兒童EB病毒感染與宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)相關(guān)性的研究進展

周雯倩 朱亞非

EB 病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一種嗜人類淋巴細(xì)胞的皰疹病毒。在人群中感染非常普遍［1］，兒童首次感染EB 病毒后，大多數(shù)無臨床癥狀或僅表現(xiàn)為輕度咽炎和上呼吸道感染，但仍有部分兒童會出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥的典型表現(xiàn)，甚至導(dǎo)致嚴(yán)重癥狀，如脾破裂、上呼吸道梗阻、噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥（HLH）、腦膜腦炎、心肌炎等嚴(yán)重并發(fā)癥而危及生命［2］。EBV 主要通過唾液接觸傳播，初始感染階段病毒大量復(fù)制，促使一些促炎癥細(xì)胞因子、生長因子和細(xì)胞信號分子產(chǎn)生，導(dǎo)致病毒傳播和原發(fā)感染的建立［3］。EBV 原發(fā)性感染后，在B 細(xì)胞中建立潛伏感染，使感染者終生攜帶病毒。在少數(shù)情況下，EBV 可感染T 淋巴細(xì)胞或NK 細(xì)胞，導(dǎo)致持續(xù)活動性感染，引起EBV 相關(guān)的增殖性疾病。當(dāng)人體免疫力低下時，EB 病毒在B 細(xì)胞內(nèi)被激活并大量增殖，且在人群中廣泛傳播。因此，宿主的免疫系統(tǒng)對EB 病毒的調(diào)控與人類多種疾病和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。機體控制EBV感染主要依靠固有免疫及特異性免疫，有研究發(fā)現(xiàn)EBV 感染引起的不同臨床表現(xiàn)可能與Toll 樣受體（Toll-like receptors，TLRs）這類參與固有免疫的蛋白質(zhì)分子及人體固有免疫與特異性免疫協(xié)同作用產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子的基因多態(tài)性有關(guān)，本文就對EBV 感染的宿主免疫反應(yīng)中常見的TLRs、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、干擾素γ（IFN-γ）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子及基因多態(tài)性與EBV 感染關(guān)系的研究進行綜述。

1 TLRs

先天免疫系統(tǒng)是細(xì)胞抵御病毒的第一道防線。與其他皰疹病毒一樣，EBV 感染的結(jié)果易受先天免疫反應(yīng)的影響［7］。TLRs 是重要的模式識別受體（Pattern Recognition Receptors，PRRs），一類相對保守的跨膜蛋白，參與構(gòu)成人體抵御病原入侵的第一道屏障，能識別病毒的雙鏈RNA，并將識別信號傳遞至核，從而指導(dǎo)有關(guān)細(xì)胞因子的合成，使宿主免疫系統(tǒng)識別入侵病原體并經(jīng)常把它們清除出去，成為連接固有免疫及特異性免疫的橋梁。在人類B 細(xì)胞表面有高水平的TLR-1、6、7、9、10 受體表達，它們在TLRs 配體刺激下可促進多種促炎細(xì)胞因子（如 IL1α、IL1β、IL-6、IL-8和 TNFα 等）產(chǎn)生，在控制EBV 感染的過程中發(fā)揮著重要的作用。TLRs 由于編碼基因突變產(chǎn)生基因多態(tài)性可導(dǎo)致其自身轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)節(jié)異常，可能影響對感染的易感性，甚至改變慢性炎癥性疾病和癌癥的發(fā)病風(fēng)險。研究顯示［8］，EBV陽性重癥肌無力患者的胸腺中TLR7 和TLR9 mRNA 水平顯著升高。Valente RM 等［9］研究表明，TLR7 激活刺激EBV感染細(xì)胞中EBV LMP1 的表達，從而發(fā)揮抗病毒作用。一項針對口腔鱗狀細(xì)胞癌的研究中顯示［10］：TLR9（-1486T/C）基因型與EBV 感染之間可能存在相互作用，增加癌癥/癌前風(fēng)險。TLR4（+ 896A/G）的G 等位基因發(fā)生癌前病變的風(fēng)險也高4.5 倍，說明TLR9（-1486T/C）和TLR4（+ 896A/G）的遺傳多態(tài)性可能影響EBV 的共同感染，并在疾病的發(fā)展中起重要作用。

