市售黑順片口嘗味道與生物堿及膽巴含量的關(guān)系探討△

楊輝，李欣欣，常永卓，劉娜，韓博，劉俊玲，孫詠梅，王建升，王靖越，李飛*，王麗霞*

1.中國中醫(yī)科學(xué)院 廣安門醫(yī)院，北京 100083；2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 102488；3.北京豐臺(tái)醫(yī)院，北京 100070

黑順片為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliiDebx.子根(附子)的加工品之一[1]。附子藥用始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，具有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、散寒止痛等功效，被譽(yù)為回陽救逆第一品，其藥性毒烈，臨床多以炮制品入藥，沿用至今的炮制規(guī)格主要有黑順片、白附片、炮附片等。其中黑順片是臨床應(yīng)用的主流品種，為新鮮附子用食用膽巴水腌制、煎煮以防腐減毒，再漂去膽巴，切片后蒸制、干燥而成[3]。

近期在入庫驗(yàn)收環(huán)節(jié)，筆者發(fā)現(xiàn)，黑順片普遍出現(xiàn)口感咸澀麻舌的現(xiàn)象，與《中華人民共和國藥典》2015年版(以下簡稱《中國藥典》)一部中“味淡”的性狀要求差異較大，同時(shí)伴有質(zhì)重、色深、表面出現(xiàn)灰白色結(jié)晶樣物等現(xiàn)象(見圖1～3)，但是各項(xiàng)檢測數(shù)據(jù)完全符合藥品標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過調(diào)研，初步判斷這是由于黑順片炮制過程規(guī)程中“脫膽”環(huán)節(jié)沒有做好，膽巴殘留過多導(dǎo)致的，而《中國藥典》2015年版等標(biāo)準(zhǔn)并未收載對(duì)膽巴殘留的相關(guān)檢測，致使膽巴殘留的情況被長期忽視。

圖1 邊緣被白霜黑順片

圖2 未見白霜黑順片

圖3 普遍被白霜黑順片

因此，本研究收集市售黑順片，通過外觀性狀的評(píng)價(jià)(顏色、質(zhì)地、外觀、切面以及人工口嘗評(píng)價(jià)其滋味)，并以Na2EDTA絡(luò)合滴定法對(duì)黑順片中膽巴殘留量進(jìn)行檢測，結(jié)合水分的測定以及6種生物堿成分的檢測，對(duì)市售黑順片質(zhì)量做出客觀的綜合評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 儀器

Waters 2659高效液相色譜儀，包括四元泵溶劑系統(tǒng)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測器、Empower色譜工作站(美國Waters 公司)；DSX-280A型不銹鋼手提式壓力蒸氣滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)；SB25-12型超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；BSA224S型電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司]；SHB-3型循環(huán)多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

1.2 試藥

苯甲酰新烏頭原堿對(duì)照品(批號(hào)：111795-201604，純度：93.1%)、苯甲酰烏頭原堿對(duì)照品(批號(hào)：111794-201303，純度：99.5%)、苯甲酰次烏頭原堿對(duì)照品(批號(hào)：111796-201705，純度：97.2%)、新烏頭堿對(duì)照品(批號(hào)：110799-201608，純度：31.7%)、次烏頭堿對(duì)照品(批號(hào)：110798-201609，純度：30%)、烏頭堿對(duì)照品(批號(hào)：110720-201111，純度：31.8%)均購自中國食品藥品檢定研究院；四氫呋喃(批號(hào)：172425，美國Fisher公司)；乙腈(批號(hào)：175165，美國Fisher公司)為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其余試劑均為分析純(北京邁瑞達(dá)科技有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 黑順片樣品收集和處理

本實(shí)驗(yàn)共收集53份有效樣品，涉及到北京5家三甲醫(yī)院、3家二甲醫(yī)院、23家社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心、安國市場及四川江油基地，通過對(duì)相同生產(chǎn)廠家及生產(chǎn)批號(hào)進(jìn)行歸納，最終整合為32個(gè)批次，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院王建升主任藥師鑒定，均為毛茛科植物烏頭A.carmichaeliiDebx.子根的加工品。編號(hào)為S1～S32，其中S12樣品為國抽合格品，生產(chǎn)廠家涉及具備毒性飲片生產(chǎn)和經(jīng)營資質(zhì)的7家藥企、安國藥市以及四川基地等12家單位。全部樣品分別粉碎，過三號(hào)篩備用。

2.2 性狀評(píng)價(jià)

