草莓病毒病、脫毒技術(shù)及病毒檢測研究進展

霍辰思，樊新萍，劉 偉

( 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹研究所，山西 太原 030031)

草莓(Rosaceae,Fragaria)在園藝學(xué)上屬漿果類果樹，多年生薔薇科草本植物[1]。其資源類型多樣，適應(yīng)強，栽培面積廣，是一種重要的經(jīng)濟作物。果肉香甜多汁，含有大量微量元素和維生素，營養(yǎng)價值極高，素有“水果皇后”之美稱，是一種深受大眾喜愛的水果。多以無性繁殖為主，其繁殖方式有匍匐莖繁殖、新莖分株繁殖和離體繁殖。然而，通過傳統(tǒng)繁殖方法并不能有效脫除病毒。很多農(nóng)業(yè)企業(yè)只注重產(chǎn)量，對生產(chǎn)中出現(xiàn)的病毒病并沒有得到有效重視。由于多年連作，種性退化嚴(yán)重，草莓病毒病嚴(yán)重影響產(chǎn)量。其主要表現(xiàn)為植株生長緩慢、葉片皺縮見斑駁、果實畸形品質(zhì)變差[2]。 目前，草莓斑駁病毒、草莓輕型黃邊病毒、草莓鑲脈病毒、草莓皺縮病毒和草莓潛隱環(huán)斑病毒是栽培生產(chǎn)上廣泛侵染草莓的幾種病毒[53]。

草莓同馬鈴薯、甘薯、山藥等無性繁殖植物一樣，一旦感染病毒就會傳染給后代。隨著無性繁殖系數(shù)不斷擴大，病毒傳播速度也逐漸加快。草毒植株本身對病毒并沒有免疫能力，目前尚沒有特效方法或外用藥劑可以治愈病毒病，獲得草莓無病毒苗的有效方法仍是通過組培脫毒，得到無病毒原種植株，然后將無病毒苗進行擴繁，從而達到滿足市場的需求量[4]。目前，在草莓病毒脫除方面，熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒法國內(nèi)外普遍采用的一種方法[5-6]，但這種方法存在操作時技術(shù)難度大、培養(yǎng)周期耗時長、脫毒環(huán)境要求高、脫毒苗成活率低等問題。本文通過對草莓病毒病的研究現(xiàn)狀、脫毒技術(shù)及病毒檢測鑒定等方面的研究進行綜述，以期對草莓生產(chǎn)起到指導(dǎo)作用。

1 草莓主要病毒病類型

1.1 草莓斑駁病毒(strawberry mottle virus, SMoV)

草莓斑駁病毒又叫草莓輕型皺縮病毒，屬伴生豇豆病毒科(Secoviridae)、(Sadwavirus)病毒屬[2]。病毒粒子形狀為球形，通常存在于植株葉片的表層、韌皮部以及薄壁細(xì)胞里。1938年，第1次在英格蘭鳳梨草莓上發(fā)現(xiàn)該病毒，存在范疇廣。該病毒屬典型的半持久類蚜蟲傳染，其傳播途徑以草莓釘毛蚜為主，托馬斯毛管蚜、花毛管蚜、棉蚜等蚜蟲皆可傳播。通過嫁接和機械接種進行傳染；不能通過草莓種子傳染，植株間相互觸碰也不會被傳染。感染該病毒草莓的主要癥狀為：葉脈透明水漬化、脈序雜亂，葉片褪綠見斑駁，植株矮化；病癥隨季節(jié)變化其表現(xiàn)略有不同或無癥狀，但隨著侵染時間延長，也會導(dǎo)致植株生長勢減弱，產(chǎn)量降低。

1.2 草莓鑲脈病毒 (strawberry vein band virus, SVBV)

