血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相關(guān)性分析

張一琳　楊震

[摘要] 目的 探討血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相關(guān)性分析。 方法 方便選取2018年11月—2019年6月該院婦科門診及男科門診收治的首次確診梅毒且未經(jīng)治療干預(yù)的梅毒患者110例，根據(jù)梅毒滴度水平分為高滴度組和低滴度組，各55例。同期收集來該院進(jìn)行體檢的健康職工志愿者60名。檢測各組患者血清IL-2、IL-10及IL-32水平，比較和分析其水平與梅毒RPR滴度的相關(guān)性。 結(jié)果 高滴度組和低滴度組梅毒患者血清IL-2、IL-10、IL-32水平均明顯高于正常對照組 （t高滴度組=13.561、15.267、18.220，P<0.05;t低滴度組=7.123、8.596、9.651，P<0.05）;高滴度組患者血清IL-2、IL-10、IL-32水平亦明顯高于低滴度組（t=10.261、11.787、12.872，P<0.05）;IL-2、IL-10、IL-32在梅毒患者和正常人群中的表達(dá)水平進(jìn)行ROC曲線分析，IL-2：AUC=0.967，診斷靈敏度為92.3%，特異度為88.6%;IL-10：AUC=0.925，靈敏度為83.6%，特異度為87.2%;IL-32：AUC=0.767，靈敏度為70.5%，特異度為74.1%。 結(jié)論 梅毒患者具有較高的血清IL-2、IL-10及IL-32 水平，尤以高滴度患者的血清水平更高，提示血清水平與滴度存在正相關(guān)性，可用于梅毒的診斷。

[關(guān)鍵詞] IL-2;IL-10;IL-32;梅毒RPR滴度;相關(guān)性分析

[中圖分類號] R4 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-0742（2020）10（a）-0020-04

Correlation Analysis of Serum IL-2， IL-10 and IL-32 Levels and Syphilis RPR Titer

ZHANG Yi-lin1， YANG Zhen2

1.Department of Laboratory Medicine， Shenyang Maternity and Infant Hospital， Shenyang， Liaoning Province， 110011 China; 2.Hand and Foot Microsurgery， Shenyang Red Cross Hospital， Shenyang， Liaoning Province， 110011 China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between serum IL-2， IL-10 and IL-32 levels and syphilis RPR titer. Methods Convenient selected 110 patients with syphilis who were diagnosed with syphilis for the first time and without treatment intervention， admitted to the gynecological clinic and male clinic of the hospital from November 2018 to June 2019. According to the syphilis titer level， they were divided into high titer group and low titer group， 55 cases in each group. During the same period， 60 healthy volunteers who came to the hospital for physical examination were collected. The serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32 in each group were detected， and the correlation between their levels and the syphilis RPR titer was compared and analyzed. Results The levels of serum IL-2， IL-10， and IL-32 of syphilis patients in the high titer group and low titer group were significantly higher than those in the normal control group（tthigh titer group=13.561， 15.267， 18.220， P<0.05; ttlow titer group=7.123， 8.596， 9.651， P<0.05）; The serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32 in the high titer group were also significantly higher than those in the low titer group（t=10.261， 11.787， 12.872， P<0.05）; ROC curve analysis was performed on the expression levels of IL-2， IL-10， and IL-32 in syphilis patients and normal people. IL-2： AUC=0.967， the diagnostic sensitivity was 92.3%， and the specificity was 88.6%; IL-10： AUC=0.925， the sensitivity was 83.6%， the specificity was 87.2%; IL-32： AUC=0.767， the sensitivity was 70.5%， and the specificity was 74.1%. Conclusion Patients with syphilis have higher serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32， especially those with high titers， which indicate a positive correlation between serum levels and titers， which can be used for the diagnosis of syphilis.

[Key words] IL-2; IL-10; IL-32; Syphilis RPR titer; Correlation analysis

梅毒是目前臨床較為常見的慢性傳染性疾病和性病，由于梅毒螺旋體感染所致，其主要傳播途徑包括性行為、血液制品及母嬰垂直傳播所致的先天性梅毒。梅毒的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，病程漫長，分為1期、2期和3期梅毒[1]。1期和2期梅毒屬于早期梅毒，可致硬下疳、皮膚斑疹和黏膜損傷，而3期梅毒屬于晚期梅毒，可侵及心血管系統(tǒng)等全身各大重要臟器，導(dǎo)致梅毒性主動脈炎、主動脈瓣關(guān)閉不全、梅毒性心肌炎和神經(jīng)梅毒等危重疾病[2]。而且感染梅毒的孕婦具有較高的流產(chǎn)、死胎及新生兒梅毒發(fā)生率，故嚴(yán)重影響和威脅患者及其下一代的健康安全。根據(jù)臨床流行病學(xué)途徑，梅毒患者的每年全球新發(fā)病例數(shù)高達(dá)1 100萬，因此，由于梅毒患者巨大的新發(fā)病例數(shù)，針對可疑患者的臨床檢查診斷和普通人群的篩查具有極為重要的意義[3-4]。該研究方便選取2018年11月—2019年6月該院婦科門診及男科門診收治的首次確診梅毒且未經(jīng)治療干預(yù)的梅毒患者110例，基于梅毒發(fā)生的免疫學(xué)反應(yīng)，觀察和分析血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相關(guān)性，以期為臨床治療提供指導(dǎo)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