2.2.1外觀評(píng)價(jià) 黑順片為《中國藥典》2015年版收載品種，飲片外觀性狀質(zhì)量要求為縱切片，上寬下窄，長1.7～5 cm，寬0.9～3 cm，厚0.2～0.5 cm。外皮黑褐色，切面暗黃色，油潤具光澤，半透明狀，并有縱向?qū)Ч苁Ｙ|(zhì)硬而脆，斷面角質(zhì)樣。氣微，味淡。按《中國藥典》規(guī)定，對(duì)各批次黑順片的外觀性狀進(jìn)行檢查，結(jié)果32批次黑順片中，外觀、顏色、大小、質(zhì)地等方面基本符合標(biāo)準(zhǔn)要求；口嘗味淡者少，多為咸、澀或有不同程度的麻舌感；17批次樣品表面可以見到明顯的白色結(jié)晶樣白霜，口嘗味咸澀，疑似析出的膽巴結(jié)晶。各樣品的外觀性狀觀察及口嘗味道結(jié)果見表1。

表1 各批次黑順片外觀性狀評(píng)價(jià)結(jié)果

續(xù)表1

2.2.2人工口嘗測評(píng) 為便于進(jìn)行口嘗味道與成分相關(guān)性研究，依據(jù)《ISO4121-2003國際感官分析定量反應(yīng)尺度使用指南》進(jìn)行黑順片有別于《中國藥典》規(guī)定“淡味”的咸味和麻舌感的量化評(píng)分。選擇8名具有正常識(shí)別能力的志愿者組成測評(píng)小組，對(duì)32批黑順片樣品進(jìn)行口嘗味覺評(píng)價(jià)[4]，小組成員口嘗黑順片粉末，以識(shí)別和記錄所有的味覺屬性。討論并確定屬性，根據(jù)提供的標(biāo)準(zhǔn)建立最終口嘗指標(biāo)。測評(píng)采用定量的描述性分析方法對(duì)32批黑順片進(jìn)行評(píng)估，從0(未檢測到)到9(非常強(qiáng)烈)打分。小組成員對(duì)每個(gè)樣本的每個(gè)屬性的感知強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分，并做出綜合的口嘗描述。每個(gè)樣品的口嘗評(píng)估按1式3份進(jìn)行，計(jì)算均值，結(jié)果見表1。

2.3 水分檢測

依據(jù)《中國藥典》2015年版四部通則0832項(xiàng)下第二法進(jìn)行檢測，結(jié)果見表2。32批樣品含水量為10.50%～14.93%，全部符合《中國藥典》要求。

表2 各批次黑順片中水分、6種生物堿類成分和膽巴含量測定結(jié)果(n=3) %

2.4 生物堿類成分檢測

分別稱取各批次黑順片樣品定量粉末，按照《中國藥典》2015年版(一部)[1]收載的對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備、色譜條件及實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測，計(jì)算新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的含量，雙酯型生物堿以新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿的總量計(jì)；單酯型生物堿以苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿總量計(jì)，結(jié)果見表2。

2.5 膽巴殘留量檢測

分別稱取各批次黑順片樣品，按照文獻(xiàn)Na2EDTA絡(luò)合滴定法[5]，制備供試品溶液并進(jìn)行檢測，結(jié)果見表2。

在味覺的檢測中，人工口嘗評(píng)價(jià)對(duì)32批黑順片樣品的味覺進(jìn)行定性表征，國抽合格S12與S29～S32樣品口嘗描述為“味淡”，與《中國藥典》中味覺描述一致，其“咸味”的相應(yīng)平均值為3.39，遠(yuǎn)低于其他27組樣品(6.17)；“咸”味較重的S8、S9、S5、S4、S3、S7共6組樣品“咸”味均值達(dá)到8.14，普遍高于味“淡”組樣品，也高于其他26組樣品的平均值(5.18)，而這6組樣品膽巴平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.02%，高于S12與S29～S32組“味淡”樣品的平均值(1.97%)，也高于其他26組樣品4.61%的平均值(4.61%)。

32批黑順片均含有膽巴，其膽巴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.85%～8.95%，可以明顯觀察到“咸”味重的樣品膽巴含量普遍偏高，采用SAS 8.2統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)口嘗“咸”味數(shù)值與膽巴殘留量之間的相關(guān)性做T檢驗(yàn)分析，r=0.601，P=0.033，呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，表明黑順片咸味輕重與膽巴殘留量存在密切關(guān)系。