草莓鑲脈病毒屬花椰菜花葉病毒科(Caulimoviridae)、花椰菜病毒屬(Caulimovirus)[2]。病毒粒子體積較大，呈球型，沒有包膜。通常于細(xì)胞質(zhì)里進行復(fù)制，依附于葉片表面、植株表皮、跟木質(zhì)部連接的維管束以及細(xì)胞質(zhì)。英國科學(xué)家于1952年從美國、巴西等地引進的草莓品種Fairfax上首次發(fā)現(xiàn)該病毒，隨后在全球范圍廣泛傳播。它屬于半持久性蚜傳病毒，同草莓斑駁病毒類似，主要通過草莓釘毛蚜進行傳播；鑒于其在傳播媒介里不能進行復(fù)制，所以無法通過汁液傳染，也不能通過種子及花粉傳染。研究發(fā)現(xiàn)：弗吉尼亞草莓、叢林草莓、智利草莓等被該病毒侵染后植株癥狀為葉脈發(fā)黃、葉片邊緣呈不規(guī)則黃色、新葉細(xì)弱畸形等。由于該病毒來源復(fù)雜，不同地域壞境下SVBV基因組分子存在差異，這也導(dǎo)致危害特點、傳播媒介各不相同。

1.3 草莓皺縮病毒 (strawberry crinkle virus,SCV)

草莓皺縮病毒屬彈狀病毒科(Rhabdoviridae)，細(xì)胞質(zhì)彈狀病毒屬(Cytorhabdovirus)[2]。病毒學(xué)家普遍認(rèn)為草莓潛 A 和潛 B 病毒與SCV 同屬一類病毒?，F(xiàn)如今，大范疇存在于國內(nèi)外，還有著株系分化的情況。病毒粒子形狀呈子彈狀，通常依附在植株表皮、導(dǎo)管跟篩管周圍的軟體組織細(xì)胞里。該病毒的傳播媒介通常是草莓釘毛蚜，傳染性持久，可以在昆蟲的體內(nèi)完成復(fù)制，還可以通過接種及嫁接的形式傳播；植株彼此觸碰不會發(fā)生傳染，種子跟花粉同樣不會傳播病毒。在生產(chǎn)上主要危害叢林草莓，受其侵染后，花瓣變形缺瓣，植株葉片畸形，葉脈邊緣出現(xiàn)大面積不規(guī)則褪綠斑及壞死斑，葉脈由綠色變?yōu)樗疂n透明狀，幼葉生長大小不均，皺縮扭曲，小葉黃化，植株矮化、果實畸形，嚴(yán)重制約草莓產(chǎn)量。

1.4 草莓潛環(huán)斑病毒(strawberry latent ringspot virus, SLRSV)

草莓潛環(huán)斑病毒屬豇豆花葉病毒科(Secoviridae)，線蟲傳多面體病毒屬(Nepovirus)[2]。通常存在于歐洲、美國及俄羅斯等國家，中國目前尚未發(fā)現(xiàn)該病毒。病毒粒子形狀尚不確定，有文獻報道其粒子形態(tài)為球型。主要以長劍線蟲為媒介傳播。主要感染種球、苗木以及塊莖。植株受到病毒侵染后，主要表現(xiàn)為葉片畸形、褪綠黃化；植株矮小、果實品質(zhì)下降，危害嚴(yán)重時可絕產(chǎn)。

1.5 草莓輕型黃邊病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)

草莓輕型黃邊病毒屬甲型線性病毒科(Alphaflexiviridae)、暫定為馬鈴薯Χ病毒屬(Potexvirus)[2]。蘇代發(fā)[2]在文獻中闡述，在1992年時，這種病毒首次發(fā)現(xiàn)于美國加州，之后澳大利亞、歐洲和日本等地相繼發(fā)現(xiàn)此病毒，現(xiàn)如今在國內(nèi)外廣泛傳播。病毒粒子呈線性，屬單鏈正義RNA。該病毒傳播媒介通常是草莓釘毛蚜，不能在其他傳播媒介中繁殖。這種病毒單獨侵染危害小，通常是跟其他多種病毒共同侵襲植株。受病毒復(fù)合侵染后表現(xiàn)：嫩葉綠色褪除出現(xiàn)黃色斑點，老葉出現(xiàn)壞死條斑，葉片大面積枯死，植株變矮，果實畸形、果品變差，極大程度影響草莓產(chǎn)量。

2 草莓脫毒技術(shù)

