三葉青研究和生產(chǎn)現(xiàn)狀及發(fā)展對策

李 者 ，周昌和，杜向標(biāo)，劉守贊，白 巖，蔣玲苔，王嘉一，潘潔渝，樓瑩瑩，鄭炳松

（1.浙江農(nóng)林大學(xué)，省部共建亞熱帶森林培育國家重點實驗室，浙江 杭州 311300；2.浙江農(nóng)林大學(xué) 林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 3 113003；3.龍泉市林業(yè)局，浙江 龍泉 323700；4.龍泉市城區(qū)林業(yè)工作站，浙江 龍泉 323700；5.浙江農(nóng)林大學(xué)植物園，浙江 杭州 311300）

中藥三葉青，學(xué)名三葉崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum，為葡萄科Vitaceae 崖爬藤屬Tetrastigma藤本植物，全株均具有藥用價值[1]，多以塊根入藥，味微苦，性平，具有清熱解毒、消腫止痛、化痰散結(jié)的功效，可用于小兒高熱驚風(fēng)、百日咳、瘡癰痰核和毒蛇咬傷[2]。清代《植物名實圖考》中記載“石附子（即三葉青）俚醫(yī)以治小兒，退熱、止腹痛，取漿沖服”[3]；《浙江民間常用草藥》記載“清涼解毒、祛風(fēng)化痰功效，可治小兒風(fēng)熱，驚風(fēng)、疝氣痛、咳嗽、發(fā)燒及口腔炎等；治蛇咬傷”[4]；《全國中草藥匯編》中記載三葉青可治療小兒發(fā)熱驚厥、毒蛇咬傷、肺炎、肝炎[5]。

近年來，有研究表明，三葉青具有抗腫瘤的藥效，引起了人們的極大關(guān)注，產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，并于2018 年，與鐵皮石斛Dendrobium officinale，靈芝Ganoderma Lucidum，番紅花（中藥名西紅花）Crocus sativus等并稱為“新浙八味”[6]。與此同時，暴露出了三葉青野生資源稀缺、人工引種種植混亂、特征成分不明等問題，亟待解決。為了三葉青產(chǎn)業(yè)能健康快速地發(fā)展，本文采用整合文獻、分析網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)和實地考察等方法，對三葉青自2009-2019 年底近十年的研究和發(fā)展現(xiàn)狀進行整理并歸納總結(jié)，提出解決方案，以期為三葉青產(chǎn)業(yè)的提升提供借鑒。

1 三葉青研究進展

1.1 三葉青藥用價值

研究表明，三葉青的主要有效成分為黃酮類、三萜類、甾體類、酚酸類和脂肪酸類化合物[7]，安全無毒，且副作用小，被稱為“植物抗生素”。近年來，以三葉青中的黃酮、多糖以及未標(biāo)明成分的提取物為研究對象，發(fā)現(xiàn)其可有效抑制肺癌[8-10]、肝癌[11-14]、乳腺癌[15-16]、食管癌[17]、結(jié)腸癌[18]細(xì)胞的增殖和遷移，如：浙江艾克野生植物有限公司研制出以三葉青塊根為原料，可抑制腫瘤細(xì)胞的金絲地甲膠囊[19]，與鱉甲消癥湯聯(lián)合，一個療程后瘤體穩(wěn)定緩解率可達(dá)到66.7%[20]。三葉青用于白血病治療也有較好的效果[21-22]；還可用于治療病毒性腦膜炎等疾病[23]。

目前，盡管在三葉青中發(fā)現(xiàn)了多種不同種類的化合物，但是，研究者們認(rèn)為，其抗炎、退熱等起效快的有效成分卻沒有明確對應(yīng)；三葉青抗腫瘤效果良好，但研究多數(shù)使用其提取物，具體指標(biāo)性成分和藥物起效及代謝等過程有待進一步探究。這些問題未解決，在一定程度上阻礙了其進入《中華人民共和國藥典》，進而影響了產(chǎn)業(yè)進程。

1.2 三葉青栽培技術(shù)

