納米抗體技術(shù)及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

翟艷芳，岳 鋒 ，王選年

（1.新鄉(xiāng)學(xué)院生物技術(shù)研究中心/生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南 鄭州 450001）

食品安全是被定義為食物中有毒或有害物質(zhì)引起影響人體健康的公共衛(wèi)生問題［1］。我國(guó)是飼料生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)、動(dòng)物源食品（肉類、雞蛋、牛奶、水產(chǎn)品）生產(chǎn)大國(guó)，是獸用化學(xué)制劑、農(nóng)藥使用量最大的國(guó)家之一。每年至少超過5萬t抗菌藥物用于養(yǎng)殖業(yè)，超過50%為藥物飼料添加劑，霉菌毒素污染農(nóng)產(chǎn)品普遍存在，生態(tài)環(huán)境中重金屬污染嚴(yán)重，從農(nóng)場(chǎng)到餐桌食品安全的風(fēng)險(xiǎn)無處不在。發(fā)展靈敏、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)是保障食品安全的最后一道防線。用于篩選成本較低、速度較快的生物分析，尤其是基于抗原-抗體特異性識(shí)別的免疫分析，是目前化學(xué)性危害因子快速檢測(cè)的主流技術(shù)。基因工程抗體是按人類設(shè)計(jì)所重新組裝的新型抗體分子，可保留或增加天然抗體的特異性和主要生物學(xué)活性，去除或減少無關(guān)結(jié)構(gòu)（如Fc片段），從而克服單克隆抗體在應(yīng)用范圍方面的缺陷，具有廣闊的應(yīng)用前景［2］。研究表明，在駱駝科動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的抗體能有效穿透腫瘤組織并快速消除。駱駝科動(dòng)物自然產(chǎn)生僅由重鏈組成的抗體，其中靶抗原識(shí)別部分由單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域組成，重鏈抗體可變區(qū)也被稱為納米抗體，屬于基因工程抗體，具有高溶解度、高穩(wěn)定性、高特異性、親和力。納米抗體由于其優(yōu)越的性能，在各種領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景，包括食品安全檢測(cè)、體內(nèi)和體外疾病診斷、靶向治療、靶向給藥等［3-4］。本文就納米抗體生物學(xué)特征、納米抗體展示技術(shù)以及在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行闡述。

1 納米抗體生物學(xué)特征

1.1 納米抗體結(jié)構(gòu)特征

完整常規(guī)抗體形似字母Y，基礎(chǔ)單元結(jié)構(gòu)由兩條完全相同的重鏈和兩條完全相同的輕鏈通過二硫鍵連接組成，具有12個(gè)蛋白域和完整的Fc段，組成駱駝科重鏈抗體的兩條完全相同的重鏈由鉸鏈區(qū)形成的鏈間二硫鍵連接，每條重鏈分子由一個(gè)鉸鏈區(qū)和兩個(gè)恒定區(qū)（CH2、CH3）及重鏈可變區(qū)（VHH）組成，具有6個(gè)蛋白域以及完整Fc片段。駱駝科重鏈抗體與之相比，缺乏輕鏈與恒定區(qū)CH1，CH1是與輕鏈經(jīng)鏈間二硫鍵相連的部位。單域抗體可變結(jié)構(gòu)域（VHH）僅具有1個(gè)蛋白域，無Fc片段，分子量小，僅為常規(guī)抗體的1/10，約為15 ku，具有增加其溶解度的結(jié)構(gòu)特征［5-8］。