2.1 草莓莖尖培養(yǎng)脫毒

植物莖尖分生組織由不斷分裂的細(xì)胞組成，由于其生長旺盛、細(xì)胞分裂快，且在1.0 mm范圍內(nèi)受病毒浸染小。因此，生產(chǎn)上廣泛使用的方法仍是草莓莖尖脫毒[13]。Belkengren and Miller最早應(yīng)用組培法獲得了草莓無病毒苗，法國學(xué)者Morel[14]證明已感染病毒的植株通過莖尖分生組織培養(yǎng)，可以恢復(fù)成無病毒植株。莖尖大小直接影響著脫毒效果，由于病毒廣泛存在于無維管束的分生區(qū)域內(nèi)，需依靠胞間連絲進行傳遞，莖尖分生區(qū)域的細(xì)胞分裂、生長速度較快，病毒的傳遞速度較莖尖分生細(xì)胞慢，所以生長點病毒含量最低[15]。然而，組培中剝?nèi)∏o尖大小直接影響其脫毒率，莖尖越小脫毒率越高，而成活率卻有所降低，且剝?nèi)》秶叫〔僮麟y度越大。因此，掌握合適的剝?nèi)》秶鷮γ摱韭屎统苫盥手陵P(guān)重要。沈磊、童堯明[51]等切取草莓莖尖分生組織0.2～0.4 mm進行組培，出苗率為83%～90%，脫毒率高達100%。高山林[16]把切取的草莓芽沖洗后，通過高溫、短時間快速熱處理，用莖尖培養(yǎng)法獲得無病毒草莓苗。高遐虹[17]在試驗中采用二次脫毒方法：即第1次不剝離莖芽的苞葉,直接切割莖尖進行組培脫毒，將培養(yǎng)2個月后的組培苗從瓶中取出，再次切取0.4～0.6 mm的莖尖進行第2次脫毒培養(yǎng)，獲得分化率和脫毒率分別為79.2%和84.5%的草莓脫毒苗。何歡樂[18]等研究表明：取大約0.5 mm莖尖進行二次脫毒培養(yǎng)，脫毒率高達100%，但成活率卻大大降低為26%。綜合前期研究表明，采用莖尖脫毒，莖尖大小通?？刂圃?.2～0.4 mm左右，脫毒率最高。若熱處理時間過長，會阻礙莖尖正常生長，導(dǎo)致存活率下降。綜上所述，傳統(tǒng)莖尖培養(yǎng)及二次脫毒莖尖培養(yǎng)技術(shù)雖是獲得無毒苗的有效手段，但存在操作復(fù)雜耗時長、工作效率低的問題。因此，摸索出一套高效、快捷、簡便的脫毒方法至關(guān)重要。

2.2 熱處理脫病毒

自然界大多數(shù)的病毒粒子都有不耐高溫特性，熱處理脫毒就是利用高溫能使病毒粒子失活，達到滅活效果[21]。熱處理包括熱水處理和熱氣處理，目前脫毒效果較好的方法是利用恒溫或變溫的熱空氣處理帶病植株，剪取熱處理后長出的新芽進行嫁接或進行組織培養(yǎng)，得到無病毒的草莓原種植株。肖君澤[19]通過37～38 ℃恒溫或35～38 ℃變溫處理草莓莖尖，有效降低熱處理后植株死亡率。廖俊杰[20]等將育苗缽培養(yǎng)的草莓苗于38 ℃恒溫箱處理15 d后并沒有脫除病毒，處理90 d后脫毒率僅為66%。劉健[21]在文獻中表述莖尖在 40 ℃與42 ℃水浴處理的脫毒率均可達100%，綜合考慮成活率與脫毒率，熱處理溫度以40 ℃為好。

