豬圓環(huán)病毒病的分離、鑒定與防治

陳林杰

（山東省蓬萊市畜牧獸醫(yī)站 265600）

1 豬圓環(huán)病毒病的病原分析

豬圓環(huán)病毒屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，根據(jù)血清型不同可以分為PCV1、PCV2。 PCV2 是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的主要病原體。 該病毒在世界范圍內(nèi)廣泛存在。 豬圓環(huán)病毒對環(huán)境的抵抗能力較強，酸性環(huán)境及72℃的高溫環(huán)境中也可存活，豬只對圓環(huán)病毒具有易感性，感染豬只能通過口鼻分泌物或糞便將病毒排出體外污染環(huán)境，不同年齡的豬只均可以通過呼吸道感染患病。

2 豬圓環(huán)病毒病的臨床癥狀

豬圓環(huán)病毒病主要發(fā)生于斷奶仔豬，能導(dǎo)致此豬發(fā)生呼吸困難、淋巴組織病變、貧血、逐漸消瘦等主要病癥。 患病仔豬主要表現(xiàn)為逐漸消瘦、生長發(fā)育緩慢，呼吸困難，精神萎靡等。 發(fā)病率為4%～25%，死淘率較高，可達(dá)到25%～40%左右。具體病癥可分為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合性征，豬皮炎腎病綜合征，豬呼吸道疾病綜合征及母豬繁殖障礙。

2.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征

斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征主要發(fā)生在5～12 周齡的保育豬中。 在臨床診斷過程中可發(fā)現(xiàn)患病仔豬呈漸進(jìn)式消瘦，呼吸急促或呼吸困難，皮膚蒼白，有腹瀉癥狀，全身淋巴結(jié)出現(xiàn)病理性腫大。 對患病仔豬進(jìn)行解剖可見肺部有明顯的出血點。

2.2 豬皮炎腎病綜合征

2～4 月齡的豬只感染圓環(huán)病毒主要表現(xiàn)為皮炎腎病綜合征。在臨床診斷中可見豬只體表有多處部位發(fā)生輕微暗紅色病灶，發(fā)病后快速出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，患病豬直腸溫度可高達(dá)41℃以上，水腫癥狀明顯，食欲降低，體重下降，嚴(yán)重的精神萎靡。 通常在觀察到以上臨床癥狀后3d 內(nèi)即會發(fā)生死亡。 豬皮炎腎病綜合征的死亡率大概為20%左右。 患病豬只的病理變化主要表現(xiàn)為壞死性皮炎及出血癥狀，同時會伴隨胸腔積液和心包積液。此外，在仔豬發(fā)生皮炎腎病綜合征時通常伴隨著斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征。

2.3 豬呼吸道疾病綜合征

豬呼吸道疾病綜合征主要發(fā)生在16～22 周齡的豬只中。 在臨床診斷上可見患病豬只生長發(fā)育十分緩慢，采食量降低，同時伴隨著咳嗽癥狀，患病豬只也會表現(xiàn)出呼吸困難。 解剖病死豬可見其支氣管發(fā)生間質(zhì)性肺炎，肺部有肉芽腫出現(xiàn)[1]。

2.4 母豬繁殖障礙

母豬感染圓環(huán)病毒會出現(xiàn)嚴(yán)重的繁殖障礙。 主要表現(xiàn)為妊娠期間發(fā)生流產(chǎn)或生產(chǎn)死胎。 部分患病母豬會發(fā)生早產(chǎn)，所生產(chǎn)的仔豬在斷奶前死亡率很高。 部分感染圓環(huán)病毒的母豬可能會出現(xiàn)不孕現(xiàn)象，增加死淘率。 并且圓環(huán)病毒病可以通過胎盤進(jìn)行垂直傳播，母豬患病會影響仔豬成活率及健康。

3 豬圓環(huán)病毒病的分離鑒定

3.1 豬圓環(huán)病毒的分離培養(yǎng)

對豬圓環(huán)病毒病的分離鑒定是對該病的一種診斷方式，采集病死豬只的病變組織作為病料進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定。 病料組織使用無菌生理鹽水進(jìn)行沖洗后制作組織懸液，反復(fù)凍融3 次，5000r/min 離心 25min 后取上清液，過濾后低溫保存。 取組織病料進(jìn)行PCR 檢測。 將PCR 檢測結(jié)果為陽性的病料組織接種于PK-15 細(xì)胞懸液培養(yǎng)瓶中，置于37℃環(huán)境中培養(yǎng)24h 后進(jìn)行鑒定[2]。

3.2 豬圓環(huán)病毒的鑒定

目前所使用的病毒鑒定方法包括病毒的形態(tài)學(xué)觀察、間接免疫熒光試驗、熒光定量PCR 測定及動物人工感染試驗。

3.2.1 病毒的形態(tài)學(xué)觀察

無菌采集病料組織進(jìn)行凍融，經(jīng)過超聲波粉碎后離心，取上清液并染色后置于電鏡下對病毒的形態(tài)進(jìn)行觀察。

3.2.2 間接免疫熒光試驗

采集病毒液接種于96 孔板上，PK-15 細(xì)胞也與病毒液一同接種，放置于恒溫箱中培養(yǎng)24h，使用間接免疫熒光法進(jìn)行染色，經(jīng)過孵育及洗滌后，用PBS 封底后用熒光顯微鏡觀察。