人抗體重鏈的VH與駱駝重鏈抗體的VHH結(jié)構(gòu)存在約75%的同源性，兩者含有雖小但十分重要的差異，差異主要在于FR2和互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）中。在VH的FR2內(nèi)，4個(gè)高度保守的疏水性氨基酸（V37、G44、L45、W47）與VL結(jié)構(gòu)域相互作用，在VHH中被4種親水性氨基酸（F37、E44、R45、G47）取代，這些氨基酸的取代也解釋了納米抗體的溶解度增加現(xiàn)象。在VHH中，抗原僅被3個(gè)環(huán)識(shí)別而不是6個(gè)環(huán)，然而VHH中的環(huán)與常規(guī)mAb相比，缺少3個(gè)CDRs區(qū)，且環(huán)更長(zhǎng)。目前已有研究提出通過CDR的延伸擴(kuò)大VHH互補(bǔ)決定區(qū)，尤其是CDR3。VHH中較長(zhǎng)的CDR3允許其形成指狀結(jié)構(gòu)，呈暴露的凸環(huán)，能夠延伸到靶蛋白上的空腔中，使VHH能夠識(shí)別結(jié)合獨(dú)特的抗原表位，而凸環(huán)中的半胱氨酸可與CDR1或FR2的45位點(diǎn)的半胱氨酸形成環(huán)間二硫鍵，使得抗體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。VHH較長(zhǎng)的CDR將加大抗原結(jié)合位點(diǎn)的實(shí)際表面，補(bǔ)償VL結(jié)構(gòu)域提供的抗原結(jié)合表面區(qū)域的缺失，可以解釋VHH在單域形式中的抗原結(jié)合能力［9-10］。

1.2 納米抗體獨(dú)特優(yōu)勢(shì)

納米抗體相比常規(guī)抗體來說有許多獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，包括：（1）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，缺乏輕鏈，僅由單個(gè)重鏈可變區(qū)組成；分子量小，是常規(guī)抗體的1/10，約為15 ku［11］，穿透性好；性質(zhì)穩(wěn)定，在非常嚴(yán)苛的條件（強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫等）下仍能保持其生物活性，且適于進(jìn)行基因工程抗體改造進(jìn)化，具有優(yōu)異的穩(wěn)定性；（2）特異性強(qiáng)，親和力高，F(xiàn)R2結(jié)構(gòu)中存在氨基酸取代，使納米抗體比常規(guī)抗體片段更易溶，CDR3使Nbs能識(shí)別常規(guī)抗體不能識(shí)別的抗原位點(diǎn)或是不易接近的抗原位點(diǎn)，如酶活性位點(diǎn)和隱性病毒表位；（3）制備過程簡(jiǎn)便，可以在大腸桿菌及酵母菌等生物中高效表達(dá)，處于高溫和酸堿溶劑中更穩(wěn)定，明顯縮短研發(fā)周期、降低生產(chǎn)成本，有效解決抗體規(guī)?；苽涞碾y題；（4）組織滲透能力強(qiáng)，能夠更快地被正常組織清除，可與半衰期較短的放射性核素結(jié)合在體內(nèi)成像，應(yīng)用于分子顯像及靶向治療［12-13］。

2 納米抗體庫的分類

納米抗體庫根據(jù)構(gòu)建方式不同分為天然納米抗體庫、免疫納米抗體庫、半合成/合成納米抗體庫。

2.1 天然納米抗體庫

天然納米抗體文庫通常通過對(duì)非免疫羊駝外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行mRNA提取，克隆可變區(qū)基因庫并通過噬菌體展示及其他技術(shù)獲得納米抗體。從該類型的納米文庫中分離抗體的質(zhì)量取決于庫容大小及多樣性，天然抗體庫的多樣性取決于最初收集不同個(gè)體的淋巴細(xì)胞數(shù)量，還可以通過混合從不同個(gè)體動(dòng)物收集的血樣以確保文庫的多樣性，從而增加最終文庫大小。天然納米抗體文庫無抗原偏好性，可以為任何潛在的抗原鑒定更廣泛的結(jié)合物，例如可用于毒性抗原、免疫原性較弱抗原以及自身物質(zhì)的篩選，但由于未經(jīng)免疫刺激體細(xì)胞成熟的過程，所以只有從庫容大、多樣高的文庫中篩選時(shí)才能篩選出高特異性和親和力的抗體［14］。