2 IL-1

IL-1 又稱為“淋巴細(xì)胞刺激因子”，主要包括IL-1β、IL-1α 及IL-1 受體拮抗劑3 個成員，這三種蛋白質(zhì)依次由IL-1β、IL-1α 和IL-lRN 三個基因編碼，所有這三個基因都是多態(tài)的。研究［7］分析了EB 病毒血清陰性和血清陽性人群中IL-1 復(fù)合物基因的基因型，結(jié)果顯示，在EB 病毒血清陰性的人群中IL-1RA 等位基因2/IL-1β-511 等位基因2 的攜帶率減少，該基因的攜帶者在體外具有更高的產(chǎn)生IL-1β和IL-1RA 的能力，且攜帶IL-1β-511T 或IL-1RN 等位基因2 具有高分泌IL-1β 的能力，炎癥反應(yīng)持續(xù)時間長，炎癥反應(yīng)嚴(yán)重，即IL-1β-511CT/TT 和/或IL-1RN 等位基因2 基因型可能不利于對抗EB 病毒感染。Hatta 等［8］分別對30 例傳染性單核細(xì)胞增多癥（IM）患者、28 例EBV 相關(guān)噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥（EBV-HLH）患者、31 例慢性EB 病毒感染（CAEBV）患者及81 例EBV 血清陽性健康對照組進行研究發(fā)現(xiàn)，IM 患者的IL-1α-889 C 等位基因頻率低于對照組。另一研究顯示［14］IL-1β+3953C/T 基因型在EB 病毒 DNA 陽性胃癌中的頻率顯著增加，此種基因型個體可產(chǎn)生更多的IL-1β，即IL-1β+3953T 基因型的血清IL-1β 水平較高，即該基因型也不利于對抗EBV 感染。

3 IFN-γ

IFN-γ 起初被稱為“巨噬細(xì)胞活化因子”，是調(diào)節(jié)病毒和細(xì)胞內(nèi)病原體的有效天然免疫應(yīng)答所必需的。人IFN-γ的基因位于染色體12q24.1。其具有四個外顯子和三個插入序列，在這些區(qū)域中，特定的DNA 序列可能具有不同的效果，一些增強，另一些則抑制基因激活。細(xì)胞因子基因表達可能只需要一些位點，而其他位點可能調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。2005 年的一項研究［10］采用嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠模型進行試驗，發(fā)現(xiàn)IFN-γ 的+874 A/A 基因型在快速出現(xiàn)淋巴增殖性疾?。↙ymphoproliferative disorders，LPD）的小鼠外周血白細(xì)胞中的頻率明顯升高，即IFN-γ +874 處A等位基因與LPD 的產(chǎn)生有顯著關(guān)聯(lián)。其他研究［11］也提到IFN-γ+874 處的A/A、T/A 和T/T 基因型分別對應(yīng)低、中、高體外IFN-γ 的產(chǎn)生，即人IFN-γ 基因+874 處的T 等位基因與高產(chǎn)量有關(guān)。Lee 等［12］分別對低EBV 載量、高EBV載量/無PTLD 和活檢證實的PTLD 三組患者進行研究發(fā)現(xiàn)，移植后淋巴增殖性疾?。≒ost-transplant lymphoproliferative disorders，PTLD）患者中IFN-γ 基因大多數(shù)為低分泌IFN-γ 的基因型（A/A），而高EBV 載量/無PTLD 患者的IFN-γ 基因大多為中/高分泌IFN-γ 的基因型，這可能表明IFN-γ 是控制EBV 感染和PTLD 發(fā)展的關(guān)鍵因素，IFN-γ 低生產(chǎn)者似乎在EBV 監(jiān)測中效果較差。

