìn)行調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，老年男性高血壓患者認(rèn)知功能下降與血清DHEA-S 降低相關(guān)，而血清 DHEAS 水平降低可能是高血壓老年男性出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙的危險因素之一。人類流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，相比血清含量DHEAS水平較低的人，含量高的人具有良好的認(rèn)知和記憶能力，并且有較好的心理和生理狀態(tài)，同時DHEAS治療的病人生活質(zhì)量得到極大改善［14］。Niekerk和 Davis的研究也證實了以上觀點，他們發(fā)現(xiàn)在健康男性和絕經(jīng)期女性體內(nèi)，血清DHEA水平與認(rèn)知水平呈正相關(guān)［15-16］。

隨著婦女年齡增長，生育力降低，腎上腺來源的DHEAS水平呈下降趨勢，卵巢功能逐漸下降。Barad等［7］報道了190例卵巢儲備功能下降（DOR）患者在服用DHEA（75 mg/d，每次25 mg，每日3次）后17周，相比服藥前，E2、卵母細(xì)胞和胚胎數(shù)、卵母細(xì)胞和胚胎質(zhì)量等指標(biāo)均有顯著上升，證實此前報道DHEA補(bǔ)充治療對改善DOR患者功能是有益的。胡蓉等［17］通過臨床試驗探討DHEA對DOR患者行體外受精-胚胎移植（IVF-ET）治療的影響，發(fā)現(xiàn)DHEA輔助治療可以改善DOR患者卵巢儲備功能，提高卵巢反應(yīng)性，改善IVF-ET治療結(jié)局。鹿群等［18］研究也證實這一觀點，提示DHEA能提高卵巢反應(yīng)不良患者的雄激素水平，有效改善卵巢反應(yīng)不良患者的卵巢儲備功能和促排卵效果，進(jìn)而提高IVF-ET的妊娠率。在最近的一項研究中，高瑞璠等［19］通過205例卵巢低反應(yīng)（POR）患者行體外受精/胞漿內(nèi)單精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）過程中進(jìn)行口服DHEA處理，發(fā)現(xiàn)DHEA預(yù)處理對POR患者的卵巢儲備及IVF/ICSIET臨床結(jié)局有明顯改善作用。

通過對參加休糧的6名受試者的數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，休糧能快速提升DHEAS水平，休糧后DHEAS水平有下降，但能在較長時間內(nèi)仍處于較休糧前高的水平，這提示古人用于延年益壽的休糧療法，其延緩衰老的作用可能與休糧能快速提升人體血清DHEEAS水平有關(guān)。另外在參加休糧的6人中有2名女性均患有多囊卵巢綜合征，并且其中一個有4年的停經(jīng)史，在休糧結(jié)束后DHEAS明顯上升，相比休糧前分別提高了2.5倍和3.6倍，并且月經(jīng)得到恢復(fù)。我們推測休糧后月經(jīng)恢復(fù)與DHEAS水平升高并且改善卵巢功能有著密切關(guān)系。

通過此次研究，我們可以得出這樣的結(jié)論：休糧能快速升高血清DHEAS水平，推測休糧具有抗衰老作用可能與其提升DHEAS水平有關(guān)。