2.2 免疫納米抗體庫

免疫納米抗體文庫的構(gòu)建通過免疫羊駝建立免疫抗體庫，構(gòu)建過程與天然庫相同。免疫抗體庫的制備首先需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，通過免疫抗原，體內(nèi)刺激特異性HCAbs在體內(nèi)進(jìn)行親和力成熟。通過克隆外周血淋巴細(xì)胞中的可變區(qū)基因庫，構(gòu)建庫容約107CFU/mL的抗體庫，并通過噬菌體展示或其他技術(shù)進(jìn)行篩選，所抽取的血液樣品代表免疫動(dòng)物血流中存在的淋巴細(xì)胞的免疫抗體文庫。該方法在很大程度上受到抗原天然抗原性的限制，當(dāng)抗原具有高致病性（傳染病劑）和毒性或?yàn)榉敲庖咴孕》肿訒r(shí)，通過免疫動(dòng)物獲取抗體是不可行的。此外，在駱駝科動(dòng)物身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)必須確保沒有染病和動(dòng)物死亡的風(fēng)險(xiǎn)，也沒有個(gè)體間免疫的自然差異，所以該方法在實(shí)施過程中的實(shí)際效果受動(dòng)物個(gè)體差異性、血流穩(wěn)定性、靶標(biāo)抗原性以及毒性等影響［15］。

2.3 半合成/合成納米文庫

庫容大小和多樣性是影響免疫文庫甚至天然文庫的抗體篩選效率的關(guān)鍵問題。體內(nèi)抗體親和力成熟在較大程度上依賴于體細(xì)胞超突變［16］，半合成/合成文庫正是模擬這個(gè)過程。通過確定抗原特異性的高變序列的CDR，以及保守的框架區(qū)（FR），保存納米抗體的結(jié)構(gòu)完整性。隨機(jī)化CDR的氨基酸長(zhǎng)度和堿基序列，特別是CDR3區(qū)，該區(qū)域?yàn)榭乖?抗體的主要結(jié)合位點(diǎn)［17］。Yan等［18］基于CABCII10保守的美洲駝單結(jié)構(gòu)域抗體片段（VHH）框架［19］，通過隨機(jī)化CDR3區(qū)引入多樣性，構(gòu)建合成噬菌體展示納米體文庫，成功地篩選出針對(duì)PA或NGAL的納米抗體。Chen等［20］基于單一框架，通過使用精確設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并堿基，將多樣性限制在4個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，設(shè)計(jì)和生成噬菌體展示的合成抗體文庫。Moutel等［21］基于穩(wěn)健的納米抗體支架hs2dAb，創(chuàng)建了具有高度多樣性的非免疫重組納米抗體庫，成功篩選及鑒定出針對(duì)高度多樣化靶標(biāo)的高功能性結(jié)合物。

3 納米抗體技術(shù)

納米抗體技術(shù)主要包括噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)以及在此基礎(chǔ)上的納米抗體改造技術(shù)等。

3.1 噬菌體展示技術(shù)

噬菌體展示技術(shù)（phage display technology）于1985年首次被George P. Smith提出。該技術(shù)基于外源肽或蛋白質(zhì)與噬菌體表面上的外源蛋白融合表達(dá)，依賴于待選蛋白質(zhì)與其基因之間的物理聯(lián)系。目的基因與絲狀噬菌體M13的p3基因的5’末端融合，導(dǎo)致顆粒在其尖端表達(dá)［22］。利用抗原抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)對(duì)噬菌體庫中大量抗體基因進(jìn)行篩選，與雜交瘤技術(shù)相比，噬菌體展示技術(shù)可以快速篩選出針對(duì)生物體內(nèi)任何靶蛋白的抗體，且繞開了雜交瘤免疫動(dòng)物等過程。通過將整個(gè)文庫與靶抗原一起孵育，可以對(duì)多種抗原包括純化的抗原、裂解物、完整細(xì)胞或組織切片等進(jìn)行篩選，但純化靶抗原仍是最簡(jiǎn)單、最有效的方法。洗脫的噬菌體可用于感染大腸桿菌、富集噬菌體，并用之后的輪次篩選［23-24］。ELISA篩選單個(gè)克隆以產(chǎn)生抗原特異性抗體，對(duì)ELISE陽性克隆進(jìn)行測(cè)序以推析出抗體的氨基酸［25］。

3.2 核糖體展示技術(shù)

