多管發(fā)酵法與紙片法檢測水中糞大腸菌群的比較

王琦

摘 要：糞大腸桿菌能更準確地反映水體受糞便污染的情況，是目前國際上通行的監(jiān)測水質是否受糞便污染的指示菌。本文將多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測了太湖水的糞大腸菌群，并對兩種方法的實驗結果進行了比較，分析兩種方法的差異以及各自的優(yōu)缺點，這樣能在今后的實驗中選取更準確、高效的方法測定糞大腸菌群。

關鍵詞：糞大腸菌群;多管發(fā)酵法;紙片法

糞大腸菌群是糞便污染的指示菌，是水質污染的重要指標之一，目前，糞大腸菌的標準檢測方法為多管發(fā)酵法，檢測時間較長，試驗步驟較為繁瑣，無法快速評價水質污染狀況。紙片法主要參照《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》（C類方法），在水質監(jiān)測工作中，紙片法由于其方便高效，應用逐年增多。本文采用多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測了太湖水的糞大腸菌群，并對兩種方法的實驗結果進行了比較分析。

一、糞大腸菌群的實驗方法

1.多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法是根據大腸菌群細菌能發(fā)酵乳糖、產酸產氣并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃同時產生氣泡的原理，將水樣分濃度梯度接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中，在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24±2h，再將試驗陽性的發(fā)酵管中的培養(yǎng)物轉接到EC培養(yǎng)液中進行復發(fā)酵實驗，在44.5℃±0.5℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24±2h，培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產氣表明確信試驗陽性。

2.紙片法

每份水樣設置3個濃度梯度，每個濃度梯度分別采用5張大紙片，5張小紙片，5張小紙片。5張大紙片每張接種10mL水樣，5張小紙片每張接種1mL水樣，再是1︰10稀釋的水樣接種到5張小紙片中，每張接種1mL，濃度高時可適當稀釋。接種水樣時要均勻涂抹于紙片上，用手輕輕壓平，做好標記，于44.5℃±1℃下培養(yǎng)18～24h。觀察結果，紙片呈均勻藍紫色，為陰性，若紙片上出現紫紅色菌落，周圍有黃圈者為陽性或出現片狀紅暈周圍為黃色背景者也為陽性。

3.計算

兩種方法均根據不同接種量所出現陽性結果的數目，從MPN表中查得相應的MPN指數，再經下面的公式換算成每100mL的MPN值。

MPN值=MPN指數×10（ml）∕接種量最大的一管（ml）

我國目前以1L為報告單位，MPN值再乘10，即為1L水樣中的糞大腸菌群數。

二、實際水樣檢測結果

用紙片法和多管發(fā)酵法對8個實際水樣中的糞大腸菌群作比對檢測，結果見表1。

對兩種方法的檢測結果進行秩和檢驗，結果為t=7，P>0.10，表明紙片法與多管發(fā)酵法檢測結果之間無顯著性差異。

三、檢測方法的比較

在糞大腸菌群檢測方法中多管發(fā)酵法是傳統的檢測方法，操作步驟繁雜、干擾因素多 ，專一性差，需要確認實驗，因此檢測周期較長，需48h，不適于大量樣品的分析。但傳統方法均有原理簡單、費用較低、利于推廣的優(yōu)點，因此仍是常規(guī)監(jiān)測中的主要檢測方法。

紙片法與多管發(fā)酵法相比，紙片法只需在44.5℃下培養(yǎng)18～24h即可得出結果，紙片法快速省時簡便，適合大批量監(jiān)測和應急監(jiān)測。兩者比較見表2。

四、結語

實際水樣實驗表明，紙片法與多管發(fā)酵法檢測結果之間無顯著性差異，但是紙片法的檢測結果普遍略低于經典的多管發(fā)酵法，這可能是由于紙片法是將接種后的樣品直接置于培養(yǎng)箱中在44.5℃培養(yǎng)，而多管發(fā)酵法是將接種后的樣品先置于37℃環(huán)境中初發(fā)酵試驗，再置于44.5℃環(huán)境中復發(fā)酵試驗，比前者多一個富集過程。紙片法具有操作簡便、檢測時間短等優(yōu)點，能夠較為準確地判斷水樣微生物污染狀況，可以作為環(huán)境分析方法中糞大腸菌群的快速篩查方法。

參考文獻：

[1]楊璐，朱雨欣.多管發(fā)酵法與紙片法檢測水中糞大腸菌群的比較[J].科技視界，2017（34）：2.