2.3 化學(xué)試劑脫毒

化學(xué)療法脫毒就是利用化學(xué)試劑在植物體內(nèi)可以延遲或是抑制病毒復(fù)制，從而使植物擺脫病毒的一種外界干預(yù)法。該方法對莖尖大小要求不高，無需特定范圍的莖尖也能得到較好的脫毒效果。對于化學(xué)藥劑處理脫毒的機制尚未有很深入的研究，目前植物脫毒的化學(xué)試劑主要有三氮唑核苷(病毒唑)、5-二氫尿嘧啶(DHT)、放線菌素、堿性孔雀綠及環(huán)乙酰胺等，其中病毒唑是應(yīng)用最廣的化學(xué)試劑。1953-1954年，D.Norris最早將孔雀綠用于馬鈴薯無病毒苗培育，脫掉了馬鈴薯X病毒，獲得了馬鈴薯無病毒苗。廖俊杰[20]等采用培養(yǎng)基化學(xué)療法和田間化學(xué)療法進行對比試驗，在培養(yǎng)基中加入化學(xué)試劑后切取適當(dāng)莖尖進行組培，獲得比對照(田間化學(xué)療法)高70%的脫病毒率。秦梅[22]在甘薯脫毒培養(yǎng)基中加入10 mg/L的三氮唑核苷后，脫毒率可達到76%。Cassells[23]等將病毒唑加入培養(yǎng)基中，通過組培可脫除馬鈴薯多種病毒。通過化學(xué)療法雖然能得到脫病毒植株，但是會有輕度藥害現(xiàn)象發(fā)生。有研究表明其毒性會遺留在新生植株內(nèi)，隨后進入人體，與現(xiàn)在提倡的綠色環(huán)保無公害作物相駁。出于安全實效性考慮，很難在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

2.4 熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合脫毒

利用傳統(tǒng)的熱處理脫毒，由于莖尖在高溫、高濕環(huán)境下處理時間過長，植株易枯死、容易受紅蜘蛛、蚜蟲等昆蟲危害。且不同病毒對高溫的耐受性不同，單純依靠熱處理并不能有效脫除病毒。而熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合比常規(guī)脫毒效果更好，目前該技術(shù)在生產(chǎn)上普遍使用。王際軒[24]將生長旺盛的草莓盆栽苗于38～40 ℃溫度下熱處理42 d，選取熱處理后大小合適的莖尖進行組織培養(yǎng)，脫毒率能達到70%左右。何歡樂[46]在草莓莖尖培養(yǎng)脫毒效果研究中采用改良熱處理莖尖培養(yǎng)法，先將草莓匍匐莖于40 ℃水浴處理4 h后，剝?nèi)?0.5～0.6 mm左右的莖尖進行培養(yǎng)，獲得47.37%莖尖成活率。劉健[21]在試驗中設(shè)計40 ℃和42 ℃兩個溫度梯度，處理后的莖尖脫毒率均可達到100%，但鑒于時間長短對莖尖有影響力，一般采用40 ℃處理4h為宜。李志強[25]等以草莓品種“紅顏”、“章姬”為試材，篩選出莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.02 mg/L，并建立其組培快繁體系。顧地周[26]采用均勻設(shè)計法，將已感染了斑駁病毒和皺縮病毒的草莓試管苗在試管內(nèi)誘導(dǎo)匍匐莖，再將帶有匍匐莖的試管苗直接進行56 ℃高溫處理后，切取1 mm的莖尖在LS+6-BA 1.00 mg/L+GA3 1.90 mg/L+KT 1.00 mg/L培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，通過病毒檢測和栽培觀察可知，脫毒率高達100%。