核糖體展示技術(shù)（Ribosome Display Technology，RDT）已被證明是一種強(qiáng)大的體外選擇和體外分子定向進(jìn)化方法。核糖體展示最初是由Mat等提出［26］，用于從具有高度多樣性的天然文庫中選擇和進(jìn)化蛋白質(zhì)或肽，以結(jié)合任何選擇的目標(biāo)靶標(biāo)用于從折疊蛋白質(zhì)文庫中產(chǎn)生高親和力結(jié)合物。完整的核糖體展示步驟：制備大型DNA文庫，體外轉(zhuǎn)錄翻譯，親和篩選，體外分子定向進(jìn)化［27］。首先通過RT-PCR構(gòu)建scFv基因，使其作為抗體蛋白體外表達(dá)模板，然后在體外進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯表達(dá)，形成核糖體－mRNA－scFv復(fù)合物，隨后以固相化的抗原分子親和篩選出高親和力scFv，不需要克隆和轉(zhuǎn)化文庫。因此通過基于PCR的方法在文庫中引入隨機(jī)突變并選擇改進(jìn)的結(jié)合物是非常方便的，可以方便地進(jìn)行真正的定向進(jìn)化［28］。核糖體展示的抗體庫大小上限可達(dá)1015拷貝。通過核糖體展示技術(shù)，可分離抗小分子半抗原抗體。因此，這項(xiàng)技術(shù)可有效獲得所需抗體，且不需要?jiǎng)游锩庖?；能夠檢測(cè)農(nóng)業(yè)和食品工業(yè)中的小型半抗原，如殺蟲劑、環(huán)境污染物或有毒物質(zhì)。Guerfal等［29］將針對(duì)綠色熒光蛋白的駱駝科納米抗體的免疫文庫融合到釀酒酵母凝集素基因（SAGI）的C未端部分，核糖體展示已成功應(yīng)用于抗體單鏈Fv片段（ScFv），不僅可以選擇特異性而且可以選擇穩(wěn)定性和催化活性。Roth等［30］描述了從免疫的羊駝中構(gòu)建VHH抗體酵母表面展示文庫，以及在基于熒光激活細(xì)胞分選（FACS）的篩選過程中完成抗原特異性分子的簡(jiǎn)便分離。

3.3 抗體改造技術(shù)

體外展示方法篩選抗體受限于文庫的庫容及多樣性，從抗體庫中篩選得到的抗體通常親和力較低，此外通過免疫方法獲取特異性抗體，或者是展示方法鑒定過的抗體在免疫過程中，免疫原皮下注射的高濃度抗體具有潛在的可變性或難以預(yù)測(cè)的溶解度和粘度，抗體異常聚集而引發(fā)的抗體皮下傳送被阻止［31］。體外進(jìn)行抗體親和力成熟的方法有錯(cuò)配PCR法（error-prone PCR）、DNA改組法（DNA shuffling）和鏈置換法（chain shuffling）、分子模擬和計(jì)算機(jī)輔助抗體進(jìn)化。其中后者是當(dāng)前計(jì)算機(jī)科學(xué)與生物學(xué)相結(jié)合研究的重要體現(xiàn)。通過物理、化學(xué)和分子生物學(xué)以及計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)的手段進(jìn)行抗體修飾，對(duì)現(xiàn)有抗體進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造來改進(jìn)其特性［32］。這些特性包括結(jié)合親和力和特異性、折疊穩(wěn)定性、溶解度、藥代動(dòng)力學(xué)、效應(yīng)子功能，以及與雙特異性抗體和抗體-藥物偶聯(lián)物的附著相容性。Kurella等［33］使用同源模型引導(dǎo)的抗體人源化，用分子動(dòng)力學(xué)對(duì)抗體進(jìn)行動(dòng)態(tài)模擬，分析預(yù)測(cè)抗體的三維結(jié)構(gòu)以及動(dòng)力學(xué)特征，計(jì)算抗原抗體在結(jié)合過程中的能量變化，能量最小化應(yīng)用于該人源化模型。通過對(duì)關(guān)鍵位點(diǎn)的氨基酸的調(diào)整，重新引入關(guān)鍵構(gòu)象殘基。該方法不僅消除了空間沖突，還可以恢復(fù)與其抗原的結(jié)合親和力相關(guān)的功能，從而降低其免疫原性、交叉反應(yīng)率，甚至提高親和力與特異性等，可篩選出更加合理的抗體構(gòu)象，增強(qiáng)抗體屬性。改造后的抗體特性更適合在臨床和食品安全檢測(cè)中應(yīng)用。