生物堿檢測中，32批樣品的單酯型生物堿總含量全部符合《中國藥典》中“不得少于0.010%”的規(guī)定；雙酯型生物堿S3、S4、S16、S17、S19、S28 6批樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.021%～ 0.030%，高于《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，其余26批合格，合格品占總樣本量的81.25%。而含量偏高的6批樣品均有麻舌感持久的口嘗特征，采用SAS 8.2統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)“麻舌感”口嘗數(shù)值與雙酯型生物堿含量之間的相關(guān)性，做T檢驗(yàn)分析，r=0.610，P=0.000，呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)。

“麻舌感持久”的黑順片樣品多同時(shí)具有“味咸”的口感，其雙酯型生物堿和膽巴的含量均偏高，其相應(yīng)的外觀改變也比較明顯，提示黑順片的味覺和生物堿類成分的含量及膽巴殘留存在一定關(guān)聯(lián)，黑順片炮制過程中，把泥附子按大小分別洗凈，浸入膽巴的水溶液中數(shù)日，連同浸液煮至透心，撈出，水漂去部分膽巴，縱切成厚約0.5 cm的片，再用水浸漂進(jìn)行脫膽，反復(fù)至口嘗味淡，蒸至出現(xiàn)油面、光澤后，烘至半干，再曬干或繼續(xù)烘干，習(xí)稱“黑順片”。部分黑順片樣品口感咸澀微苦，推測是由于黑順片炮制過程中“脫膽”環(huán)節(jié)沒有做好，膽巴殘留量過多所致。

3 討論

附子鹽制的炮制方法源于宋代，《圣濟(jì)總錄》記載：“鹽湯浸暴干炒”[6]。明代《景岳全書》卷之四十八·毒草部記載：“夫附子之性熱而剛急，走而不守，土人腌以重鹽，故其味咸而性則降”[7]。至民國初年，以食用膽巴替代食鹽腌制附子的技術(shù)逐步完善，并沿用至今。

本研究所收集黑順片樣品的生產(chǎn)企業(yè)，涉及到具備毒性飲片生產(chǎn)和經(jīng)營資質(zhì)的7家藥企、安國藥市、四川基地等12家單位，涵蓋了各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)及藥材市場和道地產(chǎn)地，基本概括了北京市場黑順片供應(yīng)的全部渠道，代表了北京市市售黑順片飲片的的實(shí)際質(zhì)量水平。檢測中大部分的“味”與《中國藥典》2015年版中規(guī)定的“味淡”不符，27份“味咸”樣品的膽巴殘留遠(yuǎn)高于國抽合格品和“味淡”樣品，占樣品量84.38%，提示黑順片飲片的“味道”與《中國藥典》要求不符與膽巴殘留量有關(guān)。S12、S29～S32樣品口感描述為“味淡”，其膽巴殘留量為1.85%～2.10%，推測膽巴殘留不超過2.10%，與《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)中黑順片性狀描述相一致，是黑順片膽巴殘留量的安全范圍。

膽巴是制鹽的副產(chǎn)品，也稱鹽鹵，作為制備黑順片的輔料，具有防腐、固形的作用，其含有大量鈣、鎂等金屬離子，具有較高的毒性[8]。《辨證錄》曾云：“服鹽鹵之毒，必至口咸作渴，腹中疼痛，身蜷腳縮而死。夫鹽能補(bǔ)腎，何便殺人？不知鹽鹵味苦，苦先入心，心遇鹽鹵，心氣抑郁不通，鹽鹵見心不受，乃犯于腎，腎見其味苦，腎又不受，遂往來于心腎之間，心腎之氣不交，而鹽鹵流入于腸，而不可救矣[9]?！标U明膽巴中毒主要以消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)的損害為主，這與現(xiàn)代研究相一致。通過對(duì)黑順片和膽巴的不良反應(yīng)實(shí)例進(jìn)行分析歸納發(fā)現(xiàn)，報(bào)道的黑順片不良反應(yīng)與膽巴中毒在消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)等方面的臨床表現(xiàn)高度吻合[10-12]，推測黑順片膽巴殘留過多，可能增加臨床不良反應(yīng)發(fā)生的概率。

綜上所述，根據(jù)黑順片實(shí)際質(zhì)量現(xiàn)狀，在現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，建議增加膽巴殘留量化標(biāo)準(zhǔn)，是黑順片安全使用的有效保障，對(duì)附子類飲片的合理使用具有重要的臨床意義。