三葉青為陰生于山谷的瀕危藥用植物，故而對其人工栽培技術(shù)的研究對三葉青產(chǎn)業(yè)的發(fā)展至關(guān)重要。其中，以對影響三葉青生長的光照條件的研究較多，結(jié)果表明，采用光照強度調(diào)控（遮蔭70%左右）[24-26]、光質(zhì)調(diào)控（紅藍(lán)光質(zhì)）[27-29]、光周期調(diào)節(jié)（光照12 h·d-1）[30-31]等措施，均有利于三葉青的生長以及代謝產(chǎn)物的積累。在三葉青生長過程中，所施用的肥料種類對其生長也至關(guān)重要。研究表明，施用不高于0.5 g·kg-1的氮肥有利于三葉青的生長[32]，以硝態(tài)氮（NO3--N）形式施用對黃酮積累更有益[33]。

1.3 三葉青組培技術(shù)

三葉青組織培養(yǎng)技術(shù)日臻成熟[34]。誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生和進行繼代培養(yǎng)的最佳條件為，培養(yǎng)基采用MS、30 g·L-1蔗糖、2.0 mg·L-16-BA 和0.2 mg·L-1NAA 混合配方，光源為日光燈，培養(yǎng)溫度為28℃。如果配合采用9∶1 或7∶3 紅藍(lán)混合光源，可提高三葉青干物質(zhì)的含量。向倩倩等[35]利用農(nóng)桿菌C58C1 菌株建立起三葉青毛狀根培養(yǎng)體系，得出毛狀根中的黃酮含量為2年生三葉青塊根中黃酮含量的1/5。

圖1 2009-2019 年三葉青文獻類型和數(shù)量Figure 1 Literatures on T.hemsleyanumfrom 2009 to 2019

對三葉青的科學(xué)研究為產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供了一定的理論基礎(chǔ)，但目前關(guān)于三葉青的理論研究還不夠全面，如圖1 可見，對三葉青的研究多集中在藥理、藥化和生理方面的研究，對分子生物學(xué)相關(guān)研究僅以“三葉崖爬藤”之名發(fā)表于植物相關(guān)期刊[36]，而對其藥學(xué)方面的研究相關(guān)期刊涉及較少。研究方向較為單一且淺顯，難以為產(chǎn)業(yè)的多層次、多方位發(fā)展提供有力依據(jù)。

2 三葉青產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及存在的問題

2.1 產(chǎn)品種類日漸豐富、產(chǎn)業(yè)發(fā)展宜進一步加快速度

對三葉青的研究起步較晚，因此，其至今未被收錄進《中華人民共和國藥典》，無法生產(chǎn)以其為主要成分的藥品，這是制約其產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵問題。目前，僅在《浙江省中藥材炮制規(guī)范》[2]中對三葉青進行了描述，其原藥材僅進入浙江省醫(yī)保，存在發(fā)展的地域差異。同時，三葉青不在衛(wèi)生部《既是食品又是藥品的物品名單》和《可用于保健食品的物品名單》中，因而限制了與之相關(guān)的保健品的生產(chǎn)，致使其相關(guān)保健品種類少之又少。令人欣慰的是，近年來，以三葉青為主要原料的金絲地甲膠囊、金芪片和中肝合劑等保健品，對于提升癌癥術(shù)后患者的生存率和改善生活質(zhì)量效果顯著[20]，并且逐漸在市場中占領(lǐng)了一席之地；目前，已有多家生物醫(yī)藥公司根據(jù)《浙江省中藥材炮制規(guī)范》生產(chǎn)三葉青凍干粉，用于退熱、抗菌、消炎，活性高、起效快。不僅如此，以三葉青提取物為主要原料的化妝品也陸續(xù)問世，如三葉青凝膠、洗手液和三葉青牙膏等，慢慢被民眾所熟知。

圖2 “新浙八味”論文量Figure 2 Papers on “New Zhebawei” in some academic websites

2.2 野生資源稀缺、引種和種植較為混亂

由于三葉青的藥用效果良好，腫瘤抑制作用顯著，因此，需求量不斷增加，野生資源被過度采挖，現(xiàn)已成為一種瀕危的藥用植物。2011 年，浙江三葉青栽培品種被列入“浙江省首批農(nóng)作物種質(zhì)資源保護名錄”。由于浙江三葉青生長周期長，野生資源恢復(fù)慢，給后續(xù)研究造成了一定的困難，也在一定程度上阻礙了三葉青產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