3.2.3 熒光定量PCR 測定

將病毒分離后進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)方式包括3 種，分別為： D-氨基葡萄糖培養(yǎng)基上同時接種病毒與細(xì)胞，置于37℃環(huán)境下培養(yǎng)48h； 在培養(yǎng)基中同時接種細(xì)胞和病毒，置于37℃下培養(yǎng)72h； 將病毒接種于單層細(xì)胞中，置于 D 氨基葡萄糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h。 利用熒光定量技術(shù)根據(jù)熒光定量PCR 測定方法對3種方式培養(yǎng)的病毒進(jìn)行鑒定，可確診圓環(huán)病毒[3]。

3.2.4 人工感染試驗

通過肌肉注射的方式將病毒接種于30 日齡未進(jìn)行過免疫接種的豬只體內(nèi)，并與未注射過病毒的豬只進(jìn)行對比試驗，分別隔離飼養(yǎng)，定期采集血液進(jìn)行檢測，觀察豬只的健康狀況、采食情況、體重變化、體溫及臨床表現(xiàn)，并進(jìn)行PCR 檢測、間接免疫熒光鑒定及血清抗體分析。

4 豬圓環(huán)病毒病的防治措施

4.1 免疫接種

免疫接種是目前預(yù)防疾病最有效的方式。 當(dāng)前市場中所出售的豬圓環(huán)病毒病疫苗均可用于豬只防疫。 購買的產(chǎn)品疫苗都能在一定程度上對豬只起到保護(hù)作用。 其中基于抗原免疫原性全病毒滅活疫苗的預(yù)防效果最佳，具有一定的發(fā)展前景。 使用豬圓環(huán)病毒病疫苗對豬只進(jìn)行免疫接種，最佳的注射時間是母豬產(chǎn)前的 2～4 周。

4.2 制定相應(yīng)的免疫程序

優(yōu)質(zhì)的疫苗要配合科學(xué)合理的免疫程序才能發(fā)揮其最佳的免疫效果。 目前經(jīng)過長期實踐經(jīng)驗可知，在母豬生產(chǎn)前進(jìn)行免疫接種，仔豬在2～4 周齡期間進(jìn)行免疫接種的效果最佳。 母豬生產(chǎn)前進(jìn)行免疫接種能為仔豬提供母源抗體，用于預(yù)防豬圓環(huán)病毒的感染，能有效預(yù)防母豬未感染，而仔豬被病毒感染的情況。 到仔豬8～9 周齡期間，仔豬體內(nèi)的母源抗體會消失。 所以，需要對仔豬進(jìn)行免疫接種，使免疫效果維持。 最佳的接種時間為仔豬2～4 周齡，此時母源抗體不會對疫苗產(chǎn)生干擾作用，同時能保證仔豬在斷奶后獲得免疫保護(hù)。 對仔豬進(jìn)行免疫要保證在仔豬斷奶前必須完成，防止斷奶后感染豬圓環(huán)病毒病。

4.3 加強母豬分娩期管理

做好母豬分娩期的管理能預(yù)防新生仔豬感染圓環(huán)病毒病。做好分娩舍的消毒工作，控制好分娩環(huán)境，保證恒溫恒濕、空氣清新。 仔豬出生后要做好清潔消毒工作。 做好仔豬護(hù)理工作，新生仔豬抵抗力較弱，容易被病原體侵襲而感染患病。 新生仔豬要注意保溫。 轉(zhuǎn)舍時要做到全進(jìn)全出，保證仔豬舍內(nèi)衛(wèi)生情況良好。 母豬生產(chǎn)前應(yīng)進(jìn)行必要的驅(qū)蟲及清潔。 防止母豬交叉哺乳。

4.4 加強保育期及育肥期的管理

目前治療豬圓環(huán)病毒病仍無特效藥，并且該病是一種免疫抑制類疾病，對豬只健康及免疫效果有較大影響。 所以要加強對豬只的飼養(yǎng)管理，做好環(huán)境控制工作，對育肥豬和保育豬要做到分階段獨立飼養(yǎng)，禁止不同年齡的豬只混群，保證適宜的養(yǎng)殖密度，采取全進(jìn)全出制度，定期對豬舍進(jìn)行消毒，空舍期徹底消毒，嚴(yán)格執(zhí)行豬場內(nèi)的各項規(guī)章制度。 對于患病豬及時淘汰，并對尸體進(jìn)行無害化處理，防止疫情擴散。

5 小結(jié)

豬圓環(huán)病毒病危害嚴(yán)重，對其治療目前尚無有效措施。 在實際養(yǎng)殖生產(chǎn)中需要利用營養(yǎng)調(diào)控、環(huán)境控制、免疫接種等方式對該病進(jìn)行預(yù)防。 養(yǎng)殖場需要重視對豬圓環(huán)病毒病的防控。在保證養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)利益的同時要防止致病菌耐藥性的出現(xiàn)，以促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。