4 TGF-β1

TGF-β1 是一種普遍存在的多功能細(xì)胞因子，可控制許多細(xì)胞類型的增殖、分化和激活，可抑制多種T 細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞（APC）功能，許多病毒感染期間TGF-β1 增加。TGF-β1 與EBV 的激活、復(fù)制與轉(zhuǎn)化增強有關(guān)，在EBV 介導(dǎo)的癌癥中起重要作用。編碼TGF-β1 的人基因位于染色體19q13 上，該細(xì)胞因子的8 個基因多態(tài)位點已由He 等人鑒定。研究［8，13］發(fā)現(xiàn)TGF-β1 基因密碼子10 的C 等位基因與高水平的TGF-β1mRNA 及其蛋白質(zhì)相關(guān)。Hsu 等［14］也提到TGF-β1（密碼子25）GG 基因型與該蛋白的表達增加有關(guān)。Hatta 等［8］的研究同時也發(fā)現(xiàn)，3 個患病組患者TGF-β1 密碼子10 的C 等位基因頻率顯著高于對照組，由此推測，TGF-β1 密碼子10（+869）處的多態(tài)性（C 等位基因）抑制了對EBV 的免疫反應(yīng)。

5 TNF-α

腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）是一種重要的促炎細(xì)胞因子，包括TNF-α 和TNF-β，參與許多重要細(xì)胞過程的調(diào)節(jié)以及炎癥，先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中起作用，并且還涉及多種人類疾病。調(diào)節(jié)區(qū)DNA 序列變異的存在可能干擾TNF 基因的轉(zhuǎn)錄，影響TNF 的循環(huán)水平，從而增加對人類疾病的易感性。有研究認(rèn)為TNF 在疾病的急性期升高，隨著病情的好轉(zhuǎn)下降［15］。編碼TNF-α 基因位于主要組織相容性復(fù)合物的III 類區(qū)域6 號染色體的HLA-B和HLA-DR 基因之間。Elahi 等［16］已經(jīng)在TNF-α 啟動子內(nèi)的相對于轉(zhuǎn)錄起始位點的位置鑒定了10 種TNF-α 多態(tài)性。研究發(fā)現(xiàn)［17］，TNF2（TNF-α-308A）等位基因比普通等位基因更強大的轉(zhuǎn)錄激活因子，其與高TNF-α 生產(chǎn)相關(guān)。Wu 等［18］研究發(fā)現(xiàn)EBV 陽性的胃癌患者中TNF-α 基因中高生產(chǎn)者等位基因（-308A）的頻率顯著升高，故而可以總結(jié)TNF-α-308A 等位基因可能不利于對抗EBV 感染。

6 IL-6

IL-6 初名為“B 細(xì)胞刺激因子-2（BSF-2）”，參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞類型的增殖、分化和活性，以及參與神經(jīng)/內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)的動態(tài)平衡，尤其是在急性反應(yīng)、促炎/抗炎途徑的平衡和應(yīng)激反應(yīng)及造血中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。人IL-6 基因位于7 號染色體（7p21）的短臂上，作為EBV 感染的B細(xì)胞的生長因子，導(dǎo)致免疫球蛋白產(chǎn)生增加和B 細(xì)胞永生化，也已顯示出在EBV 永生化的B 細(xì)胞中高表達，從而促進腫瘤生長。在IL-6 啟動子區(qū)存在四個不同的SNP 位點。Cliff等［19］對EBV 相關(guān)Burkitt 淋巴瘤（eBL）進行研究后發(fā)現(xiàn)，IL-6 啟動子位置-174G/C 基因多態(tài)性對體內(nèi)IL-6 的產(chǎn)生有影響，G 和C 等位基因的表達分別增加和降低，且Cozen 等［20］對于具有霍奇金淋巴瘤（HL）和匹配對照的雙胞胎受試者進行研究，發(fā)現(xiàn)IL-6 啟動子位置-174 處C 等位基因與疾病風(fēng)險降低相關(guān)，表明具有保護作用，但Cliff I 等的研究并未發(fā)現(xiàn)IL-6 啟動子的等位基因或單倍型與eBL 風(fēng)險的關(guān)聯(lián)，即IL-6 啟動子SNP 可能與EBV 負(fù)荷之間沒有關(guān)聯(lián)，這還需要更多的研究進行驗證。