目前，浙江、江西、福建等地區(qū)開始人工種植三葉青。但是，因為引種混亂，致使市面上的三葉青來源混雜。黃真等[37]發(fā)現(xiàn)浙江和廣西產(chǎn)三葉青在形態(tài)與水浸液都有不同，導(dǎo)管排列方式也有區(qū)別；彭昕等[38]發(fā)現(xiàn)云南等地區(qū)的三葉青相比浙江產(chǎn)三葉青塊根較大，產(chǎn)量也較高；但浙江產(chǎn)三葉青塊根的價格是云南、廣西等地區(qū)的4～ 5 倍。由此可見，產(chǎn)地不同，質(zhì)量差異較大，評價標(biāo)準(zhǔn)無法統(tǒng)一，為三葉青引種栽培和品質(zhì)鑒定帶來了困難。

同時，通過對浙江臨安、遂昌、龍泉、黃巖、衢州等多家種植基地進行取樣調(diào)查和訪問調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，三葉青人工種植方式也存在諸多問題，多數(shù)基地的栽培管理方法不科學(xué)。例如，在搭遮蔭棚大田種植中，使用噴灌技術(shù)可使棚內(nèi)保持較高的空氣濕度，但夏季棚內(nèi)高溫，致使三葉青生長緩慢，高濕則容易發(fā)生病害。另外，浙江產(chǎn)三葉青種植年限長，需要3 年以上才可采收，管理成本高，又因為價格相對其他產(chǎn)地高，致使收購困難，很多種植戶的積極性受到打擊，產(chǎn)量和品質(zhì)無法保證。

2.3 知名度低，民眾接受度不高

三葉青主要產(chǎn)于浙江、湖南、廣西和福建等地區(qū)，除這些地區(qū)之外，人們并不了解這種中藥。文獻檢索顯示，從1957 年起就有人對三葉青臨床效果進行了研究[39]。但在中國知網(wǎng)、維普網(wǎng)、Web of Since 和Springerlink 等文獻檢索網(wǎng)站進行關(guān)鍵詞搜索（圖2）時發(fā)現(xiàn)，與“新浙八味”中其他藥材相比，有關(guān)三葉青的論文數(shù)量相對較少，僅占1.06%～ 2.42%。在“新浙八味”中，三葉青的日搜索量（圖3）僅占總搜索量的4.348%，說明群眾對其接受度較低，影響了三葉青市場的活躍度。

2.4 三葉青產(chǎn)業(yè)發(fā)展滯緩，給價格帶來沖擊

圖3 “新浙八味”日搜索量Figure 3 Daily search of “New Zhebawei”

圖4 三葉青2014-2019 年統(tǒng)貨價格波動Figure 4 Price of unified T.hemsleyanum during 2014-2019

三葉青產(chǎn)業(yè)鏈終端發(fā)展滯緩，影響了原藥材的供應(yīng)價格。由圖4 可知，2014 年和2015 年，三葉青統(tǒng)貨價格平穩(wěn)在250～ 300 元·kg-1之間。2015 年下半年，除河北安國藥材市場外，在其他三大藥材市場（河南禹州、江西樟樹、安徽亳州）上的三葉青統(tǒng)貨價格呈下降趨勢，2018 年穩(wěn)定在100 元·kg-1左右。2019 年5 月份后亳州藥材市場、玉林藥材市場和安國藥材市場上的三葉青統(tǒng)貨價格都有小幅度上漲。初步分析其原因是，三葉青產(chǎn)業(yè)發(fā)展存在明顯的地域限制性，民眾接受度不高；市場銷售途徑較少，市場需求量低；又因三葉青育苗容易，品質(zhì)評價標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，市場準(zhǔn)入門檻低，種植戶連年增多，供求不平衡，致使近年來價格逐漸下降。

3 三葉青研究及產(chǎn)業(yè)發(fā)展對策

3.1 加強三葉青研究的深度和廣度，為三葉青產(chǎn)品深度研發(fā)奠定堅實基礎(chǔ)

Nature公布的科學(xué)熱詞排行榜，癌癥于2017 年和2018 年連續(xù)兩年位于榜首。三葉青作為具有抑制癌細(xì)胞作用的藥用植物，具有很高的研究價值。如圖5 所示，有關(guān)三葉青的文獻數(shù)量在逐年增加，在2010 年后的9年中，論文數(shù)量呈跨越式增加。說明研究人員對三葉青的重視程度不斷提高，也為其投入了大量精力。但是這些研究結(jié)果還遠(yuǎn)不足以滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求。因此，應(yīng)注重三葉青研究的深度和廣度。首先，應(yīng)加強對三葉青藥理和毒理的研究，明確三葉青提取物的作用機理，為有效成分的研究打下基礎(chǔ)；其次，加強對三葉青特征性有效成分的研究，明確其抗腫瘤、抗病毒和清熱的具體成分；同時，關(guān)注對于不同體質(zhì)的人群可能會產(chǎn)生不同的副作用；最后，加強產(chǎn)品的深度開發(fā)，例如提取物的精準(zhǔn)產(chǎn)品研發(fā)。只有如此，才有可能讓三葉青早日進入《中華人民共和國藥典》，為三葉青市場的健康快速發(fā)展提供保障。

