HPLC法測(cè)定解郁合劑中補(bǔ)骨脂的含量

韓梅海，崔國(guó)濤，韓 嫻

（濱州華海白癜風(fēng)醫(yī)院，山東 濱州 256600）

解郁合劑為我院制劑，由當(dāng)歸、丹參、柴胡、香附、郁金等12味中藥組成，能疏肝行氣，活血祛風(fēng)，補(bǔ)益肝腎，用于肝郁氣滯所致白癜風(fēng)的治療[1]。本品為復(fù)方制劑，如按《中國(guó)藥典》方法[2]開(kāi)展補(bǔ)骨脂的含量測(cè)定，會(huì)出現(xiàn)雜質(zhì)峰干擾大，異補(bǔ)骨脂素峰形小，識(shí)別困難，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。因此研究人員對(duì)對(duì)補(bǔ)骨脂含量測(cè)定供試品制備方法和色譜條件[3]進(jìn)行了修訂。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法雜質(zhì)峰干擾小、重復(fù)性好、回收率高，并且結(jié)果穩(wěn)定，為制定解郁合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC-15C型）、分析天平（AUW-120D型），日本島津科技有限公司。

甲醇（批號(hào)20190617），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；補(bǔ)骨脂素（批號(hào)110739-201115，含量99.3%），中國(guó)食品藥品檢定研究院；異補(bǔ)骨脂素（批號(hào)110738-201614，含量99.9%），中國(guó)食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水；解郁合劑（批號(hào)19101201），濱州華海白癜風(fēng)醫(yī)院。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為WondaSil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（42:58）；檢測(cè)波長(zhǎng)為246 nm；柱溫為30℃；流速為1.0 mL·min-1；理論塔板數(shù)以補(bǔ)骨脂素峰計(jì)n＞3000。

2.2 樣品處理方法

2.2.1 供試品溶液的制備

精密量取解郁合劑5 mL，置于25 mL量瓶中，加入10mL甲醇，經(jīng)10 min超聲處理（功率150W，頻率100 kHz），自然冷卻，加甲醇定容至刻度后搖勻，離心10 min（轉(zhuǎn)速為3000r·min-1），過(guò)濾取濾液作為供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品0.0044 g、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品0.0046g，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得補(bǔ)骨脂素濃度為0.0874 mg/mL、異補(bǔ)骨脂素濃度為0.0920 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 陰性對(duì)照溶液

根據(jù)解郁合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中不同處方比例，制成補(bǔ)骨脂的陰性對(duì)照樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果解郁合劑中其他成分對(duì)補(bǔ)骨脂含量測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系的考察

取濃度為0.0874 mg/mL補(bǔ)骨脂素、0.0920 mg/mL異補(bǔ)骨脂素的對(duì)照品溶液各1、2、3、5、10 mL于25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到5個(gè)濃度梯度，依次進(jìn)樣20μL，按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，按照峰面積對(duì)對(duì)照品溶液濃度開(kāi)展回歸計(jì)算，補(bǔ)骨脂素Y=1.02642×108X+60915.7,r=0.99992、異補(bǔ)骨脂素Y=1.22031×108X+70479.9，r=0.99993，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂素在0.00874～0.0874 0mg/mL、異補(bǔ)骨脂素在0.00920～0.09200 mg/mL線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一批次解郁合劑適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定含量，結(jié)果補(bǔ)骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.4%＜2.0%、異補(bǔ)骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.4%＜2.0%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批次解郁合劑，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液6份，按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，每次進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，結(jié)果補(bǔ)骨脂素平均含量0.1275mg/mL，RSD=0.8%＜2.0%、異補(bǔ)骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.6%＜2.0%，表明本方法重復(fù)性較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同批次解郁合劑，按“2.2.1”項(xiàng)下制備方法獲取供試品溶液，按照0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h進(jìn)樣，每次進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，結(jié)果補(bǔ)骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%、異補(bǔ)骨脂素平均含量0.1020mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，表明補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量樣品1 mL各6份，各自加入等量對(duì)照品，按“2.2.1”項(xiàng)下制備方法取得供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件分別展開(kāi)測(cè)定，記錄下色譜圖，計(jì)算平均回收率補(bǔ)骨脂素100.15%，RSD=1.4%＜2.0%、異補(bǔ)骨脂素99.06%，RSD=0.8%＜2.0%。

2.9 流動(dòng)相比例調(diào)整影響實(shí)驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下的供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，調(diào)整流動(dòng)相比例（有機(jī)相±5%內(nèi)），其他色譜條件不變，基線穩(wěn)定后，分別精密吸取供試品溶液20μl進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算補(bǔ)骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，異補(bǔ)骨脂素平均含量0.1015 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，流動(dòng)相的有機(jī)相比例在±5%內(nèi)調(diào)整，RSD＜2.0%，對(duì)測(cè)得結(jié)果無(wú)明顯影響，RSD＜2.0%。

2.10 柱溫影響試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下的供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，調(diào)整柱溫（±5℃內(nèi)），其它色譜條件不變，基線穩(wěn)定后，分別精密吸取供試品溶液20μl進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算補(bǔ)骨脂素平均含量0.1285mg/ml，RSD=0.4%＜2.0%、異補(bǔ)骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，柱溫在±5℃內(nèi)調(diào)整，對(duì)測(cè)得結(jié)果無(wú)明顯影響，RSD＜2.0%。

2.1.1 流動(dòng)相流速影響試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下的供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定。調(diào)整流動(dòng)相流速（±0.1 ml/min），其它色譜條件不變，基線穩(wěn)定后，分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各20 μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算補(bǔ)骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.6%＜2.0%、異補(bǔ)骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.8%＜2.0%，流動(dòng)相流速在±0.1ml/min內(nèi)調(diào)整，對(duì)測(cè)得結(jié)果無(wú)明顯影響，RSD＜2.0%。

2.1.2 供試品測(cè)定

精密量取6批供試品，按“2.2.1”項(xiàng)下制備方法得到供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件開(kāi)展含量測(cè)定，結(jié)果RSD為0.33%。

3 討 論

3.1 考察結(jié)果

通過(guò)以上考察，結(jié)果表明采用該方法進(jìn)行含量測(cè)定線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，回收率高，方法靈敏；考察流動(dòng)相比例、流速、柱溫影響試驗(yàn)?zāi)陀眯院?，干擾少。

3.2 供試品溶液制備方法的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)考察了超聲與加熱回流的制備方法，發(fā)現(xiàn)超聲與加熱回流提取15 min效果相當(dāng)，考慮到操作的便捷性，選用超聲提取的方法，進(jìn)而對(duì)超聲提取時(shí)間（5、10、15 min）進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)超聲提取10 min與15 min含量基本一致，故選擇超聲提取10 min。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定解郁合劑中補(bǔ)骨脂的含量，具有簡(jiǎn)單快速，準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性與穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可客觀反映制劑質(zhì)量，對(duì)提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要的意義。