方便選取該院婦科門診及男科門診收治的首次確診梅毒且未經(jīng)治療干預(yù)的梅毒患者110例，根據(jù)梅毒滴度水平分為高滴度組和低滴度組，各55例。高滴度組：男30例，女25例;年齡20～60歲，平均年齡（37.6±10.2）歲;病程1～12月，平均病程（3.3±2.5）個(gè)月。低滴度組：男31例，女24例;年齡20～60歲，平均年齡（37.1±10.5）歲;病程1～12月，平均病程（3.5±2.7）個(gè)月。同期收集該院進(jìn)行體檢的健康職工志愿者60名，男34名，女26名;年齡20～60歲，平均年齡（37.2±10.3）歲。3組研究對象的年齡、性別比較，高滴度、低滴度組研究對象的病程時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。該研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 ?納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者有感染史，有硬下疳、患處淋巴結(jié)腫大等臨床表現(xiàn);②實(shí)驗(yàn)室檢查：皮損組織液或淋巴結(jié)穿刺液可見梅毒螺旋體，或快速血漿反應(yīng)素診斷試驗(yàn)（RPR）及梅毒螺旋抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）雙陽性;③梅毒螺旋體滴度診斷標(biāo)準(zhǔn)：高滴度：梅毒抗體滴度（RPR）>1∶4，低滴度：梅毒抗體滴度（RPR）<1∶4;④患者及家屬認(rèn)可研究方案，愿意配合研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①非首次確診梅毒患者，既往已確診并接受相關(guān)治療;②伴有慢性炎癥、全身性感染或腫瘤等可對血清炎性因子水平產(chǎn)生影響的疾病;③伴有肝、腎、心、肺等重要臟器功能障礙或其它器官內(nèi)外科嚴(yán)重疾病。

1.3 ?方法

經(jīng)確診后的梅毒患者及健康志愿者立即進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測，抽取患者和志愿者外周肘靜脈血5 mL，首先于室溫下靜置20 min待血液凝固，隨后置入離心機(jī)中，以3 000 r/min續(xù)離心20 min，取上清液即為該患者血清，分為4等分，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清IL-2、IL-10及IL-32 水平。然后采用梅毒螺旋體試劑盒檢測RPR滴度，首先將血清依次稀釋至：1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，然后進(jìn)行滴度檢測，判斷患者RPR滴度，根據(jù)滴度水平分為高滴度組和低滴度組，比較和分析血清IL-2、IL-10及IL-32水平與梅毒RPR滴度的相關(guān)性。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料的表達(dá)方式為（x±s），采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料的表達(dá)方式為[n（%）]，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針對血清IL-2、IL-10及IL-32水平在梅毒高滴度和低滴度患者中的表達(dá)水平進(jìn)行受試者工作曲線分析（ROC），曲線下面積（AUC）>0.7視為具有診斷預(yù)測意義和價(jià)值。

2 ?結(jié)果

高滴度組和低滴度組梅毒患者血清IL-2、IL-10和IL-32水平均明顯高于正常對照組，分別經(jīng)t檢驗(yàn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高滴度組患者上述血清水平亦明顯高于低滴度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

以IL-2、IL-10和IL-32的表達(dá)水平為檢驗(yàn)變量，是否梅毒患者為檢驗(yàn)變量，進(jìn)行ROC曲線分析。結(jié)果顯示：IL-2：AUC=0.967，診斷最佳靈敏度為92.3%，特異度為88.6%;IL-10：AUC=0.925，靈敏度為83.6%，特異度為87.2%;IL-32：AUC=0.767，靈敏度為70.5%，特異度為74.1%。可以認(rèn)為，IL-2、IL-10和IL-32對梅毒患者有顯著診斷價(jià)值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖1。

3 ?討論

梅毒是近年來我國臨床發(fā)病率最高的慢性傳染性疾病和性病之一，居乙類傳染病的第3位，由于梅毒的社會屬性，不僅嚴(yán)重威脅患者的健康安全，而且給患造成巨大的精神心理負(fù)擔(dān)并且影響生活質(zhì)量，因此早期發(fā)現(xiàn)和治療梅毒顯得尤為重要[5]。在梅毒確診的傳統(tǒng)檢查方法中，TPPA屬于梅毒螺旋體抗原血清檢測，是目前最常用的確診實(shí)驗(yàn)技術(shù)，但檢查過程較為復(fù)雜，檢查時(shí)間長，檢查費(fèi)用較高，不適用于常規(guī)患者和大規(guī)模人群的初篩以及治療效果的評估[6]。TRUST和RPR屬于非梅毒螺旋體抗原血清檢測，目前主要用于普通人群的梅毒篩查和療效觀察，但存在較高的漏診率或誤診率[7]。因此，選擇簡單、易操作的梅毒臨床篩查指標(biāo)對于早期發(fā)現(xiàn)和治療梅毒具有重要的意義和社會價(jià)值。