2.5 超低溫脫毒

超低溫脫毒是一種新型高效脫毒技術(shù)，較傳統(tǒng)脫毒法而言，其脫毒效率更高，且對莖尖大小無要求。超低溫冷凍療法是兼植物種質(zhì)資源保護與脫毒雙重作用的一種脫毒方法，其作用原理是[27]：利用莖尖分生組織細(xì)胞與分化細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的差異進行脫毒。由于莖尖分生組織細(xì)胞體積較小、液泡小和較大核質(zhì)體積比等特點，脫水更容易，在液氮環(huán)境中不易被凍死；而莖尖分化細(xì)胞體積較大，含有較大的液泡和較小的核質(zhì)比，脫水處理較難，在超低溫環(huán)境下易被凍死。此外，莖尖分生組織病毒含量少，而分化組織往往是病毒富集區(qū)。因此，當(dāng)液氮處理分生組織后，受傷死亡的細(xì)胞大部分都是分化細(xì)胞，而保留下來的不含病毒分生組織，可通過組織培養(yǎng)獲得無病毒植株[27]。Brison等(1997)首次運用超低溫脫毒法脫除李痘包病毒(Plumpoxvirus,PPV)，獲得李無病毒植株。此后，超低溫冷凍療法開始普遍應(yīng)用于植物脫毒。目前，超低溫脫毒技術(shù)已經(jīng)在百合[28]、甘薯[29]、馬鈴薯[30]、黃瓜[31]、葡萄[29]、柑橘[32-33]、香蕉[31]、櫻桃[34]、獼猴桃[35]等植物脫除病毒上廣泛應(yīng)用，對于草莓研究報到較少。羅婭[37]優(yōu)化超低溫脫除體系，草莓的莖尖存活率為69%，多種草莓病毒被脫除，脫除率高達100%。盛宏亞[38]以攜帶草莓斑駁病毒(SMoV)“紅顏”為供試材料，建立預(yù)防“紅顏”草莓的莖尖玻璃化超低溫脫毒體系。利用RT-PCR技術(shù)檢測草莓斑駁病毒的脫毒效果，脫毒率為100%。陳曦[39]以“福莓1號”為試材，利用莖尖超低溫冷凍脫毒技術(shù)將外植體低溫鍛煉2周后，莖尖在預(yù)培養(yǎng)基上暗培養(yǎng) 3 d，1/2濃度 PVS2溶液及全濃度PVS2溶液冰上冷處理2次，液氮冷凍 1 h后，在39 ℃的水浴中快速化凍2 min，卸載后莖尖先暗培養(yǎng)3 d后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)，再生培養(yǎng)成活率約30%，病毒脫除率為100%。

3 草莓無病毒苗鑒定與繁殖

3.1 草莓病毒病檢測方法

采用上述脫毒技術(shù)獲得的草莓苗并不一定能夠完全脫毒，因此需要對脫毒后的草莓苗進行病毒檢測。無病毒苗的鑒定主要有生物學(xué)鑒定、血清學(xué)檢測法、電鏡檢測法等[47]。目前，分子PCR 技術(shù)也被廣泛應(yīng)用到草莓病毒檢測中[40]。生物學(xué)鑒定法又稱指示植物檢測法，是最早應(yīng)用于植物病毒檢測的方法，目前仍被廣泛應(yīng)用[47]。該檢測方法可以直接觀察到檢測結(jié)果，無需特定儀器設(shè)備，操作簡單易掌握。不過檢測時間耗時長，受外界環(huán)境因素影響大，容易出現(xiàn)檢測結(jié)果的假陽性，降低其檢測的靈敏度[48]。血清學(xué)病毒檢測法應(yīng)用較早，該方法利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)，來鑒定植物是否攜帶病毒[49]。常見的血清學(xué)檢測方法有沉淀反應(yīng)、凝聚反應(yīng)(VBA)、酶聯(lián)免疫的吸附法(ELISA)、免疫熒光技術(shù)(IFA)、斑點免疫測定法(DIBA)以及免疫膠體金技術(shù)(GICT)[49]等，這些方法具有較高的檢測靈敏性，能夠快速的檢測到草莓病毒，操作也相對簡易方便。但由于其檢測時常依賴血清的品質(zhì)，可被鑒定的病毒種類受到限制。目前僅有少部分果樹病毒的抗血清可被利用，草莓病毒檢測中，只有草莓輕型黃斑病毒和草莓皺縮病毒抗血清制備成功[50]。電子顯微鏡技術(shù)在生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病毒學(xué)等多個生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，不僅能夠直觀、準(zhǔn)確的觀察到植物表面特征，還可以對病毒機理進行深入的內(nèi)在挖掘。由于設(shè)備價格昂貴，對實驗人員操作技術(shù)要求高，并沒有廣泛應(yīng)用到植物檢測實際工作中。但電子顯微技術(shù)作為輔助檢測技術(shù)，在分子生物學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著不可磨滅的作用[41]。分子生物學(xué)檢測法以核酸分子雜交為基礎(chǔ)，成為當(dāng)前病毒檢測最主要方法。因其檢測時靈敏度高、特異性強，不受季節(jié)、外界環(huán)境影響，采樣后可隨時進行大批量檢測，發(fā)揮著血清學(xué)檢測法及傳統(tǒng)病毒檢測法無法比擬的優(yōu)勢。目前，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測法、以RNA分子轉(zhuǎn)錄為基礎(chǔ)的NASBA檢測法、核酸雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)等是分子生物學(xué)檢測的常用手段[3]。

