母牛早期妊娠診斷技術(shù)

岳立 李秀菊 吳風(fēng)光

（山東省菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院 274032）

妊娠診斷的方法很多，20 世紀(jì)70 年代開(kāi)始，就有學(xué)者研究出RIA 法，這種方法可以檢測(cè)母牛血液或乳汁中的P4 含量，而P4 含量可以直接反應(yīng)母牛是否懷孕。隨著技術(shù)的不斷革新，后來(lái)又先后出現(xiàn)了EIA 法、多普勒法、EPF 法等方法可以用于早期妊娠診斷，但都由于價(jià)格昂貴、檢測(cè)手段受限等原因沒(méi)有推廣，臨床上也很難應(yīng)用。但母牛早期妊娠診斷技術(shù)并沒(méi)有從此停滯不前，而是繼續(xù)向快速、便捷、造價(jià)低的方向發(fā)展[1]。

1 臨床診斷法

1.1 外部觀察法

適齡母牛配種成功后在下一個(gè)發(fā)情期不再發(fā)情，食欲和飲欲均有明顯提高，被毛光亮，性格變得溫順，不再出現(xiàn)追逐、打架的情況。妊娠5 個(gè)月可以看到懷孕母牛的腹圍增大，8 個(gè)月可以觀察到胎動(dòng)。外部觀察法僅在懷孕中后期較為實(shí)用，基本不能作為早期妊娠診斷的方法。

1.2 直腸檢查法

直腸檢查法在大型牲畜臨床診斷中起重要作用，這種方法需要操作人員將手及手臂伸入母牛直腸內(nèi)，通過(guò)觸診來(lái)確定卵巢、子宮及胎兒的情況。懷孕初期一側(cè)卵巢會(huì)明顯增大，且能在卵巢上觸診到黃體，子宮角基本無(wú)變化，但可以感覺(jué)到子宮壁變厚。隨著妊娠時(shí)間的延長(zhǎng)，觸診可見(jiàn)兩側(cè)子宮角有一側(cè)變粗、變軟。懷孕3 個(gè)月后子宮角間溝被填平，子宮內(nèi)有液體波動(dòng)感，有時(shí)能觸到胎兒。直腸檢查法是較為經(jīng)濟(jì)的妊娠診斷方法，但對(duì)操作人員要求較高，沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)的獸醫(yī)較難掌握。

1.3 陰道檢查法

妊娠一個(gè)月后的母?？梢詰?yīng)用陰道檢查法進(jìn)行檢查，可以觀察到陰道和子宮頸的顏色變得蒼白，子宮頸口向一側(cè)偏移，陰道黏膜干燥。這種方法雖然有一定的參考價(jià)值，但確診準(zhǔn)確率較低。

1.4 超聲波檢查法

常用于妊娠診斷的超聲波檢查包括：A 超、B 超和D 超3種，A 超是將探頭插入陰道穹隆，而后進(jìn)行檢查的一種方法，這種方法在配種后18d 就可以檢測(cè)出是否妊娠。B 超則是將探頭抵在皮膚上就可以進(jìn)行檢查，最早可以對(duì)配種后30d 的母牛進(jìn)行檢測(cè)。D 超是通過(guò)將血流信號(hào)變?yōu)槁曇粜盘?hào)的一種檢查方式，一般在母牛配種后20d 就可以進(jìn)行妊娠早期診斷[2]。A 超和D 超都需要操作人員將手伸入母牛體內(nèi)，雖然D 超的準(zhǔn)確性很好，但儀器設(shè)備相對(duì)昂貴，推廣起來(lái)有一定困難。常規(guī)B 超對(duì)妊娠30d 以?xún)?nèi)的母?；緵](méi)有辦法進(jìn)行妊娠診斷，目前有實(shí)施B 超的方法最早可以檢測(cè)妊娠26d 的母牛，確診準(zhǔn)確率可達(dá)88.9%[3]。

2 免疫學(xué)診斷法

懷孕母牛體內(nèi)的早期妊娠因子、孕馬血清促性腺激素、黃體酮、硫酸雌酮等物質(zhì)的含量會(huì)與未妊娠的母牛有顯著差異，且這些因子十分敏感，是母牛早期妊娠診斷的主要指標(biāo)。早期妊娠因子在母牛開(kāi)始妊娠后24h 就可以在血清或乳汁中被檢測(cè)出來(lái)，常用的檢測(cè)方法有3 種，分別是硫酸銅法、玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)及ELISA 法，硫酸銅能凝集早期妊娠因子，所以將待檢測(cè)牛的乳汁滴入3%的硫酸銅溶液中，如果待檢測(cè)牛的乳汁顏色呈現(xiàn)云霧狀該牛只已懷孕，這種方法的確診準(zhǔn)確率為98%。玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)是將母牛T 淋巴細(xì)胞與其他動(dòng)物的紅細(xì)胞混合后會(huì)呈現(xiàn)玫瑰花環(huán)形，如果玫瑰花環(huán)抑制滴度增加則證明待檢測(cè)牛為妊娠牛。ELISA 法目前沒(méi)有商品化的試劑盒可供使用，所以應(yīng)用不多。

黃體酮檢測(cè)可以依靠RIA 法、ELISA 法、膠體金雙抗夾心法、PLAIT 法等進(jìn)行檢測(cè)，其中PLAIT 法因其造價(jià)低、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)在臨床上經(jīng)常應(yīng)用。

3 小結(jié)

目前雖然已經(jīng)建立了較多的母牛早期妊娠診斷方法，但在規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)上的應(yīng)用尚存在一定困難，直腸檢查法作為最簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的方法，在臨床上應(yīng)用最為廣泛，但對(duì)于妊娠早期診斷仍不能很好地完成，且對(duì)妊娠母牛進(jìn)行直腸檢查容易因操作不當(dāng)造成流產(chǎn)，帶來(lái)較大損失。雖然免疫學(xué)診斷法的早期妊娠診斷的準(zhǔn)確性很高，但對(duì)儀器設(shè)備的要求較高，且成本不低。所以，在母牛早期妊娠診斷這一領(lǐng)域仍需要廣大畜牧獸醫(yī)工作者共同努力。