4 納米抗體在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

納米抗體技術(shù)最初應(yīng)用于診斷和治療領(lǐng)域。目前，大多納米抗體生物技術(shù)應(yīng)用是指蛋白質(zhì)或其他大分子抗原，而少見報(bào)道涉及針對(duì)小半抗原（分子量≥1 500 u）使用的納米抗體。但越來越多研究表明，可以從高親和力納米抗體庫中篩選出高敏感性納米抗體。由于納米抗體識(shí)別抗原能力較強(qiáng)，可將其作為檢測(cè)探針用于檢測(cè)各種基體的小分子。通過從噬菌體展示抗體庫中篩選得到針對(duì)有害物質(zhì)的抗體，用于食品真菌毒素、小分子有毒物質(zhì)或農(nóng)藥殘留等有機(jī)小分子化合物的免疫學(xué)檢測(cè)中。

4.1 納米抗體檢測(cè)食品里的細(xì)菌及真菌毒素

毒素有的在食品中天然存在，有的在適合條件或在加工過程產(chǎn)生，其快速檢測(cè)方法是保障食品安全的重要措施。Wang等［34］通過噬菌體展示從免疫的羊駝納米抗體庫中分離出了一種對(duì)黃曲霉高度反應(yīng)性的納米抗體PO8-VHH，并開發(fā)了一種基于納米抗體和多克隆抗體的夾心ELISA，作為早期檢測(cè)系統(tǒng)，適合快速檢測(cè)曲霉農(nóng)產(chǎn)品污染。駱駝科重鏈抗體的可變域也越來越多地適用于檢測(cè)各種基質(zhì)中的小分子。Xu等［35］通過生物淘選從天然羊駝噬菌體展示抗體文庫中獲得高活性微囊藻毒素-LR（Microcystin-LR，MC-LR）噬菌體納米抗體。King等［36］為表明VHH可作為預(yù)防李斯特菌病的新型療法的潛力，從天然噬菌體展示文庫中鑒定出幾個(gè)結(jié)合InlB的LRR結(jié)構(gòu)域的VHH，VHH在InlB的c-Met相互作用位點(diǎn)結(jié)合，從而成為防止細(xì)菌入侵的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，表明VHH有作為預(yù)防李斯特菌病的新型療法的潛力。He等［37］首次報(bào)道了針對(duì)腸炎沙門氏菌的納米抗體，開發(fā)的納米抗體具有高的熱穩(wěn)定性和良好的特異性，并建立一種基于納米抗體的腸炎鏈球菌檢測(cè)方法，進(jìn)一步證明了基于納米抗體的試劑在生物分析化學(xué)中的實(shí)用性。

4.2 檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染

隨著人們對(duì)食品安全性關(guān)注的不斷提高，對(duì)食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染的檢測(cè)研究也越來越多，食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染問題主要是糧食、蔬菜、水果中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題。目前，常見農(nóng)藥主要分為有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類和氨基甲酸酯類四大類。殺蟲劑西維因在農(nóng)業(yè)中被廣泛使用，但其殘留物對(duì)食品安全和人類健康構(gòu)成威脅。Liu等［38］使用基于VHH的ELISA法測(cè)定食品中大麥和玉米中的西維因，能有效改善農(nóng)藥殘留檢測(cè)的靈敏度。苯氧基苯甲酸（3-PBA）是許多擬除蟲菊酯類殺蟲劑的人類尿代謝產(chǎn)物，可以用作生物標(biāo)志物。Zhang 等［39］檢測(cè)蔬菜和水果樣品中的呋喃丹時(shí)，通過從雙峰駝免疫文庫中分離出特異性識(shí)別呋喃丹的納米抗體；采用間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法，篩選出的納米抗體具有良好的熱穩(wěn)定性以及對(duì)甲醇和乙腈的高耐受性。Huo等［40］建立了一種基于納米抗體-堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）融合蛋白的快速靈敏的直接競(jìng)爭(zhēng)熒光酶免疫分析法（Direct competition-luciferase immunoassay,dc-FEIA），用于檢測(cè)3-PBA，對(duì)硫磷是一種廣泛使用的具有高毒性和持久性的有機(jī)磷農(nóng)藥。Zhang等［41］基于免疫的羊駝構(gòu)建了噬菌體VHH文庫，并通過與3-PBA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合篩選納米抗體，構(gòu)建了VHH-AP融合物與dc-FEIA，通過對(duì)大白菜、黃瓜和生菜樣品進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步證明了基于納米抗體在檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染中的可實(shí)踐性，表明基于納米抗體的免疫分析方法簡(jiǎn)便，快速且具有成本效益，因此是檢測(cè)呋喃丹的理想篩選工具。

