誘導(dǎo)型一氧化氮（iNOS）與TGF-β1通路在膀胱纖維化中的相關(guān)性研究

呂禹潼，李守林

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，深圳市兒童醫(yī)院，廣東 深圳 518000）

1 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶iNOS和膀胱纖維化

NO是人體細(xì)胞中的重要信號(hào)分子之一，在細(xì)胞信息的傳遞和作用的調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著不可比擬的作用，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)它在神經(jīng)信號(hào)傳遞、感染和腫瘤免疫中起著重要作用[6-7]。

李守林[8]等留取膀胱組織標(biāo)本，采取免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)膀胱組織中nNOS、iNOS和eNOS三種蛋白表達(dá)狀況發(fā)現(xiàn)：在正常的膀胱組織中，nNOS主要是分布在膀胱頸，即在膀胱頸以nNOS表達(dá)為主，iNOS陰性表達(dá)；而神經(jīng)源性膀胱組織中氮能神經(jīng)元分布比較稀疏，nNOS低表達(dá)或陰性表達(dá)，eNOS低表達(dá)，而iNOS表達(dá)較正常膀胱組織相比明顯上調(diào)，這也提示iN0s可能是NO產(chǎn)生的主要來(lái)源，NO的合成受iNOS水平調(diào)節(jié)。而神經(jīng)源性膀胱基本病理改變?yōu)榘螂桌w維化，提示iNOs可能在膀胱纖維化的形成中起到重要作用。

DIANE FELSEN[9]等采用大鼠膀胱出口半梗阻的方法模擬神經(jīng)性膀胱逼尿肌纖維化的病變過(guò)程，檢測(cè)到iNOSmRNA含量明顯增高。結(jié)論證實(shí)：膀胱出口部分梗阻后，一氧化氮合酶（iNOS）濃度的降低可導(dǎo)致膀胱功能的改善，減輕膀胱纖維化病變，這提示NO參與膀胱出口梗阻的病理生理過(guò)程。

Austin PF[10]等將人類膀胱平滑肌細(xì)胞分別置于含有細(xì)菌脂多糖和炎性細(xì)胞因子復(fù)合物以及iNOS抑制劑鹽酸氨基胍（aminoguanidine）的干預(yù)條件下觀察細(xì)胞成分變化，檢測(cè)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，經(jīng)細(xì)菌脂多糖（LPS）和炎性細(xì)胞因子復(fù)合物干預(yù)處理后，人類膀胱平滑肌細(xì)胞中Ⅲ型膠原纖維、iNOS mRNA，iNOS蛋白、iNOS生物活性均有顯著提高；而在iNOS抑制劑鹽酸氨基胍的干預(yù)處理后，細(xì)胞Ⅲ型膠原纖維表達(dá)明顯受到了抑制。因此提出iNOS可能是介導(dǎo)膀胱纖維化的關(guān)鍵因素，iNOS抑制劑在膀胱纖維化的治療中存在價(jià)值。因此，如果在膀胱纖維化早期及時(shí)采取臨床措施干預(yù)治療，也許可以緩解纖維化進(jìn)程或延緩病情的進(jìn)展。然而由iNOS生成的NO致膀胱纖維化中存在的可能機(jī)制目前尚不明確，探究iNOS/NO通路致膀胱膠原纖維的沉積的具體機(jī)制對(duì)膀胱纖維化的治療有重要意義，也是該類研究方向的重點(diǎn)與難點(diǎn)。

2 TGFβ-1與膀胱纖維化

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）家族是一個(gè)多功能的生長(zhǎng)因子超家族，在生命活動(dòng)中起著廣泛的調(diào)節(jié)作用。涉及各類生物形態(tài)發(fā)生、胚胎發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、創(chuàng)傷愈合、炎癥及腫瘤形成等[11]。目前諸多研究表明，長(zhǎng)期的慢性炎癥與器官纖維化的關(guān)系甚為密切，而TGF-β家族在器官纖維化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，均表現(xiàn)出特殊的作用[12]。TGF-β有三種亞型，分別是轉(zhuǎn)分化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、轉(zhuǎn)分化生長(zhǎng)因子β2（TGF-β2）、轉(zhuǎn)分化生長(zhǎng)因子β3（TGF-β3）。其中TGF-β1是TGF-β家族的一個(gè)主要分型，可以由平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生，調(diào)節(jié)器官平滑肌的生長(zhǎng)、分化、遷移、擴(kuò)散以及細(xì)胞外基質(zhì)沉積，對(duì)成纖維細(xì)胞生物活性的調(diào)控發(fā)揮著重要作用，是皮膚細(xì)胞外基質(zhì)生物合成的最主要的調(diào)節(jié)因子[13]。最新研究已表明，TGF-β1在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）與纖維形成有重要作用[14]。并且，現(xiàn)有研究已經(jīng)觀察到在肺，肝臟和腎臟纖維化中TGF-β1水平明顯上調(diào)。He-He Hu[14]等人總結(jié)并闡述了TGF-β1在多種器官纖維化中的作用。

