葡萄果實大小的分子研究進(jìn)展

谷世超，李 明，程大偉，王 莎，李芳菲，何莎莎，謝貝陽，陳錦永

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 鄭州果樹研究所/果樹生長發(fā)育與品質(zhì)控制重點開放實驗室，河南 鄭州 450009)

葡萄(VitisviniferaL.)是多年生落葉果樹，其品種多樣、色彩鮮艷、口味豐富，廣受消費者喜愛。葡萄果實的大小也千差萬別，造成果實大小差異的原因已有較多研究，決定因素主要有品種差異(基因遺傳的差異)、內(nèi)源激素的調(diào)控和環(huán)境因素的影響。研究調(diào)控葡萄果實大小的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有助于解釋這種差異。目前，關(guān)于葡萄果粒大小的研究多集中在探索影響果實大小的轉(zhuǎn)錄因子，尚沒有找到非常詳細(xì)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。對于這些轉(zhuǎn)錄因子的作用途徑及聯(lián)系也不清楚。果實大小還與其他很多因素有關(guān)，因此研究葡萄果實大小形成機理對生產(chǎn)和理論研究都具有重要意義。

1 植物內(nèi)源激素對果實大小的影響

植物內(nèi)源激素調(diào)控葡萄果實生長發(fā)育的研究已有較多報道。如生長素通過Aux/IAA基因家族調(diào)控細(xì)胞的分裂和增殖。在赤霉素的調(diào)控通路中，DELLA蛋白是一個關(guān)鍵的調(diào)控因子，調(diào)控了細(xì)胞的伸長。ABA通過影響果實內(nèi)部碳水化合物的積累來促進(jìn)細(xì)胞的增長。

生長素通過調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和細(xì)胞伸長，控制植物的生長發(fā)育。生長素信號通路主要由SAUR、GH3和Aux/IAA這3個基因家族調(diào)控。目前在植物中發(fā)現(xiàn)了色氨酸途徑、吲哚丙酮酸途徑和吲哚乙腈途徑3條主要IAA合成途徑。Aux/IAA與生長素響應(yīng)因子ARF形成二聚體，從而抑制ARF的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能，而ARF類轉(zhuǎn)錄因子是生長素的順式結(jié)合因子，調(diào)控其轉(zhuǎn)錄表達(dá)[1]。通過利用Affymetrix芯片在葡萄全基因組中進(jìn)行比，對發(fā)現(xiàn)ARF、AUX/IAA家族基因在葡萄果實發(fā)育的過程中的表達(dá)量升高，說明了生長素對于果實發(fā)育的調(diào)控作用[2]。Aux/IAA蛋白在番茄果實發(fā)育中通過減小細(xì)胞體積來有效抑制果皮的增厚[3]。生長素對于葡萄果實增大的作用在葡萄研究中較少報道，但是在其他果實中的研究已經(jīng)有所提及而且對生長素的主要作用因子已有研究，因此有必要解釋其促進(jìn)葡萄果實變大的機理。

