一起羊布魯氏桿菌病的診斷與防治

張海蘭

（伊犁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 835000）

布魯氏桿菌病是由布魯氏菌屬細(xì)菌引起的一種以發(fā)熱、流產(chǎn)為典型臨床特征的人畜共患傳染病。 伊犁河谷是布魯氏桿菌病的老疫區(qū)，近些年來，布魯氏桿菌病的發(fā)病趨勢有所上升，嚴(yán)重影響本地區(qū)畜牧業(yè)的健康發(fā)展[1]。 該菌宿主廣泛，能感染牛、羊、豬、鹿、犬等多種動物[2]。 患布魯氏桿菌病家畜及其產(chǎn)品及污染物是人類布氏桿菌病的主要傳染源，其引發(fā)的傳染性疾病不僅造成畜牧業(yè)巨大的經(jīng)濟損失，也嚴(yán)重威脅廣大畜牧工作者和人民群眾的身體健康。

1 案例

伊犁地區(qū)某規(guī)?；驁鍪俏以盒Ｆ蠛献髌髽I(yè)，現(xiàn)有存欄多胎母羊1200 多只，成年公羊80 只，年出欄育肥羊800 只以上，是本地區(qū)規(guī)模較大的羊場之一。 2019 年1～2 月期間，該場陸續(xù)有15 只母羊出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎、畸形胎，并伴有發(fā)熱、關(guān)節(jié)炎等癥狀。 駐場獸醫(yī)初步診斷是羊布魯氏桿菌病，報我院技術(shù)服務(wù)中心進(jìn)行進(jìn)一步診斷。

2 臨床癥狀

據(jù)駐場獸醫(yī)主訴，患病母羊多為妊娠3～4 個月，初期癥狀不明顯，表現(xiàn)精神不振，食欲減退，反芻減少。 2～3d 后病情加重，體溫高于正常1～2℃，陰唇出現(xiàn)潮紅和紅腫，從陰門出開始流出黃色黏稠液體，有的有血樣黏性分泌物。 正常分娩母羊出現(xiàn)胎衣不下、子宮炎癥狀。 母羊流產(chǎn)的胎兒多是死胎、弱胎、畸形胎。 流產(chǎn)母羊陰道不斷排除黏稠狀或化膿性分泌物，有惡臭味。 流產(chǎn)羔羊胎衣呈現(xiàn)黃色膠樣狀浸潤，部分胎衣上還覆蓋有纖維蛋白膿液，胎衣顯著增厚，并存在散狀出血點。 流產(chǎn)羔羊皮膚存在大量出血點和出血斑，皮下和肌肉組織存在漿液性浸潤，體表淋巴結(jié)腫大。

3 實驗室診斷

實驗室診斷防治指導(dǎo)手冊[2]。

3.1 細(xì)菌學(xué)診斷

用滅菌過的培養(yǎng)皿采集發(fā)生流產(chǎn)母羊的新鮮胎衣、流產(chǎn)羔羊的病變淋巴結(jié)組織等，粉碎，研磨，制成組織抹片，用改良石炭酸復(fù)紅液，按照1:10 比例稀釋，染色10min，然后用5%醋酸溶液脫色20s，再用1%美蘭染色劑對圖片進(jìn)行染色，5min后用清水洗凈，自然干燥，鏡鑒，可見大量被染成紅色的短小桿菌或球狀桿菌。

3.2 血清學(xué)診斷

3.2.1 血清樣品采集

無菌采集流產(chǎn)母羊頸部靜脈血液2～4ml，室溫靜置2h。 一般情況下血清會自然析出，若析出效果不好或沒有析出，出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，可將血液置入離心管中，6000r/min，離心15min。

3.2.2 琥紅平板凝集試驗

在準(zhǔn)備好的滅菌玻璃板上用記號筆畫上數(shù)排方格，沒格大小約為2cm×2cm； 每個格內(nèi)加入商品化的琥紅平板凝集抗原30ul 和待檢血清30ul，兩者加入前先進(jìn)行充分搖勻； 用滅菌牙簽充分將兩者混勻； 3～5min 后觀察結(jié)果，出現(xiàn)凝集顆粒的判為陽性，反則為陰性。

3.2.3 試管凝集試驗

在琥紅平板凝集試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上對陽性血清進(jìn)行試管凝集試驗復(fù)檢。

（1） 血清稀釋： 每份血清準(zhǔn)備滅菌小試管4 支，第一管中加入生理鹽水960ul，其余各管加入生理鹽水500ul。 然后在第一支試管中加入備檢血清40ul，充分混勻后吸出500ul 血清稀釋液加入第二試管內(nèi)，以此類推到最后一管，吸出500ul 血清稀釋液棄去。

（2） 抗原加入： 將試管凝集抗原充分混勻后，使用0.9%生理鹽水做10 倍稀釋，然后每管加入500ul 稀釋抗原。 充分混勻后放入 37℃溫箱內(nèi)，24h 后取出，在常溫下放置 1～2h 后，觀察結(jié)果。

（3） 結(jié)果判定： 與配置好的標(biāo)準(zhǔn)比濁管進(jìn)行比對，血清抗體凝集效價在1:100 以上的判定為陽性結(jié)果，反則為陰性。

4 結(jié)果

通過臨床診斷和實驗室診斷結(jié)果表明，該場發(fā)病的15 只流產(chǎn)母羊中有11 只結(jié)果為陽性，確診是由布魯氏桿菌引起的母羊流產(chǎn)，其余4 只母羊的流產(chǎn)原因有待進(jìn)一步查明。

5 預(yù)防措施

5.1 全群檢疫

對該場所有羊只采血，采用琥紅平板凝集試驗進(jìn)行初檢，陽性者再采用試管凝集試驗復(fù)檢方法對全場羊只布魯氏桿菌病進(jìn)行篩查，凡是確診為陽性的，按照 《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》 規(guī)定及時進(jìn)行撲殺。 同時，按照 《病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》 （GB16548-2006） 規(guī)定對病畜尸體及其流產(chǎn)胎兒、胎衣和排泄物、乳、乳制品等進(jìn)行無害化處理。

5.2 人員防控

全場工作人員集中到定點醫(yī)療機構(gòu)進(jìn)行布氏桿菌病篩查，確診為陽性的職工立即調(diào)整工作崗位，不得再從事與羊接觸的工作。 同時做好在場職工布氏桿菌病防控宣傳工作，做好個人防護和消毒措施[2]。

5.3 加強消毒

對該場所有圈舍、場地和生產(chǎn)用具等全部用用 10% 的石灰水和2% 氫氧化鈉溶液徹底消毒。 做好圈舍通風(fēng)、滅蚊和滅蟲工作。 加強糞便日常清掃力度及糞便的無害化處理[3]。

5.4 培育健康羔羊群

羔羊出生后現(xiàn)用消毒液擦洗全身后才放入羔羊培育圈，飼喂健康母羊的乳汁，做好日常圈舍、用具的消毒工作。 按照20日齡、120 日齡，6 月齡進(jìn)行布病篩查，發(fā)現(xiàn)陽性羊立即淘汰做無害化處理。

6 小結(jié)

采取以上措施后半年后回訪，該場再沒有布魯氏桿菌病的發(fā)生。