該研究采用了RPR對初次發(fā)病的確診梅毒患者進(jìn)行滴度定量評價(jià)，分為高滴度和低滴度組，基于梅毒進(jìn)展過程中發(fā)生的免疫反應(yīng)，選擇血清白介素分子（IL-2、IL-10及IL-32）水平進(jìn)行檢測，觀察其在不同梅毒RPR滴度患者和正常人群中的表達(dá)差異，分析其與滴度的相關(guān)性。

該研究發(fā)現(xiàn)IL-2在梅毒患者中存在較高的表達(dá)，尤其高滴度患者的表達(dá)明顯高于低滴度患者，ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)AUC=0.967，符合預(yù)期結(jié)果，證實(shí)IL-2在梅毒中高表達(dá)，與梅毒RPR滴度存在正相關(guān)性。這與其他學(xué)者[8-9]的研究結(jié)果相似，這是因?yàn)樵诿范镜牟±砩矸磻?yīng)中，梅毒螺旋體感染后進(jìn)入機(jī)體可激活多種免疫應(yīng)答反應(yīng)，以Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)為著[8]。Th1型細(xì)胞免疫反義可有效抵抗和清除包括梅毒螺旋體在內(nèi)的多種入侵病原體，同時(shí)可大量合成和分泌IL-2、TNF、IFN-γ等Th1型細(xì)胞因子[9]?；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)IL-2具有顯著激活 CD4+T細(xì)胞活性作用，進(jìn)一步促進(jìn)和加強(qiáng)殺傷性T細(xì)胞、NK細(xì)胞，其它天然殺傷性細(xì)胞對梅毒螺旋體等侵入的病原體的殺傷作用[10]。而且已有臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肌肉注射梅毒螺旋體的疫苗Tp92蛋白可誘發(fā)強(qiáng)烈的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，并出現(xiàn)IL-2水平的持續(xù)升高[11]。

該研究發(fā)現(xiàn)IL-10在梅毒患者中亦存在較高的表達(dá)，高滴度患者的表達(dá)亦高于低滴度患者，ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)AUC=0.925，證實(shí)IL-10在梅毒中存在高表達(dá)，與梅毒RPR高滴度存在正相關(guān)性，同時(shí)可能暗示患者存在較高的慢性化轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)。這可能因?yàn)門h2型細(xì)胞免疫是導(dǎo)致梅毒慢性化和病程遷延不愈的重要因素，并有研究[12]提出了Th1/Th2 漂移假說的觀點(diǎn)，針對大量梅毒患者隨訪觀察均發(fā)現(xiàn)隨著病程的進(jìn)展，存在不同程度的Th1型反應(yīng)減弱和Th2型反應(yīng)增強(qiáng)。IL-10是參與Th2型細(xì)胞免疫的重要細(xì)胞因子，可由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和B 淋巴細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞分泌，具有抑制T淋巴細(xì)胞，而促進(jìn)B淋巴細(xì)胞作用[13]。

IL-32是近年來新發(fā)現(xiàn)的促炎細(xì)胞因子，參與了多種炎癥反應(yīng)和自身免疫反應(yīng)，可由單核細(xì)胞、T細(xì)胞、NK細(xì)胞及部分上皮細(xì)胞等分泌，而且IL-2、IL-12、IL-18、IFN-γ等細(xì)胞因子均可進(jìn)一步促進(jìn)IL-32的合成和分泌[14-15]。該研究發(fā)現(xiàn)血清IL-32水平隨RPR滴度升高而有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)AUC=0.767，靈敏度為70.5%，特異度為74.1%，其原因可能是IL-32可參與調(diào)解單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞的殺傷作用，并通過調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的成熟，同時(shí)加強(qiáng) Thl 和 Th2 免疫反應(yīng)[16]。由于同類相關(guān)研究報(bào)道較少，故IL-32的效能尚需未來進(jìn)一步探討。

綜上所述，梅毒患者相較于正常人群具有較高的血清IL-2、IL-10及IL-32 水平，尤以高滴度患者的血清水平顯著，血清水平與滴度存在正相關(guān)性。因此，在梅毒疑似患者的常規(guī)診斷中，通過檢測IL-2、IL-10及IL-32 的表達(dá)，有助于進(jìn)一步指導(dǎo)梅毒診斷，同時(shí)其表達(dá)水平有助于評估梅毒確診患者的療效。

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（收稿日期：2020-07-06）