赤霉素(gibberellin acid，GA)對于果實的作用是刺激細(xì)胞分裂和維持細(xì)胞伸長[4]。GA處理使得果實變大的機制尚不清楚，但目前在生產(chǎn)上已有大量運用。森田尼無核葡萄在GA處理后差異表達(dá)基因數(shù)量隨時間增加而增加，主要為表達(dá)下調(diào)[5]。這些顯著調(diào)控的基因與植物激素的合成、分解、代謝有關(guān)，此外外源GA3與生長素、細(xì)胞分裂素、油菜素甾體、脫落酸(ABA)、乙烯、細(xì)胞壁修飾酶等通過誘導(dǎo)細(xì)胞壁松弛引起漿果膨大過程。在赤霉素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，DELLA蛋白是GA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制因子，SPY和EL1能夠修飾并激活DELLA蛋白，對GA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)具有抑制作用[6]。在葡萄的簇出期、滿開期、漿果發(fā)育時期施用外源GA3后，果實內(nèi)部參與蔗糖和己糖代謝、激素和次生代謝以及非生物和生物刺激的多個轉(zhuǎn)錄組有增加[7]。在湯普森無核葡萄中GA信號通過DELLAs (VvDELLA2和VvDELLA3)、兩個GA受體(VvGID1a和VvGID1b)，以及兩個GA特異性F-box蛋白(VvSLY1a和VvSLY1b)傳導(dǎo)并發(fā)揮作用。VvDELLA蛋白和內(nèi)源性生物活性氣體的水平與不同器官對外源性GA的反應(yīng)有關(guān)[8]。隨著己糖濃度的增加，GA3增加了可溶性轉(zhuǎn)化酶的活性，這表明這種酶通過改變漿果的水勢參與了漿果的生長[9]。溶質(zhì)的存在會增加漿果的滲透勢，最終導(dǎo)致韌皮部的水輸送增加[10]。由于GA3處理后漿果大小的增加與漿果的含水量密切相關(guān)，因此水通道蛋白可能參與了這一反應(yīng)。在漿果發(fā)育過程中，水通道蛋白表達(dá)基因可能受到時間和空間上的調(diào)控[11]。干旱誘導(dǎo)的水通道蛋白基因MdPIP1;3在富士蘋果果實膨大過程中表達(dá)增強[12]。MdPIP1;3的轉(zhuǎn)基因番茄植株對干旱脅迫的耐受性增強，離體葉片失水速率比野生型慢，氣孔對干旱的響應(yīng)比野生型敏感。此外，轉(zhuǎn)基因番茄果實的長度和直徑比野生型增長更快而且果實大小和鮮重均大于野生型。

ABA通過與其他激素協(xié)同共同作用于果實成熟，其對于果實的膨大作用體現(xiàn)在對于果實內(nèi)含物質(zhì)的積累方面。在獼猴桃中ABA的含量影響果實內(nèi)部碳水化合物的積累[13]。ABA通過降低乙烯的合成，刺激番茄果實生長過程中的細(xì)胞擴(kuò)大，從而影響果實的大小[14]。糖的含量和成分調(diào)節(jié)著這些激素的信號。在玫瑰花瓣中碳水化合物的累積對于細(xì)胞大小具有決定性作用[15]。在水稻籽粒中ABA與蔗糖互作通過調(diào)節(jié)籽粒中灌漿關(guān)鍵的酶活性同時提高了蔗糖代謝的相關(guān)基因表達(dá)，提高了同化物向籽粒的轉(zhuǎn)運，進(jìn)而促進(jìn)籽粒的增大[16]。

細(xì)胞分裂素對于果實的調(diào)控作用也有較多報道。10 mg/L的CPPU可以促進(jìn)遼峰葡萄果粒膨大[17]。在‘藤稔’葡萄花后1周噴施25 mg/L GA3+5 mg/L CPPU處理較對照可以顯著提高果穗重、果粒重，說明細(xì)胞分裂素物質(zhì)對于葡萄果實膨大有作用[18]。關(guān)于細(xì)胞分裂素在擬南芥中的合成和轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑已經(jīng)闡述較為清晰。細(xì)胞分裂素類物質(zhì)是腺嘌呤的衍生物，植物體內(nèi)主要由反式玉米素型(tZ-CTK)和異戊烯基腺嘌呤型(iP-CTK)發(fā)揮作用。其中反式玉米素tZ及其核苷tZR，異戊烯基腺嘌呤iP及其腺苷iPR是主要的功能成分[19]。細(xì)胞色素P450單加氧酶CYP735A1和CYP735A2，負(fù)責(zé)將核苷酸形式的iPR轉(zhuǎn)化成核苷酸形式的 tZR，說明該家族對于細(xì)胞分裂素合成有促進(jìn)作用。CTK可以調(diào)控植物的生長發(fā)育，協(xié)調(diào)植物根冠關(guān)系。CPPU的使用提高了果實內(nèi)源IAA和GA3的含量并且降低了內(nèi)源ABA含量，促進(jìn)了甜瓜果實的生長[20]。

