酶聯(lián)免疫吸附試驗與核酸檢測在血液乙型肝炎病毒檢測中的應用價值

曹琳

阜新市中心血站檢驗科 (遼寧阜新 123000)

乙型肝炎具有發(fā)病率高、傳播途徑復雜、感染率高、流行范圍廣等特點。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)以血液傳播為主要傳播途徑，長期攜帶易誘發(fā)乙型肝炎[1]。因此，對獻血者實施血液篩查是避免HBV傳播的重要途徑。酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是臨床篩查HBV的常用方法，具有靈敏、快速、價廉等特點，但該方法會受到HBV感染窗口期、病毒變異、病毒滴度低、免疫沉默性感染等因素的影響，導致漏檢風險較高[2-3]。乙型肝炎病毒核糖核酸(hepatitis B virus deoxyribonucleic acid，HBV-DNA)是能直接反映HBV復制、存在、是否具有傳染性的重要指標，有利于臨床更直觀地了解HBV的傳染性和復制情況[4]。核酸檢測(nucleic acid testing，NAT)是一種方便、可靠的分子生物學檢測方式，通過檢測HBV-DNA含量判斷病毒感染情況，近年來逐漸被應用于血液篩查中。本研究旨在分析ELISA與NAT對血液HBV的檢測效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年2月至2020年1月阜新市中心血站進行無償獻血者的血清標本，均符合《獻血者健康檢查要求》[5]中的相關(guān)標準。選取3 000份經(jīng)金標試紙檢測患者，其中男1 876例，女1 124例；年齡20～62歲，平均(37.21±3.48)歲；金標試紙檢測結(jié)果：陽性50份，陰性2 450份。

1.2 方法

每位受檢者采集2份標本，分別使用分離膠促凝真空管、帶分離膠EDTA-K2抗凝真空管儲存，分別用于NAT、ELISA檢測。每個樣本均貼具樣品編碼、采集日期等信息條形碼，3 500 r/min離心10 min，取上清液。(1)NAT：使用美國羅氏公司的實時熒光定量PCR系統(tǒng)檢測HBV-DNA。陽性判斷標準：HBV-DNA含量(lg)>2.7。(2)ELISA：使用全自動酶免分析儀(Freedom Evolyzer，瑞士TECAN公司)檢測HBV血清學標志物，包括乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen，HBeAg)、乙型肝炎e抗體(hepatitis B e antibody，HBeAb)、乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigens，HBsAg)、乙型肝炎核心抗體(hepatitis B core antibody，HBcAb)、乙型肝炎表面抗體(hepatitis B surface antibody，HBsAb)；陽性判斷標準：HBsAg>0.5 ng/ml，HBsAb>0.5 ng/ml，HBeAg>0.5 ng/ml，HBeAb>0.77 U/ml，HBcAb>4.57 U/ml。

1.3 臨床評價

(1)以金標試紙法為參考，分析ELISA、NAT檢測HBV的靈敏度、特異度、準確度。(2)分析不同HBV感染狀態(tài)下HBV-DNA陽性率和含量差異，HBV感染包括小三陽(HBeAb+/HBsAg+/HBcAb+)、大三陽(HBeAg+/HBsAg+/HBcAb+)、急性感染/感染慢性期(HBcAb+/HBsAg+)。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 ELISA、NAT檢測HBV效果比較

NAT檢測HBV的靈敏度、特異度和準確度高于ELISA，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1～2。

表1 ELISA、NAT檢測HBV結(jié)果(份)

表2 ELISA、NAT檢測HBV的相關(guān)診斷評價指標 (%)

2.2 不同HBV感染狀態(tài)下HBV-DNA陽性率和含量差異

大三陽HBV-DNA陽性率和含量高于小三陽、急性感染/感染慢性期，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；小三陽、急性感染/感染慢性期HBV-DNA陽性率和含量比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同HBV感染狀態(tài)下HBV-DNA陽性率和含量差異比較

3 討論

乙型肝炎屬于病毒性傳染病，可經(jīng)血液傳播。持續(xù)感染HBV會導致患者發(fā)生乙型肝炎，隨著病情進展逐漸演變?yōu)楦嗡ソ?、肝硬化、原發(fā)性肝癌等，危害性極大，目前已成為全球共有的重大公共衛(wèi)生問題之一[6-7]。我國是HBV感染的高發(fā)區(qū)，HBV攜帶者約為9.7%，加之當前獻血群體的逐漸擴大，加強對獻血人群的血液篩查避免HBV的傳播愈加重要。

ELISA為傳統(tǒng)的檢測HBV感染的方法，可通過檢測血清中的特異性抗體和抗原，判斷受檢者是否感染HBV，操作方法簡單[8]。但ELISA僅能定性分析，一旦血清標本檢測指標濃度過大，會因鉤狀效應影響而發(fā)生假陰性；在檢測時會受到反復洗板、孔間污染、孔間差異、結(jié)果判定有主觀性等因素的影響，導致檢測穩(wěn)定性欠佳；還易受病毒感染窗口期、病毒變異等因素的影響，導致存在一定的漏檢率；此外，難以定量分析病毒量與感染程度[9]。

本研究結(jié)果提示NAT檢測HBV與ELISA相比，具有靈敏度高、準確度高、特異度高等優(yōu)點。NAT具有易于自動化、核酸標本回收率高等優(yōu)點，能夠經(jīng)核酸擴增指數(shù)檢測血液標本中出現(xiàn)較早的病毒核酸，定量、定性分析HBV感染患者的感染程度，直觀體現(xiàn)HBV活動性、存活與復制水平以及傳染性。HBeAg是判斷血清是否存在傳染性的主要指標，而HBsAg是診斷健康攜帶者與急性乙型肝炎患者的主要指標。HBV-DNA含量越高的患者，其HBV傳染性越強。急性感染/感染慢性期體內(nèi)的HBV無活性；小三陽機體內(nèi)存在少量傳染性不強、復制較弱的HBV，處于感染潛伏狀態(tài)，針對此類患者需積極監(jiān)測病情，及時給予抗病毒治療[10]。大三陽患者體內(nèi)存在大量傳染性強、高度復制的HBV，需實施足量、長期的抗病毒治療。本研究結(jié)果顯示，大三陽HBV-DNA陽性率和含量高于小三陽、急性感染/感染慢性期；小三陽、急性感染/感染慢性期HBV-DNA陽性率和含量比較，差異無統(tǒng)計學意義，提示NAT通過測定HBV-DNA水平可真實反映病毒DNA復制情況和HBV感染狀態(tài)，為早期診斷、治療監(jiān)測以及評估病情轉(zhuǎn)歸提供參考依據(jù)。

綜上所述，與ELISA相比，NAT檢測HBV具有靈敏度高、準確度高、特異度高等優(yōu)點，HBV-DNA水平能反映HBV傳染性，有助于指導臨床治療。