3.2 科學(xué)種植，精深加工，推進三葉青產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展

三葉青產(chǎn)業(yè)發(fā)展依靠高質(zhì)量、統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的貨源、完善的供貨渠道以及銷售渠道。要解決目前三葉青種植業(yè)中存在的問題，就必須加大野生資源的保護力度，保證種植技術(shù)的科學(xué)化和規(guī)范化。首先，可采取封山育林、建立保護區(qū)的方法保護三葉青野生資源；也可通過收集野生三葉青種質(zhì)資源建立種質(zhì)資源庫的方式對其野生資源進行保護。其次，提高三葉青的種苗質(zhì)量，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。目前，三葉青的主要繁殖方式為扦插，但扦插方法普通存在不易結(jié)塊根的問題，白巖等[40]研究出了解決三葉青扦插不結(jié)塊根問題的方法。洪霞等[41]在三葉青的扦插研究中發(fā)現(xiàn)，有無成對葉片是扦插成活的關(guān)鍵，且在種植時以控根容器中種植3 株為最佳。最后，仿生種植，提升原藥材質(zhì)量。林下仿野生種植三葉青是近年來較為流行的方法，不但可以利用竹林、經(jīng)濟林和果樹的林下空間，還可以減少栽培管理措施，產(chǎn)出的藥材品質(zhì)也最接近野生三葉青，且產(chǎn)量較高，尤其是吳學(xué)謙等[42-43]發(fā)明的三葉青袋式栽培法，操作簡單，可在毛竹Phyllostachys edulis林、果樹等經(jīng)濟林下或光伏板下靈活使用。

以上措施均為平面栽培，是在袋口或盆口或缽口上的單層栽培，其空間利用和土地利用率低，難以在栽種地缺乏的城鎮(zhèn)環(huán)境中種植，亦無法兼顧城市的美化和綠化工作。白巖等[44]對三葉青進行了柱式立體種植方式研究，可有效減少占地面積，提升種植效率。同時，亦可充分利用三葉青較高的觀賞價值，作為景觀中的重要耐陰綠植，與多種植物搭配，美化環(huán)境，賞心悅目。多層次研發(fā)三葉青新產(chǎn)品，增加其附加價值。在當(dāng)今形勢條件下，三葉青產(chǎn)業(yè)發(fā)展可以偏向保健品研發(fā)和化妝品研發(fā)方向。例如，研發(fā)類似金絲地甲膠囊和金芪片等具有抗腫瘤、抗病毒和提高免疫力效用的保健品，提高癌癥患者的生活質(zhì)量，延長壽命。此外，三葉青具有抗炎、抗病毒的作用，可以針對這一特點研發(fā)祛痘類的保濕水、乳液，具有消毒作用的洗手液和灌洗劑等化妝品或日化產(chǎn)品。

3.3 科研和產(chǎn)業(yè)聯(lián)動，增加核心競爭力

圖5 1957-2019 年三葉青論文數(shù)量變化Figure 5 Literatures on T.hemsleyanum during 1957-2019

近年來，三葉青產(chǎn)業(yè)得到了較大發(fā)展，但是目前還屬于比較小眾的藥用植物，不為人們所熟知，這也是阻礙三葉青產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的一個現(xiàn)實原因。因此，正確把握三葉青入選“新浙八味”這一契機，挖掘三葉青的藥效，加快產(chǎn)品的深度研究，豐富研發(fā)產(chǎn)品類型，提升其知名度和民眾接受度，實現(xiàn)彎道超車，以增強其核心競爭力。綜上所述，三葉青產(chǎn)業(yè)發(fā)展機遇與挑戰(zhàn)并存。在國家和黨中央強調(diào)中醫(yī)藥工作要“傳承精華、守正創(chuàng)新”的大背景下，三葉青產(chǎn)業(yè)迎來了產(chǎn)業(yè)發(fā)展的春天。本文建議加強科學(xué)研究力度，推動產(chǎn)業(yè)進程，希望可以為三葉青科研產(chǎn)業(yè)鏈的健康發(fā)展提供借鑒。