2 果實大小相關(guān)調(diào)控因子研究進(jìn)展

轉(zhuǎn)錄因子(TFs)作為基因表達(dá)的調(diào)控因子，在植物發(fā)育和對激素信號的響應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[21]。NAC、MADS-box、細(xì)胞色素P450(CYP)、bHLH、MYB這些轉(zhuǎn)錄因子家族對于果實的發(fā)育過程具有不同的作用。不同的轉(zhuǎn)錄因子家族通過相互作用共同完成了對于果實大小的調(diào)控，因此有必要闡明果實的具體調(diào)控路徑，從而明確各通路的協(xié)調(diào)配合作用。

2.1 NAC家族對果實大小的作用

NAC蛋白域是植物特異性轉(zhuǎn)錄因子中最大的家族之一，每個亞家族具有特定的功能[22]。VvNAC26為NAC家族的一員，與葡萄漿果的早期發(fā)育有關(guān)，參與調(diào)控葡萄果實的大小[23]。NAC蛋白對于細(xì)胞的增殖與擴(kuò)張的作用已有較多的報道。在楊樹(Populustrichocarpa)中，過表達(dá)PopNAC122降低了總體株高以及細(xì)胞的大小和數(shù)量[24]。在玫瑰花瓣中NAC轉(zhuǎn)錄因子通過和乙烯調(diào)控microRNA164轉(zhuǎn)錄后的RhNAC100模塊來調(diào)控細(xì)胞的體積[25]。在擬南芥中，RhNAC100通過介導(dǎo)乙烯從而微調(diào)microRNA164/RhNAC100模塊來調(diào)控細(xì)胞的膨脹[25]。NAC轉(zhuǎn)錄因子內(nèi)的啟動子作為苜蓿次生細(xì)胞壁增厚的主開關(guān)，其通過與SND1基因結(jié)合從而達(dá)到調(diào)控細(xì)胞壁增殖的作用[26]。NAC蛋白家族對于細(xì)胞的增殖與擴(kuò)張具有關(guān)鍵作用，又參與葡萄的早期發(fā)育，因此猜測在調(diào)控果實大小方面具有至關(guān)重要的作用。

2.2 MADS-box對果實大小的作用

通過對有核和無核葡萄的MADS-box家族中轉(zhuǎn)錄因子VviAGL11的表達(dá)量分析得知，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與種子木質(zhì)化和最終種子大小有必然關(guān)聯(lián)，促進(jìn)種子的伸長和細(xì)胞數(shù)量的增加[27]。葡萄種子數(shù)量和大小與葡萄果實的大小具有一定的相關(guān)性[28]。擬南芥中的GORDITA(B-sister MADS-box protein)通過細(xì)胞膨脹對于外胚層生長具有促進(jìn)作用[29]。MADS-box家族中的SlMBP21蛋白參與調(diào)控番茄的乙烯和生長素的濃度，其對于細(xì)胞擴(kuò)張具有負(fù)調(diào)性，從而抑制萼片的生長[30]。果實的最終大小和形狀是由器官發(fā)生決定的。器官發(fā)生是細(xì)胞生長、分化和形態(tài)建成的協(xié)調(diào)過程。MADS-box基因家族在植物的不同組織和部位都有調(diào)控細(xì)胞大小的功能，但在葡萄中的研究還較少，但是通過番茄和葡萄的轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)了類似的調(diào)控果實大小的轉(zhuǎn)錄因子[31]。因此，可以通過此過程來探究葡萄果實大小的調(diào)控通路。

2.3 CYP家族基因?qū)麑嵈笮〉恼{(diào)控

細(xì)胞色素P450(CYP)家族是植物蛋白最大的家族之一[32]，對果實大小具有一定的作用。在甜櫻桃(PrunusaviumL.)、擬南芥、小麥等作物上已有研究報道，其主要通過影響胚珠發(fā)育和種子中表皮細(xì)胞的增殖，來影響果實大小[33]，但其對葡萄果實大小的影響鮮有報道。細(xì)胞色素P450家族對于果實大小具有一定的作用。在甜櫻桃果實中PaCYP78A9基因通過介導(dǎo)中果皮細(xì)胞的增殖和膨脹進(jìn)而影響果實大小[34]。在一個水稻突變體中大顆粒的突變體編碼CYP78A13通過介導(dǎo)細(xì)胞周期進(jìn)展來調(diào)節(jié)籽粒大小[35]。小麥種皮細(xì)胞數(shù)由TaCYP78A3表達(dá)水平?jīng)Q定，其通過影響發(fā)育中的胚珠和種子中表皮細(xì)胞的增殖程度，進(jìn)而對于種子的大小具有影響[33]。P450家族基因?qū)τ诠麑嵓?xì)胞的增殖和膨脹具有作用，而且此家族轉(zhuǎn)錄因子在果樹中已經(jīng)可以驗證功能，因此有必要在葡萄中進(jìn)行深度挖掘。