孫小兵[15]等采用臨床病例對(duì)照研究探究神經(jīng)性膀胱逼尿肌纖維化與TGF-β1表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果表明：神經(jīng)源性膀胱患兒膀胱逼尿肌標(biāo)本TGF-β1mRNA的表達(dá)與Ⅲ型膠原的表達(dá)呈正相關(guān)。從而證明TGF-β1在膀胱逼尿肌纖維化中同樣起重要作用。

3 iNOs與TGF-β1在多種器官組織纖維化中的相關(guān)性

3.1 iNOs、TGF-β1與骨纖維化

吳巍[16]等利用種植型牽張器增高兔下頜牙糟嵴，研究一氧化氮合酶（NOS）與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）在牽張成骨過(guò)程中的相關(guān)性。證實(shí)在骨纖維化過(guò)程中TGF-β對(duì)iNOS起正性調(diào)控作用，同時(shí)iNOS又可以通過(guò)NO對(duì)TGF-β1起負(fù)反饋?zhàn)饔谩?/p>

3.2 iNOs、TGF-β1與肝纖維化

DANIELA-ELISE TACHE[17]和他的團(tuán)隊(duì)研究了病毒性肝炎細(xì)胞中iNOs和TGF-β1表達(dá)之間的相關(guān)性，即纖維化程度較低的樣本表現(xiàn)出iNOs和TGF-β1低表達(dá)，而在那些高度纖維化的樣本中兩者蛋白表達(dá)均增加。

3.3 iNOs、TGF-β1與腎纖維化

Ling Gao[18]等人用免疫印跡法檢測(cè)NOX1、NOX2、NOX4、iNOS蛋白表達(dá)。利用特異性RNAi技術(shù)對(duì)NOX進(jìn)行基因沉默，研究糖尿病環(huán)境下NOX與iNOS的相互作用對(duì)腎纖維化的影響。分別用二氫乙錠和羥基苯基熒光素測(cè)定過(guò)氧化物和過(guò)氧亞硝酸鹽的產(chǎn)量。用生物化學(xué)方法測(cè)定纖維因子。NOX1、NOX2、NOX4、超氧化物、過(guò)氧亞硝基、TGF-β蛋白在糖尿病環(huán)境中的表達(dá)明顯增加。然而，用1400 w抑制iNOS或?qū)NOS基因敲除后，過(guò)氧亞硝基，TGF-β及纖連蛋白產(chǎn)物可恢復(fù)至基礎(chǔ)水平并大大減弱過(guò)氧化物生產(chǎn)。由此說(shuō)明iNOS在糖尿病腎纖維化過(guò)程中對(duì)TGF-β的產(chǎn)生有抑制作用，并且該作用在一定條件下是可以逆轉(zhuǎn)的。

4 總 結(jié)

膀胱纖維化常見(jiàn)于膀胱疾病如糖尿病性膀胱疾病、膀胱出口梗阻、放射性膀胱炎、化學(xué)性膀胱炎、間質(zhì)性膀胱炎、泌尿系腫瘤、反復(fù)泌尿系感染、氯胺酮性膀胱纖維化、神經(jīng)源性膀胱等。目前認(rèn)為，器官纖維化是一個(gè)不可逆的過(guò)程，無(wú)論哪個(gè)器官發(fā)生纖維化，都會(huì)對(duì)該器官正常發(fā)揮其功能造成影響。探究iNOS/NO通路與TGF-β1通路在膀胱纖維化中的相關(guān)性研究可以為針對(duì)不同病情階段使用選擇性通路阻斷劑、及時(shí)采用藥物或手術(shù)干預(yù)來(lái)延緩及治療膀胱纖維化提供指導(dǎo)方向，對(duì)更有效地預(yù)防膀胱發(fā)生纖維化的發(fā)生、改善膀胱纖維化患兒治療效果及愈后、提高患兒的生活質(zhì)量都有重要意義。