5 納米抗體其他方面的應(yīng)用

5.1 在流行性傳染病的應(yīng)用

病毒感染容易引起流行性傳染病，一旦感染流感病毒、冠狀病毒等呼吸道病毒疾病會(huì)嚴(yán)重危害人類的健康和生命，Nbs具有作為抗病毒治療劑的優(yōu)勢(shì)［42-43］。Zhao等［44］成功篩選出專門針對(duì)MERS-CoV刺突蛋白的受體結(jié)合域。通過在體內(nèi)對(duì)C末端人Fc標(biāo)簽進(jìn)行改造Nbs的半衰期顯著延長(zhǎng)，Nbs可以有效地交叉中和從人和駱駝中分離出來的多種MERS-CoV株的感染。說明Nbs可以作為成本低、有效且廣譜的抗MERSCoV治療劑。Stalin等［45］指出Nbs不僅可以針對(duì)MERS-CoV，而且可以針對(duì)其他新興病原體開發(fā)新的干預(yù)措施。De等［46］開發(fā)了一種新型的抗甲型流感病毒方法，該方法可選擇性地將先天免疫細(xì)胞募集到病毒部位復(fù)制。針對(duì)暴露于表面的病毒抗原的VHH可以很容易地配備效應(yīng)器功能，這些功能可以觸發(fā)保護(hù)性抗病毒活性，而不是直接中和病毒。

5.2 在分子成像的應(yīng)用

在腫瘤成像方面，納米抗體與光學(xué)成像、PET、超聲成像及SPECT技術(shù)結(jié)合用于臨床疾病快速檢測(cè)診斷，由于納米抗體的分子量小，沒有Fc片段，可以高特異性地結(jié)合到靶標(biāo)，且可在體內(nèi)快速消除，使納米抗體在成像方面具有很強(qiáng)優(yōu)勢(shì)。

6 展望

納米抗體在食品安全檢測(cè)方面還需要進(jìn)一步深入研究及應(yīng)用，它雖克服了小分子功能性抗體的缺點(diǎn)，但仍有不足之處，如親和力低、穩(wěn)定性差等。體外改善納米抗體性能的方法：（1）確保半抗原-蛋白結(jié)合物的免疫原性，提高庫容量及多樣性，通過體外篩選，優(yōu)化的篩選策略，進(jìn)行抗體親和力成熟，提高抗體的表達(dá)量和表達(dá)效率［48］。（2）優(yōu)化幾個(gè)關(guān)鍵屬性：親和力、特異性、折疊穩(wěn)定性、溶解度以及與雙特異性納米抗體和納米抗體-藥物偶聯(lián)物的彼此間相容性，主要通過設(shè)計(jì)支架、互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）、改變特定的氨基酸等。而單一屬性進(jìn)行抗體改造時(shí)，可能會(huì)引起別的關(guān)鍵屬性發(fā)生質(zhì)的變化，從而使抗體改造效果不佳。所以，在進(jìn)行抗體設(shè)計(jì)時(shí)需要進(jìn)行系統(tǒng)的設(shè)計(jì)方法。隨著納米抗體改造技術(shù)不斷完善，納米抗體特有的優(yōu)勢(shì)也必將在食品安全檢測(cè)技術(shù)上發(fā)揮重要作用。