3.2 草莓脫毒苗繁育技術(shù)

草莓脫毒苗較傳統(tǒng)繁殖方式有較大優(yōu)勢，其在植物學(xué)性狀、果實品質(zhì)、豐產(chǎn)性等各項指標(biāo)均優(yōu)于普通繁殖苗。大量研究表明，栽培無病毒的草莓苗，能夠提高草莓的質(zhì)量。草莓果實著色正常，果形整齊，畸形果率降低[19]。這些都為草莓優(yōu)質(zhì)、商品化生產(chǎn)提供有力保障。在現(xiàn)代化草莓種苗擴繁基地，脫毒苗的組織培養(yǎng)為種苗生產(chǎn)發(fā)揮關(guān)鍵性作用[52]。在脫毒快繁過程中不僅要提高組培苗的增殖率和成活率，還要求對培養(yǎng)基濃度、培養(yǎng)容器種類及凝固劑種類等進行優(yōu)化篩選，在保證種苗生產(chǎn)質(zhì)量的基礎(chǔ)上達到降低生產(chǎn)成本，找到節(jié)能、環(huán)保、高效的繁育技術(shù)。張恒[42]等用蛭石 + IBA 溶液作為草莓大苗沙盤生根培養(yǎng)基，利用保鮮膜對沙盤進行保濕，可保障草莓繼代培養(yǎng)的大苗在沙盤里生根。將該技術(shù)應(yīng)用于草莓脫毒苗的擴繁，可節(jié)約大量成本。謝文申[43]以脫毒野薄荷試管苗為外植體，用30 g/L食用白糖代替蔗糖、用涼開水代替蒸餾水配置淺層液體培養(yǎng)基，比普通固體培養(yǎng)基節(jié)約成本 57.44%。張春芬[44]為降低草莓脫毒組培苗的生產(chǎn)成本，用白砂糖替換蔗糖、卡拉膠替換瓊脂粉，總成本降為原來的 32.5%。采用帶塑料瓶蓋的玻璃瓶，可大大節(jié)省勞動力，提高生產(chǎn)效率。另外，隨著生物技術(shù)發(fā)展，脫毒草莓苗的培育更傾向于集生物工程、病毒學(xué)檢測和快繁農(nóng)藝技術(shù)為一體的栽培模式，應(yīng)將這一高新技術(shù)系統(tǒng)化、高效化、實用化的應(yīng)用到草莓生產(chǎn)中。

4 展望

近年來，隨著綠色生態(tài)種植農(nóng)業(yè)的蓬勃發(fā)展，草莓種植面積逐年增加。由于其生長周期短、采摘方便，草莓生態(tài)園自助采摘模式已成為深受市場青睞的一項新型產(chǎn)業(yè)。脫毒草莓苗在生產(chǎn)上的應(yīng)用，極大提高了種植者積極性。而草莓病毒病嚴(yán)重制約草莓高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)進程，重茬種植造成草莓品種單一、種性退化。為了滿足市場上草莓周年供應(yīng)，建立完善的種苗繁育體系、標(biāo)準(zhǔn)化草莓病毒檢測中心[40]，從源頭上管控草莓病毒，引進脫毒成功的草莓品種尤為重要。由于草莓病毒病多為復(fù)合型病毒感染，單一應(yīng)用傳統(tǒng)的脫毒方法并不能達到良好的脫毒效果，生產(chǎn)上應(yīng)該采取多種脫毒方法混合使用。隨著基因工程的發(fā)展，生物技術(shù)的廣泛應(yīng)用為草莓脫毒及無病毒苗鑒定開辟了新的途徑。目前，草莓脫毒苗繁育體系雖然有了一定的發(fā)展，但是組培快繁技術(shù)成本高、操作環(huán)節(jié)嚴(yán)謹(jǐn)難度大、資源浪費嚴(yán)重，需進一步探索符合生產(chǎn)實際、節(jié)能環(huán)保高效的繁育體系，促進草莓業(yè)健康發(fā)展。