2.4 bHLH家族對果實大小的調(diào)控作用

bHLH蛋白是一類在植物發(fā)育過程中發(fā)揮多種作用的轉(zhuǎn)錄因子。在水稻基因組中已鑒定出167種bHLH蛋白[36]。bHLH包含兩個功能獨特的區(qū)域：basic(b)區(qū)域用于DNA結(jié)合，helix-loop-helix(HLH)區(qū)域用于蛋白二聚[37]。bHLH家族通常與植物激素的作用機理有關(guān)，通過與激素通路的結(jié)合可以更好地解析植物激素對于果實大小的調(diào)控途徑。同時該轉(zhuǎn)錄因子家族又作用于一些新的基因，由此可以挖掘一些較新的路徑。

bHLH蛋白在肉質(zhì)果實的發(fā)育過程中通過調(diào)控生長素以及赤霉素對于果實大小發(fā)揮作用。bHLH家族中的VvCEB1蛋白調(diào)控生長素代謝基因和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而促進(jìn)了葡萄組織的變大[38]。桃子果實變大過程中生長素的形成受bZIP、NAC、TCP和SUPERMAN轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，通過形成生長素誘導(dǎo)因子和bHLH轉(zhuǎn)錄因子從而調(diào)控桃果實細(xì)胞擴(kuò)張[39]。生長素誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)AP2/ERF表達(dá)，增強細(xì)胞周期相關(guān)蛋白活性，導(dǎo)致細(xì)胞增殖。NAC、TCP、SUPERMAN等轉(zhuǎn)錄因子對于細(xì)胞的分生具有同樣的效果。因此細(xì)胞膨脹和細(xì)胞增殖協(xié)同進(jìn)行，導(dǎo)致桃果實膨大。生長素與這些轉(zhuǎn)錄調(diào)控信號之間的聯(lián)系目前還沒有較好的解釋，因此有必要進(jìn)行該家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究。GA誘導(dǎo)了bHLH家族的SlPRE2基因從而調(diào)控番茄果實變大。通過缺失突變體的研究發(fā)現(xiàn)，在突變體中內(nèi)源赤霉酸的合成減少，胎盤、種子和果皮細(xì)胞減少，同時參與調(diào)控細(xì)胞擴(kuò)大的SlXTH2和SlXTH5基因的表達(dá)減少[40]。

bHLH家族基因?qū)τ诩?xì)胞的增殖與擴(kuò)張也具有作用。擬南芥中的SPATULA(SPT)基因調(diào)控bHLH轉(zhuǎn)錄因子，對幼葉基部細(xì)胞增殖活躍的區(qū)域發(fā)揮作用，抑制了葉片大小和葉片內(nèi)的總細(xì)胞數(shù)。OsbHLH107是bHLH家族中與細(xì)胞周期相關(guān)的一種核轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控了水稻小穗殼細(xì)胞數(shù)量的增加。通過轉(zhuǎn)基因試驗驗證了相同的亞家族中OsPIL13 (OsPIL1)、OsPIL16 (APG)和OsPIL11都可以調(diào)節(jié)籽粒大小[41]。在擬南芥中轉(zhuǎn)錄變異體BPEp編碼一種bHLH轉(zhuǎn)錄因子，通過控制有絲分裂后細(xì)胞的擴(kuò)張來限制花瓣的大小[42]。bHLH家族的一對拮抗蛋白通過調(diào)控籽粒表皮細(xì)胞的長度影響水稻籽粒的大小，通過構(gòu)建這兩個轉(zhuǎn)基因體系發(fā)現(xiàn)過表達(dá)PGL1和沉默APG兩株系得到了一致的表型。并且兩者與果實中與長度相關(guān)的基因GS3和SRS3并無關(guān)聯(lián)[43]，這可能是一種新的調(diào)節(jié)因子。bHLH家族轉(zhuǎn)錄因子對于果實大小的調(diào)控涉及到多條激素和轉(zhuǎn)錄因子途徑，其可能是一個關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

