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    傳統(tǒng)口蹄疫滅活疫苗效力檢測方法對動物替代方法應用效果研究

    2020-12-17 09:53:08張常鎖張金鳳呂魯杰聶培婷
    獸醫(yī)導刊 2020年22期
    關鍵詞:細胞毒豚鼠效價

    張常鎖 張金鳳 呂魯杰 陳 君 聶培婷

    (天康生物股份有限公司制藥事業(yè)部,新疆烏魯木齊 830032)

    口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的傳染病,嚴重危害各國的畜牧業(yè)。防控口蹄疫疫病的方式,主要采取強制免疫口蹄疫滅活疫苗。我國在檢測口蹄疫滅活疫苗效力中規(guī)定為疫苗50%動物保護劑量(PD50)。我國強制免疫口蹄疫疫病,保證防控的效果,需要大量的本動物進行效力檢驗。檢驗動物的獲取比較困難,成本高,勞動強度大,周期長。國內外在口蹄疫滅活疫苗效力檢驗研究中,積極探索可替代本動物方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    實驗動物:從試驗動物廠獲取400只普通級豚鼠,300-400 g。從定點動物基地,獲取136只健康非免疫牛,6-12月齡。

    病毒:從公司中獲取FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒,F(xiàn)MDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒。

    疫苗:選取6批??谔阋逜sia-1型滅活疫苗。

    建立豚鼠發(fā)病模型:隨機選取8只豚鼠,平均分為兩組。一組FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒進行攻毒。一組用FMDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒進行攻毒。

    豚鼠免疫劑量試驗:選取四組豚鼠,每組15只。三組為免疫組,一組為空白對照組。分別選取0.5 ml、1 ml、1.5 ml的免疫劑量。四周后,四組豚鼠均接種FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒。

    1.2 試驗口蹄疫滅活疫苗效力

    60只豚鼠隨機分為四組,每組15只。分別選取0.125 ml、0.25 ml、0.5 ml、1 ml的免疫劑量,檢測??谔阋逜sia-1型滅活疫苗。免疫四周后。全部FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒攻毒。觀察10 d,計算疫苗的PD50。

    選取健康非免疫牛18只,隨機分為三組,每組6只。??谔阋逜sia-1型滅活疫苗分別免疫0.22 ml、0.67 ml、2 ml。三周后,全部進行FMDV Asia-1/JSL MF8BF2攻毒。觀察10 d,計算疫苗的PD50。

    1.3 血清學試驗

    在免疫第一周、第二周、第三周、第四周,分別在每組隨機選取豚鼠,進行心臟采血,檢測FMDV Asia-1型抗體效價。

    2 結果與分析

    細胞毒、乳鼠毒攻毒后,豚鼠均出現(xiàn)典型臨床癥狀,并且更明顯的是乳鼠毒,豚鼠四肢趾部有明顯的水泡。根據(jù)豚鼠的發(fā)病情況,計算豚鼠的半數(shù)感染量105.67/0.2ml。通過細胞毒感染,對照組、108發(fā)病率為0。107、106的發(fā)病率為25%。105的發(fā)病率為75%。103、104的發(fā)病率為100%。

    豚鼠免疫后四周,進行細胞毒攻毒。使用1.5 ml劑量組的豚鼠,保護率為100%。1 ml劑量組也為100%。0.25ml劑量組的為0。0.5ml劑量組的為70%。因此,最適免疫劑量為1 ml。

    進行PD50效力試驗,結果如下。N010與N007實驗結果多次重復沒有大的差距,具有良好的重復性和穩(wěn)定性。

    表1 ??谔阋逜sia-1型滅活疫苗效力檢驗

    對照組第四周后抗體陰性。在免疫第一周后,豚鼠出現(xiàn)抗體,在第二周后,0.25 ml劑量組、1 ml劑量組的抗體水平有所減少,隨后增加,到第四周后,達到最高的抗體水平??贵w水平與攻毒后保護率呈現(xiàn)正向關系。攻毒保護與抗體效價無明顯的臨界值。豚鼠PD50與牛PD50有明顯的線性關系。

    圖1 豚鼠PD50預測??谔阋逜sia-1型滅活疫苗效力

    3 總結

    本次研究的試驗動物使用豚鼠,對口蹄疫滅活疫苗的效力進行評價,替代本動物牛,檢測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗的效力。結果顯示牛PD50與豚鼠PD50檢測結果明顯相關,具有顯著的線性關系。免疫劑量不同,抗體效價也有不同,呈現(xiàn)正相關的關系。但也有幾乎檢測不到抗體的動物,受到保護,有抗體效價高的,仍然發(fā)病,說明血清學方法檢測穩(wěn)定性較差,需要盡量增加試驗動物的數(shù)量。

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