7 IL-10

IL-10 稱為“細(xì)胞因子合成抑制因子”，有廣泛的抑制促炎細(xì)胞因子的作用，是人體免疫系統(tǒng)的一個重要調(diào)節(jié)因子。其主要生物活性是抗炎與免疫調(diào)節(jié)，當(dāng)機體遭受EB 病毒感染后IL-10 分泌增加，發(fā)揮抗感染和保護機體的作用。EB病毒相關(guān)性噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥（EBV associated hemophagocytic lymphohistocosis，EBV-HLH）是由EBV 所致的一種嚴(yán)重臨床綜合征，目前研究表明，可能包括IL-10 在內(nèi)的高細(xì)胞因子“風(fēng)暴”有關(guān)［21］。人類lL-10 基因定位于1號染色體（1q31-q32），其啟動子區(qū)存在3 種基因多態(tài)位點，分別是-1082（G/A）、-819（C/T）和-592（C/A）。Oduor 等［19］對IL-10 的3 個單體型基因位點的研究發(fā)現(xiàn)：-1082A、-819T和-592A 單體型與IL-10 低表達有關(guān)，反之與高表達有關(guān)。Helminen 等［22］通過對血清EBV DNA 陽性和陰性血樣及經(jīng)住院治療的EBV 感染患者研究發(fā)現(xiàn)，EBV DNA 陰性獻血者攜帶IL-10（-1082G）高于血清陽性獻血者或嚴(yán)重EBV 感染者，而且此位點在血清陰性獻血者和輕度癥狀或無癥狀疾病患者中比需要住院的EBV 感染患者更常見，他們的數(shù)據(jù)顯示，IL-10-1082 基因中的高生產(chǎn)者等位基因（G）可防止EBV 感染，而低生產(chǎn)者等位基因（A）使個體更容易受到嚴(yán)重EBV 感染。Merja 等［23］研究EBV 陰性及陽性兒童血清中IL-10 基因型和單倍型情況，發(fā)現(xiàn)攜帶IL-10 ATA 單倍型的患兒對早期EBV 感染有保護作用，這種作用是由于攜帶此基因型的患兒感染EBV 的早期體內(nèi)可產(chǎn)生高濃度的IL-10，導(dǎo)致患兒早期遭受EBV 感染時抗病毒作用較強。Vollmer-Conna 等［24］研究發(fā)現(xiàn)，對于IL-10-592C 等位基因（IL-10-592CC 基因型）純合的個體在急性疾病期間經(jīng)歷嚴(yán)重癥狀的風(fēng)險低于具有IL-10-592CA 或-592AA 基因型的受試者，即IL-10-592C 等位基因具有對抗EBV 的作用。Yali 等［25］對EBV-HLH 患者與顯著高于IM 患兒及健康兒童進行研究顯示：IL-10-592C 等位基因和IL-10-592C/C 基因型頻率顯著升高，因此，若這一基因突變會降低EBV-HLH 中IL-10 的表達，從而使個體更易受到嚴(yán)重的EBV 感染。

綜上所述，EB 病毒感染時宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)是多方面的，尤其是EB 病毒相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞因子關(guān)系尤為密切。進一步明確作用機制可為EB 病毒感染的診斷、預(yù)防和治療提供新的思路。