2.5 MYB家族對果實大小的作用

MYB家族轉(zhuǎn)錄因子對于NAC家族具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)。MYB家族的作用大多數(shù)與花青素合成有關(guān)[44]，而且在楊梅的花青素合成過程中MYB和bHLH轉(zhuǎn)錄因子共同作用誘導(dǎo)花青素的合成[45]。但是近來研究發(fā)現(xiàn)在番茄的果實中，F(xiàn)SB1 MYBI復(fù)合物的形成對細(xì)胞擴(kuò)張有負(fù)面影響，尤其是對那些具有最大擴(kuò)張潛能的細(xì)胞，F(xiàn)SM1識別FSB1中與MYBI相同的區(qū)域，具有競爭作用[46]。葡萄中的R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子(VvMYB5b)在番茄中誘導(dǎo)矮化、葉片結(jié)構(gòu)的改變、花形態(tài)的改變、果實在綠熟期色素和光澤的改變以及種子萌發(fā)、受損等。果實和葉片的掃描電鏡證實了細(xì)胞大小和形狀的改變[47]。MYB的轉(zhuǎn)錄因子可能參與了葡萄果實調(diào)控的某個過程。

2.6 多轉(zhuǎn)錄因子交互作用影響果實大小

在果實大小的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，各轉(zhuǎn)錄因子間往往交互發(fā)生作用。MYB在果實大小的調(diào)控路徑中就和其他轉(zhuǎn)錄因子共同發(fā)揮作用，該轉(zhuǎn)錄因子可能是一個關(guān)鍵的中間轉(zhuǎn)錄成分，研究其作用可能對整個調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的揭示是一個關(guān)鍵。通過對番茄和葡萄轉(zhuǎn)錄組一致序列和微陣列數(shù)據(jù)庫的挖掘，確定了AP2-EREBP、ARF、bHLH、bZIP、C2C2-GATA、FHA、GeBP、GRAS、HB、LIM、MYB、PBF-2樣、SBP、WRKY等14個類群的23個轉(zhuǎn)錄因子作為果實早期發(fā)育的候選調(diào)控基因[31]。這些轉(zhuǎn)錄因子的確定是我們構(gòu)建細(xì)胞大小調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)與依據(jù)。在梨果實的發(fā)育過程中，利用兩個大小不同的梨品種，采用RNA-seq高通量測序，分析果實發(fā)育早期基因轉(zhuǎn)錄水平的變化，共鑒定了797個差異表達(dá)基因(DEGs)。發(fā)現(xiàn)果實大小可能與細(xì)胞分裂素和赤霉素的早期降解有關(guān)。其中NAC、ERF、bHLH轉(zhuǎn)錄因子的差異表達(dá)與細(xì)胞分裂素脫氫酶、赤霉素雙加氧酶基因高度相關(guān)[48]。通過對于梨果實的研究發(fā)現(xiàn)多種轉(zhuǎn)錄因子與激素合成降解途徑共同調(diào)控果實大小，但具體的調(diào)控路徑還不十分清晰。生長調(diào)節(jié)因子(GRF)是植物生長發(fā)育過程中的重要蛋白，在植物生長發(fā)育過程中起著重要作用[49]。從安柳甜橙中提取了9個柑橘GRF基因(CsGRF1-9)。通過PCR擴(kuò)增尋找到了兩個保守序列(QLQ和WRC)。經(jīng)過轉(zhuǎn)錄組分析尋找到差異表達(dá)的基因，同時通過啟動子區(qū)域分析找到兩種赤霉素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)順式作用原件。在CsGRF5和CsGRF6的啟動子都有兩種元件，但GA3處理對CsGRF5和CsGRF6的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響。相反，只有一種元素的CsGRF1、CsGRF2、CsGRF3、CsGRF7、CsGRF8、CsGRF9的轉(zhuǎn)錄水平則顯著受GA處理的影響。對GA處理的反應(yīng)表明，CsGRFs可能通過GA途徑或GA獨立途徑調(diào)控葉片和果實細(xì)胞的膨大，從而促進(jìn)其膨大。多轉(zhuǎn)錄因子共同作用于果實大小的調(diào)控在葡萄中尚未見報道，針對于這些多因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，我們可以借鑒其研究方案，在葡萄果實中類比其作用解析調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

3 影響果實大小的其他因素

關(guān)于調(diào)控果實大小的轉(zhuǎn)錄因子還有很多，利用其研究手段可以給我們解析調(diào)控果實大小的網(wǎng)絡(luò)提供理論支持。

AINTEGUMENTA (ANT)類轉(zhuǎn)錄因子是植物特有的一種轉(zhuǎn)錄因子，通過維持細(xì)胞在器官發(fā)生過程中的分生能力來調(diào)控花器官原基的細(xì)胞增殖和器官生長[50]。在葡萄藤基因中與花同源的基因，在該物種中具有類似的生物學(xué)作用。通過檢測花器官的大小與AtANT葡萄同系物VviANT1表達(dá)水平之間的相關(guān)性，證明ANT參與了葡萄果實大小的調(diào)控。在擬南芥中，轉(zhuǎn)錄因子AINTEGUMENTA (ANT)可以影響細(xì)胞增殖的結(jié)束，是調(diào)節(jié)組織大小的關(guān)鍵基因[51]。

FW2.2基因在番茄果實中控制果實重量。FW2.2是在植物中首先被克隆出來的QTL，定位到第2號染色體的末端[52]。FW2.2等位基因使果重增加，導(dǎo)致果實胎座的增大和小柱區(qū)域的增加，F(xiàn)W2.2 對于果實增重的貢獻(xiàn)率達(dá)到了30%[53，54]。FW2.2啟動子處的突變導(dǎo)致該基因在果實發(fā)育過程中異時表達(dá)，從而導(dǎo)致栽培番茄和其野生近緣種的果實大小不同。FW2.2是一種膜錨定蛋白，參與細(xì)胞周期途徑，從而控制子房的大小[55]。FW2.2 編碼一種未知功能的跨膜蛋白，與CKII激酶亞基相互作用形成細(xì)胞周期調(diào)控復(fù)合體，抑制細(xì)胞分裂，參與細(xì)胞周期信號途徑[56]。在玉米中的同源基因被命名為CNR，這兩種基因均在果實發(fā)育過程中通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的數(shù)量來影響器官的大小[57]。在桃基因組中鑒定出來FW2.2/CNR的家族成員，其置信區(qū)間落于控制甜櫻桃大小的數(shù)量性狀置信區(qū)間內(nèi)，通過櫻桃果實大小的分化也驗證了這些基因?qū)τ诠麑嵈笮〉恼{(diào)控作用。

4 研究展望

通過比較各轉(zhuǎn)錄因子在葡萄和其他果實中對于果實大小的調(diào)控作用發(fā)現(xiàn)果實大小的調(diào)控是一個復(fù)雜而且持續(xù)的過程。目前在以下幾個方面的研究還不夠深入：(1)果實大小是一個數(shù)量性狀，在不同的轉(zhuǎn)錄因子家族中證實了其對果實大小的作用，但整個調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚不清楚。(2)在果實的發(fā)育過程中，激素對果實的調(diào)控與轉(zhuǎn)錄因子之間的調(diào)控存在著某種聯(lián)系，兩者的作用途徑也存在一定的交集，但目前研究尚未解析清楚。(3)關(guān)于調(diào)控果實發(fā)育的其他影響因子，作用機制也不清晰。

對于后續(xù)果實大小的研究從蛋白作用開始，從轉(zhuǎn)錄因子靶蛋白的作用機制上找尋不同作用通路的交點，然后進(jìn)行整個網(wǎng)絡(luò)的研究。果實大小是一個數(shù)量性狀，其影響因素較多，有必要進(jìn)行主效影響因素的探究，尋找到主效作用因子從而合理構(gòu)建調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。應(yīng)借鑒利用目前研究較為透徹的思路與方法進(jìn)行新的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因素的探究，這樣才能較好地整體掌握轉(zhuǎn)錄調(diào)控通路。